检索结果-内蒙古大学图书馆

利用Asia1型口蹄疫病毒VP1蛋白的单克隆抗体建立单抗竞争ELISA方法

安徽农业科学 2009年第23期37卷 11025-11026,11036页

作者：林彤邵军军丛国正独军政高闪电常惠芸谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室甘肃兰州730046

应用纯化的Asia1型口蹄疫病毒VP1蛋白作为抗原,采用过碘酸钠法标记纯化的单抗,建立了单抗竞争ELISA,检测10份阳性猪口蹄疫血清及200多份阴性血清,试验结果与样品的背景相一致。敏感性试验和重复试验结果表明,该方法具有稳定和敏感等特性... 详细信息

应用纯化的Asia1型口蹄疫病毒VP1蛋白作为抗原,采用过碘酸钠法标记纯化的单抗,建立了单抗竞争ELISA,检测10份阳性猪口蹄疫血清及200多份阴性血清,试验结果与样品的背景相一致。敏感性试验和重复试验结果表明,该方法具有稳定和敏感等特性,适合Asia1型猪口蹄疫病毒抗体的监测。

关键词： Asia1型FMDV VP1单抗竞争ELISA

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口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白αvβ6的细胞定位及组织分布

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畜牧兽医学报 2009年第4期40卷 533-537页

作者：赵建勇常惠芸独军政高闪电宋帅伏小平谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

利用pcDNA3.1(+)-β6p真核表达载体稳定转染CHOK1细胞,间接免疫荧光法(IFA)检测整联蛋白αvβ6在转染细胞中的表达分布。以间接免疫组化法(IHA)检测整联蛋白αvβ6在健康猪舌、唇、气管等组织的表达分布。采用抗猪源整联蛋白β6亚基的... 详细信息

利用pcDNA3.1(+)-β6p真核表达载体稳定转染CHOK1细胞,间接免疫荧光法(IFA)检测整联蛋白αvβ6在转染细胞中的表达分布。以间接免疫组化法(IHA)检测整联蛋白αvβ6在健康猪舌、唇、气管等组织的表达分布。采用抗猪源整联蛋白β6亚基的单克隆抗体作为一抗,FITC标记山羊抗小鼠IgG、辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG分别作为二抗。结果表明,pcDNA3.1(+)-β6p真核表达载体稳定转染的CHOK1细胞的细胞膜及细胞质内可见致密的绿色荧光(IFA),猪舌、唇、气管等组织细胞的细胞膜及细胞质内均出现了棕黄色的特异阳性反应物,表明整联蛋白αvβ6受体广泛分布于猪体的器官组织细胞中,为深入研究整联蛋白αvβ6在口蹄疫病毒感染过程中的作用奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒受体整联蛋白细胞定位组织分布

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口蹄疫病毒非结构蛋白定量检测ELISA方法的建立

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中国生物工程杂志 2009年第11期29卷 70-73页

作者：李永亮卢曾军杨苏珍田美娜谢宝霞刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室郑州450002

目的:利用口蹄疫病毒非结构蛋白3B单克隆抗体建立液相阻断ELISA检测方法,进行定量检测口蹄疫病毒培养液中的非结构蛋白含量。方法:首先将工作浓度的3B单抗与待测病毒培养液过夜结合反应,然后取结合液转移至用3B蛋白包被好的酶标板上,用... 详细信息

目的:利用口蹄疫病毒非结构蛋白3B单克隆抗体建立液相阻断ELISA检测方法,进行定量检测口蹄疫病毒培养液中的非结构蛋白含量。方法:首先将工作浓度的3B单抗与待测病毒培养液过夜结合反应,然后取结合液转移至用3B蛋白包被好的酶标板上,用标准3B蛋白做12个梯度做对照,同时设阴性对照和空白对照。通过回归分析算出口蹄疫病毒培养液中的非结构蛋白3B含量。结果:回归曲线呈典型的S形,符合4参数logit曲线拟合,相关系数R=0.99,检测范围为5～1500ng/ml,半数抑制浓度(Ic50)为130ng/ml。结论:该方法能特异、敏感的检测到病毒培养液中的非结构蛋白3B成分,并进行定量。

