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中国人兽共患病学报 2007年第12期23卷 1249-1251,1254页

作者：易华山侯顺利独军政常惠芸丛国正胡永浩中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

目的对禽流感病毒HA基因进行原核表达并对其产物进行免疫反应性分析。方法采用PCR方法扩增禽流感病毒A/Ck/GS/2/99(H9N2)的HA基因(1723bp);并将该片段克隆至pET-28a(+)质粒,构建重组质粒pET-HA,用该重组质粒转化***21(DE3)感受态细胞,... 详细信息

目的对禽流感病毒HA基因进行原核表达并对其产物进行免疫反应性分析。方法采用PCR方法扩增禽流感病毒A/Ck/GS/2/99(H9N2)的HA基因(1723bp);并将该片段克隆至pET-28a(+)质粒,构建重组质粒pET-HA,用该重组质粒转化***21(DE3)感受态细胞,以终浓度0.7mmol/L的IPTG诱导表达7h。结果成功构建了表达载体pET-HA,该载体能高效表达HA蛋白,相对分子质量约62kDa,在约62kDa处出现一条明显的特异性蛋白条带。结论成功表达了禽流感病毒HA蛋白,该蛋白纯化产物能与H9亚型的AIV鸡血清发生特异性反应。

关键词：禽流感血凝素 H9N2 原核表达免疫反应性

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胸膜肺炎放线杆菌APX ⅢA基因的克隆及原核表达

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黑龙江畜牧兽医 2007年第11期 73-75页

作者：贺英逯忠新石琴赵萍储岳峰高鹏程中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus ***，APP）是引起猪传染性胸膜肺炎（porcine infectious pleuropneumonia）的病原菌。该菌为革兰阴性菌，根据其生长是否需要V因子（NAD，尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸）可将其分为2个生物型，即生物Ⅰ型... 详细信息

胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus ***，APP）是引起猪传染性胸膜肺炎（porcine infectious pleuropneumonia）的病原菌。该菌为革兰阴性菌，根据其生长是否需要V因子（NAD，尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸）可将其分为2个生物型，即生物Ⅰ型和生物Ⅱ型。生物Ⅰ型具有致病性。根据可溶性荚膜多糖（CPS）和脂多糖（LPS）的特性，可将生物Ⅰ型分为12个血清型。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌原核表达 APX 猪传染性胸膜肺炎克隆基因革兰阴性菌生物型

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猪胸膜肺炎放线杆菌结构蛋白基因ApxIVA特异性片段的表达和纯化

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江西农业大学学报 2007年第2期29卷 246-249,256页

作者：石琴逯忠新贺英赵萍储岳峰高鹏程中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

以猪胸膜肺炎放线杆菌的血清8型分离株Hpn-405株基因组DNA为模板,PCR方法扩增ApxIVA特异性片段,PCR产物经纯化后与载体pMD18-T进行连接、转化,经酶切及序列分析鉴定后,亚克隆到原核表达载体pET-28a中,构建成重组表达质粒pET-ApxIVA3,转... 详细信息

以猪胸膜肺炎放线杆菌的血清8型分离株Hpn-405株基因组DNA为模板,PCR方法扩增ApxIVA特异性片段,PCR产物经纯化后与载体pMD18-T进行连接、转化,经酶切及序列分析鉴定后,亚克隆到原核表达载体pET-28a中,构建成重组表达质粒pET-ApxIVA3,转入到大肠埃希氏菌BL21(DE3)中,以IPTG进行诱导重组蛋白的表达,SDS-PAGE检测结果显示,表达的融合蛋白分子质量约为18 ku,与预期片段大小相符;将经过超声破碎的菌液离心取沉淀经尿素洗涤溶解后用镍金属螯合层析柱进行纯化。Western-blot分析证实,该融合蛋白具有免疫学活性。

关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌 ApxIVA,表达蛋白纯化

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我国禽衣原体病流行情况及防制措施

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中国家禽 2007年第10期29卷 26-27页

作者：周继章邱昌庆中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

禽衣原体病（avian chlamydiosis，AC）是由鹦鹉热嗜性衣原体（Chlamydophila psittaci）感染禽类引起的一种接触性传染病。同义名有鹦鹉热、鸟疫，前者指鹦鹉感染的AC；后者主要指鹦鹉以外的鸟类感染的AC。实际上，从鹦鹉及非鹦鹉鸟类... 详细信息

