检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病学报 2008年第11期24卷 999-1001,1005页

作者：高闪电常惠芸独军政王景锋宋帅谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

目的表达口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β1亚基配体结合域β1LBD,制备兔抗β1LBD多克隆抗体检测β1p-CHOK1细胞β1亚基的表达。方法利用PCR方法扩增整联蛋白β1LBD基因片段,经BamHⅠ和XhoⅠ进行双酶切后与pGEX-4T-1原核表达载体相连,构建... 详细信息

目的表达口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β1亚基配体结合域β1LBD,制备兔抗β1LBD多克隆抗体检测β1p-CHOK1细胞β1亚基的表达。方法利用PCR方法扩增整联蛋白β1LBD基因片段,经BamHⅠ和XhoⅠ进行双酶切后与pGEX-4T-1原核表达载体相连,构建的pGEX-β1LBD重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达并提取包涵体,纯化目的蛋白。然后用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔制备其多克隆抗体,以ELISA和Western blot方法分别鉴定抗体的效价和特异性,并用制备的抗体以间接免疫荧光抗体法对β1p-CHOK1细胞中β1亚基的表达进行检测。结果SDS-PAGE电泳分析显示阳性菌经诱导后表达一Mr约为42000的GST-β1LBD融合蛋白,与预期结果相符。目的蛋白纯化后,在电泳图片上显示较为清晰的单一条带,用纯化GST-β1LBD免疫新西兰大耳白兔制备的多克隆抗体效价达1∶12800以上,具有较高的特异性,间接免疫荧光显示β1p-CHOK1细胞β1亚基表达于其细胞表面。结论制备了具有高亲和性和特异性的兔抗猪源整联蛋白β1LBD多克隆抗体,为深入研究猪源整联蛋白β1在口蹄疫病毒感染过程中的作用了奠定基础。

关键词：口蹄疫病毒受体整联蛋白β1亚基配体结合域多克隆抗体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

硫酸乙酰肝素受体介导的病毒感染作用

引用

中国人兽共患病学报 2008年第9期24卷 874-877页

作者：赵建勇独军政高闪电丛国正林彤邵军军伏小平常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

病毒受体多为蛋白聚糖、糖脂或脂、糖蛋白且以单个或多个分子的复合体形式才能存在,硫酸乙酰肝素(Heparan sulfate,HS)存在于细胞表面,是病毒特异性结合的主要糖蛋白受体,最初发现以硫酸乙酰肝素为受体的病毒是人类单纯疱疹病毒(HSV-1)... 详细信息

病毒受体多为蛋白聚糖、糖脂或脂、糖蛋白且以单个或多个分子的复合体形式才能存在,硫酸乙酰肝素(Heparan sulfate,HS)存在于细胞表面,是病毒特异性结合的主要糖蛋白受体,最初发现以硫酸乙酰肝素为受体的病毒是人类单纯疱疹病毒(HSV-1)和(HSV-2)。硫酸乙酰肝素可作为多种病毒的受体,其可与病毒的多个吸附位点结合,它作为病毒受体来介导病毒进入细胞特定的部位或促进病毒与其第二受体的吸附。[第一段]

关键词：硫酸乙酰肝素病毒受体受体介导感染作用人类单纯疱疹病毒 sulfate 糖蛋白受体特异性结合

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

口蹄疫病毒A／AKT／58株基因组全长感染性cDNA克隆的体内拯救

引用

中国科学（C辑） 2008年第11期38卷 1028-1035页

作者：白兴文李平花曹轶梅李冬卢曾军郭建宏孙德惠郑海学孙普刘湘涛罗建勋刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046 广东省农业科学院广东广州540640

构建了两种口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)基因组全长cDNA克隆pTA/FMDV和pCA/FMDV,利用体外转录和体内转录方法制备感染性病毒,并对其抗原性,乳鼠毒力(LD50)和病毒生长动力学等生物学特性进行了分析.为了鉴别野毒与重... 详细信息

