检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学通报 2010年第9期37卷 1312-1319页

作者：郑海学靳野尚佑军郭建宏田宏杨亚民刘湘涛才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为了查明Asia1型FMDV第Ⅴ群猪源和牛源毒株的序列差异,采用RT-PCR方法,对Asia1型FMDV第Ⅴ群猪源分离毒株Asia1/HN/06的基因组全序列进行了扩增和测序,并与第Ⅴ群牛源和猪源参考毒株基因组进行比较分析。结果表明,Asia1/HN/06毒株全基因... 详细信息

为了查明Asia1型FMDV第Ⅴ群猪源和牛源毒株的序列差异,采用RT-PCR方法,对Asia1型FMDV第Ⅴ群猪源分离毒株Asia1/HN/06的基因组全序列进行了扩增和测序,并与第Ⅴ群牛源和猪源参考毒株基因组进行比较分析。结果表明,Asia1/HN/06毒株全基因组序列长约8236nt[含38个A的poly(A)尾],其中5'NCR长1116nt,前导蛋白(L)编码区长603nt,结构蛋白与非结构蛋白编码区的核苷酸序列为6990nt,3′NCR长93nt,3′端是至少含有38个A的poly(A)尾巴。猪源毒株和牛源毒株的全基因比较分析表明,属于第Ⅴ群,全基因编码区核苷酸和氨基酸的同源性均为98.0%,主要差别是猪源毒株Asia1/HN/06在细胞受体结合位点变为RDD和155位置的N变为S或D,该群毒株3A更具有猪源毒株特征,有4个特异性氨基酸变异。明确了Asia1型FMDV第Ⅴ群猪源和牛源毒株的序列差异,为进一步利用反向遗传技术研究猪源和牛源毒株差异位点或基因在病毒表型变异中的作用奠定基础。

关键词： FMDV 全基因组受体结合位点 3A基因

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A型口蹄疫病毒型特异性抗原的可溶性原核表达及多克隆抗体的制备

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中国人兽共患病学报 2010年第9期26卷 821-824页

作者：高闪电常惠芸独军政丛国正邵军军林彤中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

目的可溶性表达A型口蹄疫病毒型特异性结构蛋白VP1,制备型特异性的兔抗A型FMDV VP1多克隆抗体。方法以A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因重组克隆载体pGEM-AVP1为模板,设计表达引物,经PCR扩增获得上游带有OmpT信号肽编码序列的VP1基因编码区... 详细信息

目的可溶性表达A型口蹄疫病毒型特异性结构蛋白VP1,制备型特异性的兔抗A型FMDV VP1多克隆抗体。方法以A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因重组克隆载体pGEM-AVP1为模板,设计表达引物,经PCR扩增获得上游带有OmpT信号肽编码序列的VP1基因编码区,将其克隆至该表达载体pET-30a(+)中,构建可溶性原核表达载体pET-30a-OmpT-AVP1。将该重组质粒转化大肠杆菌工程菌株BL21-(DE3)-plysS,经IPTG诱导表达,以金属离子螯合层析法对可溶性表达的VP1融合蛋白进行纯化,然后用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔制备其多克隆抗体,以ELISA、Western blot和间接免疫荧光法分别对多克隆抗体进行鉴定。结果 SDS-PAGE电泳分析显示pET-30a-OmpT-AVP1重组菌经诱导后表达一Mr约为33 000的VP1融合蛋白,与预期结果相符。目的蛋白纯化后,在电泳图片上显示较为清晰的单一条带。Western blot分析结果显示,VP1蛋白可与豚鼠抗A型口蹄疫病毒阳性血清反应。用纯化VP1蛋白免疫新西兰大耳白兔制备的多克隆抗体效价达1∶12 800以上,具有较高的型特异性,并且可与同型FMDV细胞培养物中的病毒抗原发生反应。结论制备了具有高亲和性和特异性的兔抗A型FMDV结构蛋白VP1多克隆抗体,为A型FMDV易感动物的抗体筛查及病原鉴定奠定了基础。

关键词： A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1 原核表达可溶性 OmpT信号肽

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氯霉素和四环素阻碍细菌蛋白分泌研究进展

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中国生物工程杂志 2010年第7期30卷 97-100页

作者：吴琼靳野郑海学刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

氯霉素和四环素发挥活性的一个途径就是阻碍细菌蛋白质的分泌,其分泌功能是由其氨基端的信号序列决定的,该序列能将蛋白质引导到由SecY,E,G和A组成的转运蛋白复合体上。蛋白的转运还取决于融合蛋白的折叠特点,蛋白质转运到周质后的错误... 详细信息