禽衣原体病（avian chlamydiosis，AC）是由鹦鹉热嗜性衣原体（Chlamydophila psittaci）感染禽类引起的一种接触性传染病。同义名有鹦鹉热、鸟疫，前者指鹦鹉感染的AC；后者主要指鹦鹉以外的鸟类感染的AC。实际上，从鹦鹉及非鹦鹉鸟类分离出的致病性衣原体株可以交叉感染，引起同样的疾病。AC是一种全球性疫病，几乎所有的禽种均可自然感染衣原体。

关键词：衣原体病禽类防制措施流行情况交叉感染接触性传染病鹦鹉热自然感染

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丝状支原体山羊亚种抗体间接血凝检测方法的建立及应用

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畜牧与兽医 2007年第10期39卷 64-66页

作者：储岳峰逯忠新赵萍高鹏程贺英石琴中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

将丝状支原体山羊亚种PG3株经超声波破碎处理后的产物致敏经戊二醛和鞣酸处理过的绵羊红细胞,建立了检测丝状支原体山羊亚种抗体的间接血凝试验方法。抗原致敏红细胞的最佳浓度是100～125μg/mL,超免血清抗体效价达1:512～1:1024。免疫... 详细信息

将丝状支原体山羊亚种PG3株经超声波破碎处理后的产物致敏经戊二醛和鞣酸处理过的绵羊红细胞,建立了检测丝状支原体山羊亚种抗体的间接血凝试验方法。抗原致敏红细胞的最佳浓度是100～125μg/mL,超免血清抗体效价达1:512～1:1024。免疫山羊2周后血清抗体检出率为83.3%,对羊布氏杆菌、绵羊肺炎支原体阳性血清检测均为阴性,敏感性明显高于琼脂扩散试验。对628份田间血清进行检测,阳性率为44.9%。结果表明,该法敏感性较高、特异性强和重复性好,可用于山羊传染性胸膜肺炎免疫抗体水平的监测和流行病学调查。

关键词：丝状支原体山羊亚种间接血凝试验抗体检测

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猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体间接ELISA方法的建立

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生物工程学报 2007年第5期23卷 961-966页

作者：王光华独军政丛国正邵军军林彤薛慧文常惠芸谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730076

将口蹄疫病毒(FMDV)的VP1基因,通过pPROex-HT表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,获得大小为31ku的融合蛋白,Westernblot检测证实表达的该蛋白具有良好的生物学活性。以纯化的融合蛋白为抗原建立了猪FMDVVP1蛋白间接ELISA检测方法... 详细信息

将口蹄疫病毒(FMDV)的VP1基因,通过pPROex-HT表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,获得大小为31ku的融合蛋白,Westernblot检测证实表达的该蛋白具有良好的生物学活性。以纯化的融合蛋白为抗原建立了猪FMDVVP1蛋白间接ELISA检测方法。通过对80份田间血清样品的检测表明,该方法与FMDV液相阻断ELISA(国标试剂盒)的总符合率为96.25%,表明建立的VP1蛋白间接ELISA检测方法具有很好的特异性和敏感性。

关键词：口蹄疫病毒抗体 VP1蛋白间接ELISA

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H9N2亚型禽流感病毒聚合酶基因的克隆及序列分析

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中国兽医科学 2007年第3期37卷 195-199页

作者：侯顺利易华山独军政胡永浩常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

采用RT-PCR方法对1株H9N2亚型禽流感病毒Ck/GS/2/99株RNA聚合酶基因PB2、PB1和PA分别进行了扩增,将其克隆到pGEM-T easy载体后进行序列测定与分析。结果表明,该株病毒的PB2、PB1和PA基因开放阅读框(ORF)分别由2280、2274和2 151个碱基组... 详细信息

