检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病学报 2008年第10期24卷 945-948页

作者：颜新敏张强吴国华李健朱海霞朱彩珠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

根据羊痘病毒的P32基因和羊口疮病毒H2L基因序列设计合成两对引物,建立了一种快速鉴别诊断羊痘病毒和羊口疮病毒的双重PCR方法。该方法可对羊痘病毒和羊口疮病毒分别扩增出969bp和507bp的特异性片段,对痘苗病毒等其它病原和健康羊皮肤... 详细信息

根据羊痘病毒的P32基因和羊口疮病毒H2L基因序列设计合成两对引物,建立了一种快速鉴别诊断羊痘病毒和羊口疮病毒的双重PCR方法。该方法可对羊痘病毒和羊口疮病毒分别扩增出969bp和507bp的特异性片段,对痘苗病毒等其它病原和健康羊皮肤组织不能扩增出任何片段。敏感性试验表明该方法可分别扩增出101.66TCID50山羊痘病毒和102.33TCID50羊口疮病毒。对从甘肃境内采集的11份临床病料进行检测,其中8份可扩增出969bp的羊痘病毒特异性片段,3份可扩增出507bp的羊口疮病毒特异性片段,与病毒分离鉴定结果一致。

关键词：双重PCR 鉴别诊断羊痘病毒羊口疮病毒

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口蹄疫病毒3C蛋白酶的研究进展

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中国人兽共患病学报 2008年第11期24卷 1063-1065,1069页

作者：周建华常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouthdisease virus,FMDV)引起的一种急性、烈性、高度接触传染性和可快速远距离传播的动物疾病。其临床症状表现为口部、蹄部暂时性地出现水疱,并且病畜体质虚弱,生产能力急剧降低。口蹄疫的暴发给当地... 详细信息

口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouthdisease virus,FMDV)引起的一种急性、烈性、高度接触传染性和可快速远距离传播的动物疾病。其临床症状表现为口部、蹄部暂时性地出现水疱,并且病畜体质虚弱,生产能力急剧降低。口蹄疫的暴发给当地带来严重的经济损失,疫区乃至整个国家的畜产品出口受到封锁。FMDV属于微RNA病毒科,口蹄疫病毒属,其基因组为正链单股RNA,[第一段]

关键词：口蹄疫病毒 3C蛋白酶 RNA病毒科远距离传播动物疾病症状表现体质虚弱生产能力

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H9N2亚型禽流感病毒A／Chicken／Gansu／2／99株基因组的分子特征

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中国人兽共患病学报 2008年第6期24卷 543-547页

作者：独军政侯顺利易华山付生芳常惠芸才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

目的测定H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Gansu/2/99(CK/GS/2/99)分离株的基因组序列并与参考毒株进行同源性分析,阐明该毒株的遗传变异及分子特征。方法采集发病鸡泄殖腔样品,经鸡胚尿囊腔接种分离病毒,采用RT-PCR方法对CK/GS/2/99株的8... 详细信息

目的测定H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Gansu/2/99(CK/GS/2/99)分离株的基因组序列并与参考毒株进行同源性分析,阐明该毒株的遗传变异及分子特征。方法采集发病鸡泄殖腔样品,经鸡胚尿囊腔接种分离病毒,采用RT-PCR方法对CK/GS/2/99株的8个分节段基因进行扩增,分别将其克隆到pGEM-T easy载体后进行序列测定与同源性分析。结果CK/GS/2/99株PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M、NS基因的开放阅读框分别由2280、2274、2151、1683、1497、1401、759、864个碱基组成,分别编码759、757、716、560、498、466、252/97、231/122个氨基酸残基。该毒株HA上HA1和HA2裂解位点序列为PARSSR↓GLF,具有典型的低致病性禽流感病毒的特征。同源性分析显示,CK/GS/2/99株与1998-2002年间大部分中国大陆分离株遗传关系较近,尤其与CK/NX/4/99和CK/HB/31/00株遗传关系密切。结论CK/GS/2/99与大部分流行于中国内陆的H9N2亚型毒株均来源于共同的祖先毒株CK/BJ/1/94,这为了解中国H9N2亚型禽流感病毒的分子流行病学提供了资料。

关键词：禽流感病毒 H9N2亚型 A/Chicken/Gansu/2/99 序列分析

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猪水疱病重组蛋白P1的豚鼠免疫试验

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中国免疫学杂志 2008年第7期24卷 626-629页

作者：田宏吴锦艳尚佑军郑海学孙世琪刘湘涛谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

目的:研究重组猪水疱病病毒(SVDV)P1蛋白的免疫活性。方法:将自制的猪水疱病抗原经佐剂乳化免疫豚鼠,并应用T淋巴细胞增殖试验、阻断ELISA及微量细胞中和试验检测了所制备的免疫原免疫豚鼠后在体液免疫和细胞免疫方面进行了全面的评价... 详细信息