构建了两种口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)基因组全长cDNA克隆pTA/FMDV和pCA/FMDV,利用体外转录和体内转录方法制备感染性病毒,并对其抗原性,乳鼠毒力(LD50)和病毒生长动力学等生物学特性进行了分析.为了鉴别野毒与重组病毒,利用融合PCR技术在两种全长cDNA基因组内分别引入了几个点突变(pTA/FMDV:T1029G,pCA/FMDV:A174G,A308G,T1029G)作为遗传标记.结果表明,两种重组病毒对3日龄乳鼠均表现致病性.但是由pTA/FMDV合成的感染性体外转录本RNA的毒力较弱(10?6);而与pCT7RNAP质粒共转染的pCA/FMDV体内拯救病毒的毒力较强(10?7.5),并在BHK-21细胞上表现出与野毒相似的生长特性.这一结果表明,在FMDV的拯救过程中,以pCT7RNAP为基础的体内拯救系统相比体外转录方法更为简便、实用.该系统为利用反向遗传操作技术深入研究FMDV的分子致病机制及其准种特性等奠定了良好的基础.

关键词：口蹄疫病毒感染性cDNA克隆体内转录 A/AKT/58株

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

应用活体骨髓瘤细胞制备单克隆抗体

引用

中国生物工程杂志 2008年第11期28卷 63-66页

作者：李永亮田美娜卢曾军杨苏珍刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所、家畜疫病病原生物学国家重点实验室、农业部畜禽病毒学重点实验室、国家口蹄疫参考实验室兰州730046 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室郑州450002

目的:用活体骨髓瘤细胞SP2/0做融合提高融合率制备单克隆抗体,并与常规方法比较效果。方法:将SP2/0细胞打到8周龄的SPF级BALB/c小鼠皮下,待实体瘤生长到直径达2～3cm时无菌解剖取实体瘤,分离出骨髓瘤细胞进行融合。同时用培养基培养SP2/... 详细信息

目的:用活体骨髓瘤细胞SP2/0做融合提高融合率制备单克隆抗体,并与常规方法比较效果。方法:将SP2/0细胞打到8周龄的SPF级BALB/c小鼠皮下,待实体瘤生长到直径达2～3cm时无菌解剖取实体瘤,分离出骨髓瘤细胞进行融合。同时用培养基培养SP2/0细胞进行融合做比较,分两组进行。比较两种方法的融合率以及两种方法制备出来的单克隆抗体的相对亲和力。结果:做了6次融合,实体瘤融合组融合率为70.4%,常规法融合组44.6%,两种方法制备单抗的相对亲和力均达到1∶100000以上。结论:利用活体实体瘤细胞进行融合能明显提高细胞融合率。

关键词：单克隆抗体(MAb)SP2/0细胞活体骨髓瘤细胞融合

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

牛FMDV受体整合素β6亚基LBD的多克隆抗体制备及初步应用

引用

细胞与分子免疫学杂志 2008年第7期24卷 696-698页

作者：独军政常惠芸高闪电王景锋赵建勇才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

目的:利用大肠杆菌表达牛FMDV受体整合素β6亚基的配体结合域(LBD)片段,纯化重组目的蛋白后制备兔多克隆抗体并对其进行初步应用。方法:以含有牛整合素β6亚基全长cDNA的质粒为模板PCR扩增得到β6LBD基因片段,与原核表达载体pGEX4T-1相... 详细信息

目的:利用大肠杆菌表达牛FMDV受体整合素β6亚基的配体结合域(LBD)片段,纯化重组目的蛋白后制备兔多克隆抗体并对其进行初步应用。方法:以含有牛整合素β6亚基全长cDNA的质粒为模板PCR扩增得到β6LBD基因片段,与原核表达载体pGEX4T-1相连,构建原核表达质粒pGEX/β6LBD,测序确认开放阅读框正确后,转化感受态细胞BL21(DE3),以IPTG诱导表达重组牛β6LBD融合蛋白。SDS-PAGE和Westernblot鉴定后提取包涵体,电泳分离纯化重组融合蛋白,免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,以ELISA、琼脂扩散实验、免疫组化鉴定该抗体的效价和特异性。结果:重组牛β6LBD融合蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,重组蛋白主要以包涵体形式表达,相对分子质量(Mr)约为45000。制备的兔多克隆抗体效价达1∶12800以上,该抗体可与牛舌上皮细胞中的抗原分子结合,具有很好的特异性。结论:实现了牛FMDV受体整合素β6亚基LBD的原核表达和抗体制备,为研究受体β6亚基在牛体内的分布及其在FMDV感染过程中的作用机制提供了工具。