氯霉素和四环素发挥活性的一个途径就是阻碍细菌蛋白质的分泌,其分泌功能是由其氨基端的信号序列决定的,该序列能将蛋白质引导到由SecY,E,G和A组成的转运蛋白复合体上。蛋白的转运还取决于融合蛋白的折叠特点,蛋白质转运到周质后的错误折叠可导致毒素聚集体形成,快速折叠还会使转运复合体发生拥堵,使所有的蛋白质分泌都受到抑制,导致细胞死亡。抗生素氯霉素和四环素处理细菌后会导致转运复合体中SecY的降解,造成致命的蛋白拥堵。现就抗生素氯霉素和四环素的干扰细菌蛋白质合成的作用机制以及导致SecY的降解来发挥阻碍细菌蛋白质分泌活性的一个新模式进行概述,以期为探讨新的靶向细菌的治疗方法提供科学依据。

关键词：分泌蛋白转运蛋白复合体蛋白折叠蛋白拥堵

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热休克蛋白免疫学效应与应用研究进展

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中国人兽共患病学报 2010年第6期26卷 587-591页

作者：王景锋邵军军常惠芸郝峰强中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

热休克蛋白(heat shock protein,HSP),又称应激蛋白(stress protein,SP),是一组广泛表达于原核和真核生物细胞中,在进化上高度保守的蛋白质。自从上个世纪70年代由美国学者Tissieres等发现以来,生物学界科学家对HSP的生物学功能进行了... 详细信息

热休克蛋白(heat shock protein,HSP),又称应激蛋白(stress protein,SP),是一组广泛表达于原核和真核生物细胞中,在进化上高度保守的蛋白质。自从上个世纪70年代由美国学者Tissieres等发现以来,生物学界科学家对HSP的生物学功能进行了广泛深入研究。人们发现,HSP的生物学功能广泛.主要表现在:①HSP在应激条件下维持细胞内必需蛋白质的空间构象,从而保护细胞生命活动,[第一段]

关键词：热休克蛋白免疫学效应 protein 真核生物细胞生物学功能应用 HSP 应激蛋白

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口蹄疫病毒与猪水泡病病毒入侵宿主细胞的内化机制研究进展

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中国人兽共患病学报 2010年第11期26卷 1075-1077,1082页

作者：吉艳红刘艳红刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

口蹄疫(foot and mouth disease,FMD)是猪、牛、羊等偶蹄动物的一种高度接触性传染病,其临床表现以口鼻腔粘膜、蹄部等出现水泡或溃烂为特征,与猪水泡病(swine vesicular disease,SVD)极其相似,常以流行形式发病,对养猪业的危害较大。由... 详细信息

口蹄疫(foot and mouth disease,FMD)是猪、牛、羊等偶蹄动物的一种高度接触性传染病,其临床表现以口鼻腔粘膜、蹄部等出现水泡或溃烂为特征,与猪水泡病(swine vesicular disease,SVD)极其相似,常以流行形式发病,对养猪业的危害较大。由于FMD和SVD在临床症状上很难区分,因此给FMD和SVD的诊断带来一定的困难。[第一段]

关键词：口蹄疫病毒养猪业水泡病宿主细胞病毒入侵内化口鼻腔粘膜临床表现

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仔猪心肌原代细胞培养及其对口蹄疫病毒敏感性研究

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中国人兽共患病学报 2010年第10期26卷 912-915页

作者：王光祥尚佑军陈江涛吉艳红刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

目的旨在建立仔猪原代心肌细胞的培养方法,探索O型口蹄疫病毒对易感动物心肌原代细胞的敏感性,为研究O型口蹄疫感染引发幼畜心肌炎致病机理提供细胞模型。方法利用混合消化酶(2g/L胰蛋白酶(trypsin)和1g/LⅡ型胶原酶(collagenase)1∶1混... 详细信息

目的旨在建立仔猪原代心肌细胞的培养方法,探索O型口蹄疫病毒对易感动物心肌原代细胞的敏感性,为研究O型口蹄疫感染引发幼畜心肌炎致病机理提供细胞模型。方法利用混合消化酶(2g/L胰蛋白酶(trypsin)和1g/LⅡ型胶原酶(collagenase)1∶1混合)消化法培养原代心肌细胞;相差显微镜观察心肌细胞生长和波动情况;胎盘蓝对细胞染色,鉴定细胞成活率。将生长良好的原代心肌细胞接种口蹄疫O型乳鼠毒观察其敏感性,同时将该毒接种BHK21细胞做平行对比。结果仔猪原代细胞成活率为95.6%;成活细胞形态完整,部分细胞自行蠕动,当生长成片后可见呈岛屿状搏动。仔猪原代心肌细胞对O型口蹄疫病毒敏感。与BHK21细胞相比,结果无明显差异。结论本试验成功培养了仔猪心肌原代细胞,并且培养的原代细胞对O型口蹄疫病毒敏感。

