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禽流感病毒H5N2亚A/Chicken/Gansu/2003株HA+NA基因重组腺病毒的构建

禽流感病毒H5N2亚A/Chicken/Gansu/2003株HA+NA基因重组腺病毒的...

2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：李宝玉殷相平李学瑞兰喜杨斌方玉萍柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开发实验室兰州 730046

目的：基于腺病毒可感染禽类呼吸道和肠道上皮黏膜的特性，本文构建了包含有禽流感病毒H5N2亚型HA和NA基因的重组腺病毒，为进一步研制口服禽流感活载体疫苗奠定基础。方法：通过RT-PCR方法分别扩增出AIV的HA和NA全基因片段，利用... 详细信息

目的：基于腺病毒可感染禽类呼吸道和肠道上皮黏膜的特性，本文构建了包含有禽流感病毒H5N2亚型HA和NA基因的重组腺病毒，为进一步研制口服禽流感活载体疫苗奠定基础。方法：通过RT-PCR方法分别扩增出AIV的HA和NA全基因片段，利用拼接接头将HA和NA定向串联并插入到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV之中，然后在大肠杆菌中实现腺病毒骨架载体pAdEasy-1和重组腺病毒穿梭载体的同源重组，获得插有外源基因的重组腺病毒质粒，进而通过转染HEK293细胞，得到含有目的基因HA和NA的重组腺病毒。结果:在pAdTrack-CMV载体中成功克隆了HA+NA双基因，并与腺病毒骨架载体在大肠杆菌中实现了同源重组;线性化后的重组腺病毒质粒转染HEK293细胞后可观察到典型的细胞病变和绿色荧光蛋白的表达。结论:成功获得了含有HA+NA双基因重的组腺病毒，为口服活载体疫苗的研制提供了依据。

关键词：禽流感病毒重组腺病毒同源重组

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病毒受体及其研究方法进展

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生物技术通讯 2007年第5期18卷 856-858页

作者：独军政常惠芸高闪电才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

病毒性感染具有宿主种属特异性和组织嗜性,这主要由病毒受体决定。受体是介导病毒入侵的决定因素,研究病毒受体对了解病毒与细胞的相互作用至关重要。近年来,研究受体的方法除了传统的病毒覆盖蛋白结合法、单克隆抗体法、免疫共沉淀、... 详细信息

病毒性感染具有宿主种属特异性和组织嗜性,这主要由病毒受体决定。受体是介导病毒入侵的决定因素,研究病毒受体对了解病毒与细胞的相互作用至关重要。近年来,研究受体的方法除了传统的病毒覆盖蛋白结合法、单克隆抗体法、免疫共沉淀、亲和层析等外,出现了许多如噬菌体表面展示技术、酵母双杂交技术、cDNA文库等分子生物学新方法。简要综述了病毒受体及其研究方法的相关进展。

关键词：病毒细胞受体研究方法

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口蹄疫病毒对牦牛持续性感染的分析

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浙江农业科学 2007年第4期48卷 468-471页

作者：周建华丛国正王光华高闪电常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

利用口蹄疫病毒株Akesu/58感染牦牛来建立口蹄疫病毒持续性感染动物模型。连续饲养12个月,每月采集牦牛血液并利用酶联免疫吸附试验检测中和抗体的效价和3ABC非结构蛋白的OD值。3ABC非结构蛋白OD值的数据统计采用SPSS11.5软件包中的Curv... 详细信息

利用口蹄疫病毒株Akesu/58感染牦牛来建立口蹄疫病毒持续性感染动物模型。连续饲养12个月,每月采集牦牛血液并利用酶联免疫吸附试验检测中和抗体的效价和3ABC非结构蛋白的OD值。3ABC非结构蛋白OD值的数据统计采用SPSS11.5软件包中的Curve Estimation进行曲线回归。利用体外细胞实验来检测口蹄疫病毒毒力的变化情况。结果显示,口蹄疫病毒的毒力是逐渐下降的,中和抗体和3ABC的含量均呈下降趋势,并且可人为地划分两个阶段。由于口蹄疫病毒凭借VP1蛋白、L和3C蛋白酶对牦牛的致病性,在第一个阶段内,体液免疫被认为是牦牛机体抗击FMDV感染的主要形式;在第二阶段,细胞免疫被认为是机体抗击FMDV感染的主要形式。

关键词：口蹄疫病毒持续性感染体液免疫细胞免疫

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口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白αvβ6的分子特征

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浙江农业科学 2007年第5期48卷 596-600页

作者：高闪电独军政常惠芸从国正邵军军林彤周建华王光华谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

为研究整联蛋白αvβ6在口蹄疫病毒感染中的作用,本实验从FMDV试验感染康复猪的舌皮和肺组织中克隆到了整联蛋白αv和β6亚基的基因并将新基因β6登录到GenBank中,登录号为EF432729。猪整联蛋白β6亚基基因的编码区含有2 367个核苷酸,编... 详细信息

