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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会

作者：贺英赵萍储岳峰高鹏程张建军逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病痛原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

猪传染性胸膜肺炎是猪高度接触性呼吸道疾病,直接造成养猪业的较大经济损失,故掌握猪传染性胸膜肺疫苗的研究进展为进一步有效预防和控制猪传染性胸膜肺炎疾病奠定基础。所以本文就其疫苗的研究进展作了综述。

关键词：猪传染性胸膜肺炎疫苗

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口蹄疫病毒双效疫苗载体的构建及其体外表达研究

口蹄疫病毒双效疫苗载体的构建及其体外表达研究

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第二届全国人畜共患病学术研讨会

作者：杨彬兰喜殷相平李学瑞李宝玉方玉萍柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

用RT-PCR法获得了针对口蹄疫病毒（FMDV）基因组5′非编码区内包含病毒复制起始元件的基因片段ASCN及其VP1结构蛋白基因,将其分别克隆至双顺反子表达载体pIPES中,构建成了双表达质粒pASCN-IR-VP1,经酶切、PCR及DNA测序分析表明ASCN及VP... 详细信息

用RT-PCR法获得了针对口蹄疫病毒（FMDV）基因组5′非编码区内包含病毒复制起始元件的基因片段ASCN及其VP1结构蛋白基因,将其分别克隆至双顺反子表达载体pIPES中,构建成了双表达质粒pASCN-IR-VP1,经酶切、PCR及DNA测序分析表明ASCN及VP1基因已正确地插入到pIPES中,编码序列及插入方向均正确。用脂质体介导法将双效表达质粒导入BHK-21细胞后,经RT-PCR、实时荧光定量PCR检测表明双效表达质粒中的ASCN在细胞中得到了有效转录,mRNA的表达量达到了1.27×10～6个拷贝/μL;经夹心ELISA及间接免疫荧光标记等试验表明VP1结构蛋白基因在BHK-21细胞中得到了表达,具有良好的生物学活性。双效质粒pASCN-IR-VP1转染IBRS-2细胞24h后,按100TCID/0.1mL的量接FMDV OMⅢ毒,结果该质粒能够明显地抑制FMDV的复制,使病变时间推迟约16～18h,接毒48h时的抑制率达到60%以上,蚀斑减少试验也证实了该双效质粒的病毒抑制作用。研究结果表明成功构建了FMDV双效表达载体,为进一步研究双效疫苗免疫效力提供了前期基础。

关键词：口蹄疫病毒反义RNA pIRES 双效疫苗

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脉冲放电杀菌技术在动物疫苗制备中的展望

脉冲放电杀菌技术在动物疫苗制备中的展望

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会

作者：周继章中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

灭活疫苗在预防动物传染病中起着巨大的作用,但是灭活疫苗所使用的灭活剂容易在动物源性食品中残留,容易污染环境,不利于健康。高压脉冲电场能使病原体快速死亡,并且不污染环境。若将高压脉冲电场用于动物传染病疫苗的灭活,将会对疫苗... 详细信息

灭活疫苗在预防动物传染病中起着巨大的作用,但是灭活疫苗所使用的灭活剂容易在动物源性食品中残留,容易污染环境,不利于健康。高压脉冲电场能使病原体快速死亡,并且不污染环境。若将高压脉冲电场用于动物传染病疫苗的灭活,将会对疫苗的灭活带来革新,有望为人类提供绿色动物源性食品,保护人类健康。

关键词：脉冲电场病原体灭活

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细胞型朊蛋白PrPc与浮舰蛋白flotillin功能的研究进展

细胞型朊蛋白PrPc与浮舰蛋白flotillin功能的研究进展

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首届中国博士后农业论坛

作者：刘永生张杰马丽娜陈豪泰中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原牛物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

朊蛋白和脂筏是当今研究的热点.细胞型朊蛋白(PrPc)能够通过构象转变生成致病型的朊病毒(PrPsc),导致海绵状脑病的发生,但是目前关于PrPc的转变机制还不清楚.PrPc也是重要的信号转导蛋白,引发众多的信号转导事件.Flotillin属于新被命名... 详细信息

朊蛋白和脂筏是当今研究的热点.细胞型朊蛋白(PrPc)能够通过构象转变生成致病型的朊病毒(PrPsc),导致海绵状脑病的发生,但是目前关于PrPc的转变机制还不清楚.PrPc也是重要的信号转导蛋白,引发众多的信号转导事件.Flotillin属于新被命名为SPFH(stomatin/prohibitin/flotillin/HflK/C)的蛋白家族,是重要的脂筏标识性蛋白,它们不仅被动地担当着非胞膜窖脂筏的脚架,为蛋白质的相互作用和蛋白质复合体的组装以及信号转导提供平台,而且本身还主动地扮演着信号蛋白的角色,在许多的细胞事件中发挥重要作用.PrPc与flotillin能够发生相互作用,flotillin蛋白为PrPc的跨膜信号转导和PrPc转变成PrPc提供了环境.本文重点综述了近5年来关于PrPc和flotillin蛋白功能的研究进展,尤其是信号转导方面的研究.