关键词：猪心肌原代细胞培养 O型口蹄疫敏感性

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RNAi实现方法及在免疫相关基因功能鉴定中的应用

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中国人兽共患病学报 2010年第11期26卷 1067-1070页

作者：魏衍全田宏吴锦艳尚佑军刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是通过内、外源双链RNA触发的,由19—23bp小分子干扰RNA片段(siRNA)诱导的同源性mRNA的降解,从而使该基因表达沉默(gene silence)的过程。它是广泛存在于动、植物中的序列特异性转录后基因沉默,是生物体... 详细信息

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是通过内、外源双链RNA触发的,由19—23bp小分子干扰RNA片段(siRNA)诱导的同源性mRNA的降解,从而使该基因表达沉默(gene silence)的过程。它是广泛存在于动、植物中的序列特异性转录后基因沉默,是生物体在进化过程中,[第一段]

关键词：免疫相关基因功能鉴定 RNAi 转录后基因沉默 RNA干扰应用双链RNA RNA片段

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羊传染性脓疱病毒湖北株的鉴定及分子特征分析

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畜牧兽医学报 2010年第9期41卷 1154-1157页

作者：张克山何继军尚佑军郭建宏郑海学田宏靳野刘永杰王光祥刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

为了确诊疑似羊传染性脓疱病例,分析羊传染性脓疱病毒(Orfvirus,ORFV)的分子特征,作者以湖北某羊场疑似传染性脓疱病料为对象,进行了电镜观察、病理切片染色、特异性目的基因扩增和序列测定及遗传进化关系分析。结果在电镜下观察到ORFV... 详细信息

为了确诊疑似羊传染性脓疱病例,分析羊传染性脓疱病毒(Orfvirus,ORFV)的分子特征,作者以湖北某羊场疑似传染性脓疱病料为对象,进行了电镜观察、病理切片染色、特异性目的基因扩增和序列测定及遗传进化关系分析。结果在电镜下观察到ORFV样粒子,切片HE染色可见有炎性细胞浸润,自病料中扩增出特异性目的ORFVB2L基因片段(GenBank序列号GU320351)。结果表明该病例为黑山羊传染性脓疱病毒引起,序列遗传进化分析表明该病毒和2007年分离于中国台湾的毒株(DQ904351)遗传关系最近,和印度2004到2005年分离于绵羊(DQ263306、DQ263305)、山羊(DQ263304、DQ263303)的ORFV同属于一个进化分支。本研究为ORFV分子流行病学研究积累了资料。

关键词：羊传染性脓疱病毒鉴定分子特征分析

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猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒结构蛋白的研究进展与应用

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中国农学通报 2010年第23期26卷 1-6页

作者：王猛刘永生张杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)属于动脉炎病毒科的单股正义RNA病毒。病毒基因组共有15kb,编码RNA复制酶(ORF1a和ORF1b)、糖基化蛋白(GP2-GP5)、基膜蛋白M(ORF6)和核衣壳蛋白N(ORF7)。其中每一个PRRSV的结构蛋白在病毒的感染及免疫... 详细信息

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)属于动脉炎病毒科的单股正义RNA病毒。病毒基因组共有15kb,编码RNA复制酶(ORF1a和ORF1b)、糖基化蛋白(GP2-GP5)、基膜蛋白M(ORF6)和核衣壳蛋白N(ORF7)。其中每一个PRRSV的结构蛋白在病毒的感染及免疫原性等的作用均不相同。笔者对PRRSV结构蛋白最新的研究进展及应用进行综述。

关键词：糖基化蛋白免疫原性小结构蛋白异源二聚体

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转录介导的扩增技术及其在诊断中的应用

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中国生物工程杂志 2010年第4期30卷 120-124页

转录介导的扩增技术可以RNA或DNA为模板,利用RNA聚合酶和逆转录酶在约42°C等温反应条件下进行扩增,产物为RNA。该技术在每一循环可产生模板的100～1000个拷贝转录本,15～30min可将模板扩增约1010倍,在人类白细胞抗原等位基因分型... 详细信息

转录介导的扩增技术可以RNA或DNA为模板,利用RNA聚合酶和逆转录酶在约42°C等温反应条件下进行扩增,产物为RNA。该技术在每一循环可产生模板的100～1000个拷贝转录本,15～30min可将模板扩增约1010倍,在人类白细胞抗原等位基因分型、细菌和病毒的快速检测中发挥了重要作用。

关键词：转录介导的扩增技术恒温扩增诊断

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