关键词：口蹄疫病毒单克隆抗体非结构蛋白定量ELISA

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口蹄疫新型疫苗研究进展

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微生物学通报 2009年第11期36卷 1750-1757页

作者：曹轶梅卢曾军田飞鹏刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

口蹄疫(FMD)是一种严重威胁畜牧业发展的重要传染病,目前世界上许多国家和地区都有该病的流行与发生。其控制措施主要是疫苗免疫,虽然传统疫苗在该病的防控中起了重要的作用,但也存在着诸多的缺点。因此研制新型的FMD疫苗是今后的发展... 详细信息

口蹄疫(FMD)是一种严重威胁畜牧业发展的重要传染病,目前世界上许多国家和地区都有该病的流行与发生。其控制措施主要是疫苗免疫,虽然传统疫苗在该病的防控中起了重要的作用,但也存在着诸多的缺点。因此研制新型的FMD疫苗是今后的发展方向。本文结合实验室在FMD新型疫苗研究方面所开展的探索性研究工作,综述了国内外在FMD基因工程弱毒苗或灭活苗、蛋白质和合成肽疫苗、空衣壳疫苗、细胞因子增强型疫苗等研究领域所取得的进展。

关键词：口蹄疫传统疫苗新型疫苗

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O型口蹄疫病毒各编码基因及其产物变异率的分析

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华北农学报 2009年第1期24卷 60-63页

作者：周建华丛国正常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

将从Genbank中提出的20株O型FMDV的全基因组分割成12个编码区域,即Lab、VP4、VP2、VP3、VP1、2A、2B、2C、3A、3B、3C和3D。通过方差分析,12个编码序列的相对变异率之间无差异(P>0.05);而这12种编码序列所对应的氨基酸相对突变率之... 详细信息

将从Genbank中提出的20株O型FMDV的全基因组分割成12个编码区域,即Lab、VP4、VP2、VP3、VP1、2A、2B、2C、3A、3B、3C和3D。通过方差分析,12个编码序列的相对变异率之间无差异(P>0.05);而这12种编码序列所对应的氨基酸相对突变率之间差异显著(P<0.01)。利用Duncan法对这12种氨基酸序列相对突变率进行多重比较,发现3A蛋白的氨基酸相对突变率比其余11种蛋白的差异都显著(P<0.05);VP2、Lpro的氨基酸相对突变率与VP4、2A、2C、3Cpro、3Dpol之间存在差异(P<0.05);而VP4、2A、2C、3Cpro、3Dpol之间无差异。结果显示,O型FMDV自身RNA的转录和机体对FMDV施加的免疫压力不是造成FMDV变异的主要原因,而各种病毒产物的功能选择压力才是FMDV分子进化的主要原因。

关键词：口蹄疫病毒相对变异率方差分析 Duncan法

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一种高效、稳定的可溶性原核表达载体的构建及应用

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华北农学报 2009年第6期24卷 46-49页

作者：高闪电常惠芸独军政丛国正邵军军林彤中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

以O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因重组克隆载体pGEM-OVP1为模板,设计表达引物,经PCR扩增获得上游带有PelB信号肽编码序列的VP1 C端编码区,将其克隆至该表达载体pET-30a(+)中,构建了可溶性原核表达载体pET-30a-PelB-VP1C。将VP1全长编码... 详细信息

以O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因重组克隆载体pGEM-OVP1为模板,设计表达引物,经PCR扩增获得上游带有PelB信号肽编码序列的VP1 C端编码区,将其克隆至该表达载体pET-30a(+)中,构建了可溶性原核表达载体pET-30a-PelB-VP1C。将VP1全长编码区替换VP1C,获得重组原核表达载体pET-30a-PelB-VP1。将两种重组质粒分别转化大肠杆菌工程菌株BL21-(DE3)-plysS,经IPTG诱导表达,实现了VP1全长及其C端的可溶性表达,以金属离子螯合层析法分别对表达的VP1及其C端融合蛋白进行纯化,SDS-PAGE显示纯化的目的蛋白分别在32 ku和20 ku处有单一目的条带,具有较高的纯度。Western blot分析,VP1蛋白及其C端均可与牛O型口蹄疫病毒阳性血清反应。对重组菌株的连续传代实验证实了该可溶性表达载体的遗传稳定性,显示了该可溶性原核表达载体在蛋白可溶性表达中的应用价值。