采用RT-PCR方法对1株H9N2亚型禽流感病毒Ck/GS/2/99株RNA聚合酶基因PB2、PB1和PA分别进行了扩增,将其克隆到pGEM-T easy载体后进行序列测定与分析。结果表明,该株病毒的PB2、PB1和PA基因开放阅读框(ORF)分别由2280、2274和2 151个碱基组成,分别编码759、757和716个氨基酸。经同源性与系统发生树分析,该毒株RNA聚合酶基因PB2、PB1和PA与Ck/NX/4/99株的核苷酸和氨基酸同源性均在98%以上,另外这3个基因与Dk/HK/Y280/97、Sw/HK/9/98和Qu/HK/NT/28/99株的关系密切。

关键词：禽流感病毒 H9N2亚型A/Chicken/Gansu/2/99株聚合酶基因序列分析

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猪链球菌2型mrp基因ORF1序列的克隆及原核表达

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中国兽医科学 2007年第8期37卷 675-678页

作者：孙瑜隆柳纪省魏虎来李学瑞兰州大学医学试验中心甘肃兰州730000 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

根据猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白基因(mrp)的序列,设计并合成了1对特异性引物,以青海株的基因组DNA为模板扩增了mrp基因ORF1序列。将PCR产物进行了T/A克隆,转化大肠杆菌,鉴定成功获得目的片段后,将其定向亚克隆到pET-28a(+)中,构建了原... 详细信息

根据猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白基因(mrp)的序列,设计并合成了1对特异性引物,以青海株的基因组DNA为模板扩增了mrp基因ORF1序列。将PCR产物进行了T/A克隆,转化大肠杆菌,鉴定成功获得目的片段后,将其定向亚克隆到pET-28a(+)中,构建了原核表达质粒pET-28a-mrp,并将其转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,经1 mmol/L IPTG诱导和SDS-PAGE分析,出现了与预期目的蛋白一致的外源蛋白带(27.0 ku)。Western-blot分析表明,该融合蛋白具有MRP的抗原表位。研究结果为今后开展该病的免疫学研究奠定了一定基础。

关键词：猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白融合表达

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口蹄疫病毒整联蛋白受体的研究进展

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中国兽医科学 2007年第2期37卷 181-184页

作者：杜平尚佑军贺延玉孙晓林马军武中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

从组织分布、各毒株利用率、配体结合区介导感染的能力及β亚基胞质区作用等方面论述了4种整联蛋白ανβ1、ανβ3、ανβ6和ανβ8的研究进展,旨在阐明各整联蛋白决定口蹄疫病毒宿主组织嗜性的作用,并为口蹄疫病毒致病机制的研究... 详细信息

从组织分布、各毒株利用率、配体结合区介导感染的能力及β亚基胞质区作用等方面论述了4种整联蛋白ανβ1、ανβ3、ανβ6和ανβ8的研究进展,旨在阐明各整联蛋白决定口蹄疫病毒宿主组织嗜性的作用,并为口蹄疫病毒致病机制的研究提供理论依据。

关键词：口蹄疫病毒整联蛋白受体介导感染

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朊毒体蛋白的构象及其特性的研究进展

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中国兽医科学 2007年第12期37卷 1094-1098页

作者：陈豪泰刘永生张杰吴润刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

概述了朊毒体（包括构象不同的细胞型朊毒体和瘁病型朊毒体）蛋白的构象特征、朊毒体及其突变体的特性，阐明了PrP^sc是由PrP^c通过构象转变而成的，不同物种PrP的三维结构有相似的球形结构域（125-228位）和N-末端无规卷曲尾，其球形... 详细信息

概述了朊毒体（包括构象不同的细胞型朊毒体和瘁病型朊毒体）蛋白的构象特征、朊毒体及其突变体的特性，阐明了PrP^sc是由PrP^c通过构象转变而成的，不同物种PrP的三维结构有相似的球形结构域（125-228位）和N-末端无规卷曲尾，其球形结构域均由3个螺旋（144～154、173～194和200-228位）以及1对反平行的β-折叠（128-131和161-164）组成，但其结构和表面电荷分布存在一些区别。

关键词：朊毒体蛋白构象特性

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