目的:研究重组猪水疱病病毒(SVDV)P1蛋白的免疫活性。方法:将自制的猪水疱病抗原经佐剂乳化免疫豚鼠,并应用T淋巴细胞增殖试验、阻断ELISA及微量细胞中和试验检测了所制备的免疫原免疫豚鼠后在体液免疫和细胞免疫方面进行了全面的评价。结果:前期制备的抗原免疫豚鼠后具有良好的免疫原性。结论:对该亚单位疫苗可做进一步的开发应用。

关键词：猪水疱病病毒亚单位疫苗豚鼠免疫试验

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稳定表达猪水疱病病毒P1基因的PK-15细胞系的建立

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畜牧兽医学报 2008年第4期39卷 478-482页

作者：田宏吴锦艳龚真莉郑海学孙世琪尚佑军刘湘涛谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

从猪水疱病全长感染性cDNA中,应用PCR技术扩增到SVDV结构蛋白P1基因,并在目的片段的5′端引入Kozak序列(Kozak,1987),定向克隆于逆转录病毒载体pBABE puro。经PCR、酶切和序列分析鉴定,获得阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒... 详细信息

从猪水疱病全长感染性cDNA中,应用PCR技术扩增到SVDV结构蛋白P1基因,并在目的片段的5′端引入Kozak序列(Kozak,1987),定向克隆于逆转录病毒载体pBABE puro。经PCR、酶切和序列分析鉴定,获得阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获假型病毒,在Polybrene的介导下感染PK-15细胞,嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆。免疫荧光连续检测阳性克隆传代细胞,发现在不同代次的细胞中均有SVDV P1蛋白表达,而且表达的蛋白可被SVD阳性血清所识别;同时应用PCR技术,可从体外反复传代阳性细胞基因组中扩增到SVD P1基因。表明本次所筛选的阳性细胞克隆不但能持续稳定地表达SVD P1蛋白,而且可携带外源基因进行传代,具有良好的遗传稳定性。

关键词：猪水疱病病毒P1基因重组逆转录病毒载体 PK-15细胞基因表达

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Asia1型口蹄疫抗原位点研究进展

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中国人兽共患病学报 2008年第12期24卷 1168-1172页

作者：马丽娜刘永生陈豪泰孙德惠张杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

口蹄疫是一种严重危害偶蹄动物,在世界范围内引起巨大经济损失兼对政治莫大影响的疾病。全面了解FMDV抗原结构,准确而详尽地绘制其抗原表位图谱对监测病毒抗原变异、正确理解病毒致病的分子机制、定点改造免疫原性相关的蛋白质分子以及... 详细信息

口蹄疫是一种严重危害偶蹄动物,在世界范围内引起巨大经济损失兼对政治莫大影响的疾病。全面了解FMDV抗原结构,准确而详尽地绘制其抗原表位图谱对监测病毒抗原变异、正确理解病毒致病的分子机制、定点改造免疫原性相关的蛋白质分子以及口蹄疫病毒表位疫苗的研制具有重要意义。本文从抗原表位的研究方法、病毒特性及研究现状等方面对Asia1型口蹄疫抗原位点的研究进展做一综述。[第一段]

关键词：口蹄疫病毒抗原位点 a1型 Asi 抗原表位蛋白质分子经济损失世界范围

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人、牛和羊叠朊基因的表达及牛叠朊蛋白抗血清的制备

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中国农业大学学报 2008年第3期13卷 14-18页

作者：刘永生唐江山路伟陈豪泰孙德惠才学鹏张杰中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

叠朊(Dpl)是朊蛋白(PrP)的横向同源物,两者的功能密切相关。本研究旨在制备能够特异检测重组表达的或者动物组织中Dpl的抗血清,以用于研究Dpl的功能及其与PrP的关系。根据已克隆的汉族人、中国黄牛、甘肃土种羊的Dpl基因,将其Dpl成熟蛋... 详细信息

叠朊(Dpl)是朊蛋白(PrP)的横向同源物,两者的功能密切相关。本研究旨在制备能够特异检测重组表达的或者动物组织中Dpl的抗血清,以用于研究Dpl的功能及其与PrP的关系。根据已克隆的汉族人、中国黄牛、甘肃土种羊的Dpl基因,将其Dpl成熟蛋白编码区分别定向克隆到表达载体pET-30a(+)上,将重组表达载体转入***21(DE3)pLysS,IPTG诱导表达。将表达并纯化的牛重组Dpl免疫4只青紫蓝兔,制备牛Dpl的抗血清,SDS-PAGE分析表明人、牛和羊的重组Dpl在***中获得了高效表达。用Ni-NTA树脂亲和层析和胶洗脱法纯化了上述表达产物,ELISA和West-blot分析表明,制备的牛Dpl抗血清与重组人、牛和羊的Dpl以及牛和羊睾丸组织的Dpl发生了特异性反应,却不与重组人、牛和羊的PrP发生反应。上述结果表明制备的Dpl抗血清可以作为人、牛和羊Dpl的检测试剂和研究材料。