关键词：口蹄疫病毒原核表达可溶性信号肽

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慢病毒载体及慢病毒介导的RNA干扰

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黑龙江畜牧兽医 2009年第2期 24-25页

作者：冯小明张杰刘永生陈豪泰马丽娜孙德惠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

慢病毒载体是高效的基因转导工具，能将外源基因序列稳定导入分裂期细胞和非分裂期细胞。将慢病毒载体与RNA干扰结合能在哺乳动物的各类细胞中特异性抑制同源基因的表达，它将是基因功能研究和基因治疗的有力手段。应用慢病毒载体进行... 详细信息

慢病毒载体是高效的基因转导工具，能将外源基因序列稳定导入分裂期细胞和非分裂期细胞。将慢病毒载体与RNA干扰结合能在哺乳动物的各类细胞中特异性抑制同源基因的表达，它将是基因功能研究和基因治疗的有力手段。应用慢病毒载体进行转基因动物的制备，转基因的效率将得到显著提高。慢病毒介导的RNA干扰具有高效、稳定、特异性强的特点，它能在哺乳动物的各类细胞、多种疾病的离体细胞中实现稳定的RNA干扰。该技术被广泛用于基因功能的研究，在疾病的基因治疗上也具有良好的前景。

关键词：慢病毒载体 RNA干扰

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口蹄疫及检测技术进展

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中国农学通报 2009年第9期25卷 6-10页

作者：丁耀忠张杰马丽娜陈豪泰马艳平刘永生中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

口蹄疫包括七个主要的血清型,被国际兽疫局(OIE)定为一类传染病,中国农业部也将其列为一类传染病。因为近年频繁爆发,严重威胁到畜禽生产和人类自身生存安全,同时由于亚型多、抗原变异性强、宿主范围广等原因,其生态学和公共卫生学意义... 详细信息

口蹄疫包括七个主要的血清型,被国际兽疫局(OIE)定为一类传染病,中国农业部也将其列为一类传染病。因为近年频繁爆发,严重威胁到畜禽生产和人类自身生存安全,同时由于亚型多、抗原变异性强、宿主范围广等原因,其生态学和公共卫生学意义有极其重要的作用,通过对口蹄疫的感染机制和各种诊断与防制措施进行概述,从而阐述目前口蹄疫的诊断技术进展状况和进展。

关键词：口蹄疫检测技术生物传感器基因芯片

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核糖开关的研究与应用

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中国农学通报 2009年第23期25卷 38-40页

作者：王猛马艳萍刘永生张杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

核糖开关被定义为一类位于mRNA3'-或5'-UTR上的能够结合小分子代谢物以调控基因的转录和翻译的mRNA顺时作用元件。这个来源于RNA世界的分子化石已经引起了越来越多的人的关注,文章就核糖开关的作用机理及其应用做一综述。

关键词：核糖开关小分子代谢物调控

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异构系统中检测蛋白质相互作用方法的原理及应用

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中国农学通报 2009年第22期25卷 71-74页

作者：刘文倩马艳平刘永生张杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

基因组测序的完成并没有真正解释出细胞生命活动的本质。科学家们逐渐发现所有细胞功能都涉及蛋白质相互作用,许多疾病的发病也是由于蛋白质相互作用的改变,因此研究蛋白质相互作用具有重要的意义,也成为蛋白质组学研究的重点。目前已... 详细信息

基因组测序的完成并没有真正解释出细胞生命活动的本质。科学家们逐渐发现所有细胞功能都涉及蛋白质相互作用,许多疾病的发病也是由于蛋白质相互作用的改变,因此研究蛋白质相互作用具有重要的意义,也成为蛋白质组学研究的重点。目前已有许多实用且成熟的技术应用于蛋白质相互作用的检测。异构系统中检测蛋白质相互作用的方法包括细菌、酵母、哺乳动物细胞的双杂交系统和免疫共沉淀技术。文章将对这些技术的原理及应用作以综述。

关键词：异构系统蛋白质相互作用方法

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