关键词：牛FMDV受体 β6LBD 多克隆抗体免疫组化

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

口蹄疫病毒3D基因真核表达载体pEGFP-3D的构建及其融合蛋白分子在BHK细胞中的定位

引用

华北农学报 2008年第4期23卷 5-9页

作者：毕研丽沈小燕丛国正刘湘涛常惠芸才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为研究口蹄疫病毒RNA聚合酶3D基因的分子生物学特性及定位,构建了3D基因真核表达载体pEGFP-3D,观察了3D在BHK-21细胞中的瞬时表达情况。从重组质粒pMD18-T-3D扩增到3D基因,与pGEM-T easy载体连接,将鉴定为阳性的重组质粒pGEM-3D与表达载... 详细信息

为研究口蹄疫病毒RNA聚合酶3D基因的分子生物学特性及定位,构建了3D基因真核表达载体pEGFP-3D,观察了3D在BHK-21细胞中的瞬时表达情况。从重组质粒pMD18-T-3D扩增到3D基因,与pGEM-T easy载体连接,将鉴定为阳性的重组质粒pGEM-3D与表达载体pEGFP-N1分别经BamHⅠ/HindⅢ酶切,进行定向亚克隆;重组表达质粒pEGFP-3D经PCR、酶切鉴定,阳性质粒进行测序。利用脂质体介导阳性pEGFP-3D质粒转染BHK-21细胞,免疫组化检测转染细胞中3D基因表达情况和3D基因在细胞中的定位,Western blotting验证pEGFP-3D融合基因的表达。结果表明,成功构建了重组表达质粒pEGFP-3D,并在BHK-21细胞中进行了表达。免疫组化分析表明,3D蛋白主要定位于细胞核;Western blotting证实pEGFP-3D融合蛋白在80 kDa处出现阳性条带,说明表达的外源蛋白具有免疫活性。pEGFP-3D表达载体转染细胞后很快就能通过观察荧光蛋白而检测出基因的瞬时表达情况,为基因转染研究中确定转染效率、3D的表达情况及蛋白定位等提供了直观的靶标,有望应用于FMDV聚合酶分子的生物学特性研究。

关键词：口蹄疫病毒 pEGFP-3D表达载体定位免疫活性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

口蹄疫OA／58病毒株VP2蛋白结构模拟与B细胞抗原表位的分析

引用

华北农学报 2008年第3期23卷 1-4页

作者：周建华丛国正高闪电常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

以口蹄疫病毒株0A／58RNA为模板，反转录并扩增目的eDNA，然后与pMD18-T载体连接并转化JM109菌株，提取的重组质粒用凝胶电泳、PCR和BarnHI，HindIII双酶切法鉴定。运用同源模建得到0A／58VP2蛋白三维空间结构，并结合理化性质、亲水性... 详细信息

以口蹄疫病毒株0A／58RNA为模板，反转录并扩增目的eDNA，然后与pMD18-T载体连接并转化JM109菌株，提取的重组质粒用凝胶电泳、PCR和BarnHI，HindIII双酶切法鉴定。运用同源模建得到0A／58VP2蛋白三维空间结构，并结合理化性质、亲水性、可塑性和免疫原性进行分析，找出OA／58VP2蛋白的B细胞抗原表位。结果表明，0A／58VP2蛋白存在多个潜在的抗原表位，可能的蛋白质抗原表位区域：1～23，40～63，71～78，82～91，102～106，113～119，131～138，148～154，166～177，189～196，212～218。应用同源模建得到的OA／58VP2蛋白三维空间结构来预测其B细胞表位，为进一步研究0A／58vP2蛋白在引起易感宿主体液免疫应答方面提供了一种可视化的技术平台，并且为选择表达其他口蹄疫病毒株的VP2蛋白分子提供有参考价值的信息。