关键词：浮舰蛋白海绵状脑病细胞型朊蛋白信号转导脂筏蛋白

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山羊痘病毒P32基因真核表达载体的构建及表达

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新疆农业大学学报 2008年第3期31卷 1-4页

作者：谢芳张强颜新敏吴国华李健朱海霞郭爱疆韩若婵施程洪鞠厚斌朱彩珠岳城才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052

从重组克隆载体pMD18-P32中扩增出山羊痘病毒P32基因,与毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K相连接,构建重组表达载体pPIC9K-P32。重组质粒pPIC9K-P32用SalⅠ线性化后,与毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115混合后电转化,使重组表达载体与酵母染... 详细信息

从重组克隆载体pMD18-P32中扩增出山羊痘病毒P32基因,与毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K相连接,构建重组表达载体pPIC9K-P32。重组质粒pPIC9K-P32用SalⅠ线性化后,与毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115混合后电转化,使重组表达载体与酵母染色体发生同源重组。采用G418抗性梯度筛选法得到高拷贝重组菌株,甲醇诱导目的基因表达。SDS-PAGE和Western-blotting分析结果表明,用酵母成功表达出了31 kD的重组蛋白,该蛋白具有生物学活性,能被山羊痘阳性血清识别。

关键词：山羊痘病毒 P32基因毕赤酵母诱导表达

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口蹄疫病毒双效疫苗载体的构建及其体外表达研究

口蹄疫病毒双效疫苗载体的构建及其体外表达研究

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首届中国兽药大会暨中国畜牧兽医学会动物药品学分会2008年学术年会

作者：杨彬兰喜殷相平李学瑞李宝玉方玉萍柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室／农业部畜禽病毒学重点开放实验室，甘肃兰州 730046

用RT-PCR法获得了针对口蹄疫病毒(FMDV)基因组5'非编码区内包含病毒复制起始元件的基因片段ASCN及其结构蛋白VP1基因，将其分别克隆至双顺反子表达载体pIRES中，构建成了双表达质粒pASCN-IR-VP1经酶切、PCR及DNA测序分析表明ASCN及... 详细信息

用RT-PCR法获得了针对口蹄疫病毒(FMDV)基因组5'非编码区内包含病毒复制起始元件的基因片段ASCN及其结构蛋白VP1基因，将其分别克隆至双顺反子表达载体pIRES中，构建成了双表达质粒pASCN-IR-VP1经酶切、PCR及DNA测序分析表明ASCN及VP1基因已正确地插入到pIRES中，编码序列及插入方向均正确。用脂质体介导法将双效表达质粒导入BHK-21细胞后，经RT-PCR、实时荧光定量PCR检测表明双效表达质粒中的ASCN在细胞中得到了有效转录，mRNA的表达量达到了1.27x106个拷贝/μL。;经夹心ELISA及间接免疫荧光标记等试验表明VP1结构蛋白基因在BHK-21细胞中得到了表达，具有良好的生物学活性。双效质粒pASCN-IR-VPI转染IBRS-2细胞24h后，按100TCID50/0.1mL的量接FMDVOMⅢ毒，结果该质粒能够明显地抑制FMDV的复制，使病变时间推迟约16～18h，接毒48h时的抑制率达到60％以上，蚀斑减少试验也证实了该双效质粒的病毒抑制作用。研究结果表明成功构建了FMDV双效表达载体，为进一步研究双效疫苗免疫效力提供了前期基础。

关键词：口蹄疫病毒反义RNA pIRES 双效疫苗载体疫苗免疫效力实时荧光定量PCR检测

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三种乳化剂对疫苗乳液稳定性的影响

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甘肃农业大学学报 2008年第3期43卷 21-24页

作者：黄振华王永录李晓明张永光方玉珍蒋守田潘丽刘力宽吕建亮甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所国家家畜疫病病原生物学重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