关键词：传染性海绵状脑病叠朊朊蛋白基因表达抗血清

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偶蹄家畜FMDV受体通用亚基αv基因的分子特征及其进化关系

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畜牧兽医学报 2008年第11期39卷 1530-1536页

作者：独军政高闪电常惠芸赵建勇丛国正邵军军林彤刘湘涛才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

已发现至少有αvβ1、αvβ3、αvβ6、αvβ8 4种整联蛋白是FMDV的细胞受体,αv是4种受体的通用亚基。本试验中从FMDV实验感染猪和牛、健康羊和双峰驼等的肺组织中克隆到了受体通用亚基αv基因,并对其序列进行了比较和进化关系分析。... 详细信息

已发现至少有αvβ1、αvβ3、αvβ6、αvβ8 4种整联蛋白是FMDV的细胞受体,αv是4种受体的通用亚基。本试验中从FMDV实验感染猪和牛、健康羊和双峰驼等的肺组织中克隆到了受体通用亚基αv基因,并对其序列进行了比较和进化关系分析。结果显示,羊、牛、猪、双峰驼的αv亚基基因的编码区分别含有3147、3147、3141、3165个核苷酸,分别编码1048、1048、1046、1054个氨基酸,信号肽均由氨基端30个氨基酸组成,跨膜区、胞浆区均分别由29、32个氨基酸组成;胞外区分别由957、957、955、963个氨基酸组成。羊、牛、猪、双峰驼αv亚基基因在Gen-Bank中的登录号分别为EU367989、DQ871215、EF474019、EU367990。同源性分析表明,信号肽变异最大,胞外区次之,跨膜区和胞浆区比较保守;进化树表明,与灵长类、啮齿类、奇蹄类、禽类、食肉类等口蹄疫非易感物种相比,口蹄疫易感动物羊、双峰驼、猪、牛等偶蹄家畜αv亚基的亲缘关系较近,处于同一进化分支。这表明受体αv亚基可能与FMDV的宿主范围和组织嗜性有关。

关键词：偶蹄家畜 FMDV受体 αv基因分子特征进化关系

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FMDV整联蛋白受体β1亚基的克隆及其配体黏附区多抗的制备

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生物工程学报 2008年第5期24卷 874-880页

作者：杜平尚佑军马军武贺延玉孙晓林刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室兰州730046 甘肃农业大学研究测试中心兰州730070 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

采用RT-PCR技术从牛气管组织扩增出2400bp的β1基因,回收纯化连入PGEM-T载体,测序。用Expasy软件对β1基因的抗原性进行分析,选取胞外区334-861bp的配体结合区与6×His融合,在大肠杆菌中大规模诱导表达,并经Ni2＋亲和柱层析纯化。通... 详细信息

采用RT-PCR技术从牛气管组织扩增出2400bp的β1基因,回收纯化连入PGEM-T载体,测序。用Expasy软件对β1基因的抗原性进行分析,选取胞外区334-861bp的配体结合区与6×His融合,在大肠杆菌中大规模诱导表达,并经Ni2＋亲和柱层析纯化。通过SDS-PAGE鉴定后,应用纯化蛋白免疫新西兰家兔,获得效价在1：12800以上的多抗,Western blotting鉴定表明此抗体可特异性的与表达的融合蛋白作用。

关键词：口蹄疫病毒整联蛋白 β1亚基配体结合区多克隆抗体

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口蹄疫病毒AF72株3D聚合酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

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华北农学报 2008年第6期23卷 32-35页

作者：张昱王永录张永光潘丽中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

采用RT-PCR方法扩增口蹄疫病毒(FMDV)AF72株的3D聚合酶基因,并将其克隆至pGEM-T easy载体,测序分析结果表明,AF72 3D聚合酶基因与GenBank中公布的其他4个参考序列均具有较高的同源性。将目的基因插入原核表达载体pET-30a(+)中,构建了重... 详细信息

采用RT-PCR方法扩增口蹄疫病毒(FMDV)AF72株的3D聚合酶基因,并将其克隆至pGEM-T easy载体,测序分析结果表明,AF72 3D聚合酶基因与GenBank中公布的其他4个参考序列均具有较高的同源性。将目的基因插入原核表达载体pET-30a(+)中,构建了重组表达质粒pET-3D,鉴定后转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,3D聚合酶基因在大肠杆菌中获得了正确表达,目的蛋白的分子量为46 ku。Western blot检测结果显示,表达产物可以与抗A型FMDV阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性。

关键词：口蹄疫病毒 3D聚合酶基因原核表达

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