关键词：口蹄疫病毒 VP2蛋白 B细胞抗原表位

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

常用消毒剂对口蹄疫病毒的灭活试验

引用

中国消毒学杂志 2008年第2期25卷 120-122页

作者：颜新敏张强朱海霞李建吴国华中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学开放实验室兰州730046

目的研究几种常用消毒剂对口蹄疫病毒灭活效果。方法采用悬液乳鼠皮下接种培养法进行了实验室和现场灭活病毒效果检测。结果以含有效碘100 mg/L的碘酸和50 mg/L的聚维酮碘对悬液内口蹄疫病毒可达到完全灭活。以含有效氯750 mg/L的三氯... 详细信息

目的研究几种常用消毒剂对口蹄疫病毒灭活效果。方法采用悬液乳鼠皮下接种培养法进行了实验室和现场灭活病毒效果检测。结果以含有效碘100 mg/L的碘酸和50 mg/L的聚维酮碘对悬液内口蹄疫病毒可达到完全灭活。以含有效氯750 mg/L的三氯异氰脲酸和250 mg/L的复方二氯异氰脲酸能完全灭活悬液内口蹄疫病毒。以含有效氯溴750 mg/L的溴氯海因,可有效灭活口蹄疫病毒。以含过硫酸钾125 mg/L和过硫酸氢钾250mg/L也可完全灭活口蹄疫病毒。结论本试验所用的含碘消毒剂、含氯消毒剂以及两种过硫酸盐类消毒剂对口蹄疫病毒都有较好的杀灭效果,说明该病毒对常用消毒剂比较敏感。

关键词：口蹄疫病毒含碘消毒剂含氯消毒剂过硫酸盐灭活效果

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

FMDV OA／58病毒株VP3蛋白结构的模拟与分析

引用

华北农学报 2008年第6期23卷 28-31页

以口蹄疫病毒株OA／58 RNA为模板，反转录并扩增目的cDNA，然后与pMD18-T载体连接并转化JM109菌株，提取的重组质粒用凝胶电泳、PCR和BarnHⅠ、HindⅢ双酶切法鉴定。分析表明，口蹄疫病毒VP1、VP2、VP3和VP4在核苷酸水平上的变异率是无... 详细信息

以口蹄疫病毒株OA／58 RNA为模板，反转录并扩增目的cDNA，然后与pMD18-T载体连接并转化JM109菌株，提取的重组质粒用凝胶电泳、PCR和BarnHⅠ、HindⅢ双酶切法鉴定。分析表明，口蹄疫病毒VP1、VP2、VP3和VP4在核苷酸水平上的变异率是无差异的（P〉0．05）；而它们在氨基酸水平上的变异率差异显著（P〈0．05）。该毒株与20株源于GenBank中的VP3氨基酸序列比较发现其保守区主要位于第1～24、26～35、37～43、45～57、61～122、124～173、175～209、211～220位。运用同源模建，OA／58 VP3蛋白三维空间结构可分为A，B，C3个结构区域。保守区氨基酸残基在维持VP3蛋白的空间构象和功能方面具有重要作用。

关键词：口蹄疫病毒 VP3蛋白同源模建

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法的建立

引用

中国预防兽医学报 2008年第8期30卷 627-630页

作者：林密马军武祁淑芸冯霞张峰殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

本研究建立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法,确立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法检测O型口蹄疫血清阴阳性判定标准:抗体效价大于或等于1∶32时判为O型口蹄疫抗体阳性;1∶16～1∶32时判为O型口蹄疫抗体可疑。检测13... 详细信息

本研究建立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法,确立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法检测O型口蹄疫血清阴阳性判定标准:抗体效价大于或等于1∶32时判为O型口蹄疫抗体阳性;1∶16～1∶32时判为O型口蹄疫抗体可疑。检测131份阴性血清、口蹄疫亚洲1型阳性血清和A型阳性血清,固相竞争ELISA方法和液相阻断ELISA方法的特异性分别是95.5%,84.7%。固相竞争ELISA方法检测口蹄疫亚洲1型、口蹄疫A型阳性血清时,无交叉反应,O型口蹄疫病毒感染牛、免疫牛和感染猪血清的阳性检出率均为100%,免疫猪检出率为86.7%。

关键词：口蹄疫固相竞争ELISA 抗体效价血清

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：