采用正交试验L9(34),对F-188、ELP和TWEEN-80三种乳化剂的复配比例进行了研究.结果表明:F-188∶ELP∶TWEEN-80的比例为1∶3∶3时,疫苗乳液的稳定性最好,黏度较小,乳液颗粒直径皆在0.2μm以下,且粒径均匀.方差分析表明,3种乳化剂对乳液... 详细信息

采用正交试验L9(34),对F-188、ELP和TWEEN-80三种乳化剂的复配比例进行了研究.结果表明:F-188∶ELP∶TWEEN-80的比例为1∶3∶3时,疫苗乳液的稳定性最好,黏度较小,乳液颗粒直径皆在0.2μm以下,且粒径均匀.方差分析表明,3种乳化剂对乳液稳定性的影响差异极显著(P<0.01),且ELP、TWEEN-80的乳化效果极显著优于F-188.

关键词：乳化剂 F-188 ELP TWEEN-80 疫苗乳液稳定性

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液相阻断ELISA在口蹄疫病毒抗体水平检测中的应用

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甘肃农业大学学报 2008年第3期43卷 18-20页

作者：刘俊林祁淑芸马军武崔燕甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所国家家畜疫病病原生物学重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

分别利用口蹄疫病毒Asia-I型和O型液相阻断ELISA方法,对健康猪、牛、羊血清,O型、Asia-I型免疫血清,以及人工感染Asia-I型FMDV的猪、羊血清和人工感染O型FMDV牛血清进行了抗体水平检测,同时利用3ABC-I-ELISA对液相阻断ELISA方法所选的... 详细信息

分别利用口蹄疫病毒Asia-I型和O型液相阻断ELISA方法,对健康猪、牛、羊血清,O型、Asia-I型免疫血清,以及人工感染Asia-I型FMDV的猪、羊血清和人工感染O型FMDV牛血清进行了抗体水平检测,同时利用3ABC-I-ELISA对液相阻断ELISA方法所选的部分阴性血清进行了验证试验.结果显示:利用Asia-I型和O型液相阻断ELISA方法筛选的阴性动物,在免疫和攻毒后,血清抗体水平显著升高,表明该法可完全用于口蹄疫阴性动物筛选及口蹄疫病毒抗体水平的检测.

关键词：口蹄疫抗体水平液相阻断ELISA

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转录介导的扩增技术及其在诊断中的应用

转录介导的扩增技术及其在诊断中的应用

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第二届中国生物产业大会

作者：高闪电常惠芸独军政丛国正邵军军林彤中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州 730046

转录介导的扩增技术(TMA)是一种利用RNA聚合酶和逆转录酶在约42℃等温反应条件下来扩增RNA或DNA的系统,其原理是带有T7 RNA聚合酶识别的启动子序列的启动子引物与模板退火经反转录形成RNA-DNA杂交分子,被反转录酶的RNase H活性水解形成... 详细信息

转录介导的扩增技术(TMA)是一种利用RNA聚合酶和逆转录酶在约42℃等温反应条件下来扩增RNA或DNA的系统,其原理是带有T7 RNA聚合酶识别的启动子序列的启动子引物与模板退火经反转录形成RNA-DNA杂交分子,被反转录酶的RNase H活性水解形成单链DNA,然后与引物2退火,通过反转录合成双链DNA,在T7 RNA聚合酶的作用下转录,由一分子DNA模板可得到100～1000拷贝转录本,在15～30min内可将靶序列扩增1010左右.TINA是比较敏感的核酸扩增技术，其检测比较简便，适合高通量筛选，在人类白细胞抗原等位基因分型、细菌和病毒的快速检测中发挥了重要作用。本文就转录介导的扩增技术在诊断中的应用进行论述.

关键词：转录介导扩增技术 RNA聚合酶逆转录酶快速检测

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H9N2亚型禽流感病毒NA基因的原核表达及其免疫反应性分析

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甘肃农业大学学报 2008年第3期43卷 29-32页

作者：易华山侯顺利独军政胡永浩包世俊常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

采用PCR方法扩增H9N2亚型禽流感病毒A/Ck/GS/2/99株NA基因(1 400 bp),克隆至pET-28a(+)载体上,构建重组原核表达载体pET-NA,转化***21(DE3)感受态细胞,以终浓度0.8 mmol/L的IPTG诱导表达8 h.表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析表明:... 详细信息

关键词：禽流感血凝素原核表达 H9N2 免疫反应性

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