为研究整联蛋白αvβ6在口蹄疫病毒感染中的作用,本实验从FMDV试验感染康复猪的舌皮和肺组织中克隆到了整联蛋白αv和β6亚基的基因并将新基因β6登录到GenBank中,登录号为EF432729。猪整联蛋白β6亚基基因的编码区含有2 367个核苷酸,编码788个氨基酸残基,其信号肽由26个氨基酸组成,胞外域由681个氨基酸组成,跨膜区由29个氨基酸组成,胞浆域由52个氨基酸组成。β6亚基含有9个潜在的糖基化位点,3个氨基葡聚糖结合位点,1个依赖于cGMP的蛋白激酶磷酸化位点,10个蛋白激酶C磷酸化位点,2个表皮生长因子相似结构域和2个半胱氨酸丰富区。生物学软件分析发现β6亚基和αv亚基都有头部、茎部和胞浆域组成,且二亚基形成了比较复杂的三级结构,是其发挥生物学功能的结构基础。本实验为进一步深入研究FMDV嗜性、与宿主细胞的相互作用、病毒的侵入机制等问题奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒受体猪整联蛋白αvβ6 分子特征

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口蹄疫病毒3C蛋白酶的结构及功能研究进展

口蹄疫病毒3C蛋白酶的结构及功能研究进展

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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：杨彬兰喜殷相平李学瑞李宝玉方玉萍柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州 730046

口蹄疫病毒能引起牛、羊等偶蹄动物发生高度接触性的传染病口蹄疫，该病常常影响着全球畜牧业的发展。 FMDV是小RNA病毒科口蹄疫病毒属的成员，口蹄疫病毒为单股正链RNA病毒，病毒基因组全长约8.5kb，基因组分为5'非编码区、3&#... 详细信息

口蹄疫病毒能引起牛、羊等偶蹄动物发生高度接触性的传染病口蹄疫，该病常常影响着全球畜牧业的发展。 FMDV是小RNA病毒科口蹄疫病毒属的成员，口蹄疫病毒为单股正链RNA病毒，病毒基因组全长约8.5kb，基因组分为5'非编码区、3'非编码区和一个开放阅读框(ORF)。基因组的中部是一大的开放阅读框，编码一多聚蛋白，多聚蛋白在翻译的同时，经二级裂解后，形成3种病毒结构蛋白(VP0，VP3，VP1)和8种非结构蛋白(L，2A，2B，2C，3A，3B，3C和3D)。其中3C全长639nt，编码213个氨基酸。3C蛋白酶是小RNA病毒的共同裂解酶，在多聚蛋白成熟过程中起着极为重要的作用，且在抗病毒药物打靶方面具有一定研究价值。因此，对3C蛋白酶的结构及功能研究进展进行综述很有必要。

关键词：蛋白酶口蹄疫病毒多聚蛋白

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猪源冠状病毒ORF3和ORF7的克隆及特性分析

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甘肃农业大学学报 2007年第6期42卷 1-7页

作者：李建强柳纪省程杰兰喜胡永浩吴润殷相平李宝玉中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

参照GenBank中Purdue株全序列对TGEV(猪传染性胃肠炎病毒)TS株的ORF3和ORF7各设计1对特异性引物,经RT-PCR扩增分别获得了1 487 bp和516 bp大小的两个片段,与预期结果大小相符.TS株与CHV株、Puedue株、BW021898B株和KT2株的ORF3a核苷酸... 详细信息

参照GenBank中Purdue株全序列对TGEV(猪传染性胃肠炎病毒)TS株的ORF3和ORF7各设计1对特异性引物,经RT-PCR扩增分别获得了1 487 bp和516 bp大小的两个片段,与预期结果大小相符.TS株与CHV株、Puedue株、BW021898B株和KT2株的ORF3a核苷酸序列同源性分别为99.1%、93.0%、95.9%、94.4%,相应的氨基酸同源性分别为97.3%、87.8%、93.2%、91.8%,TS株与CHV株、Puedue株、BW021898B株和KT2株的ORF3b核苷酸序列同源性分别为99.5%、98.5%、97.0%、97.8%,相应氨基酸的同源性分别为98.4%、96.3%、94.3%、95.8%,而TS株与PRCVIA1894株的ORF3b核苷酸和氨基酸同源性分别为96.6%和93.9%.TS株ORF7没有发生缺失且和其他毒株有很高的同源性.结果表明:TGEV非结构蛋白高变区在ORF3a第192个碱基至终止密码子之间,TGEV和PRCV在编码ORF3b氨基酸的数量和RNA酶结合位点上有一定的差异.

关键词：猪源冠状病毒传染性胃肠炎病毒 ORF3 ORF7 克隆

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三株猪2型圆环病毒甘肃分离株的全基因组序列分析

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甘肃农业大学学报 2007年第3期42卷 1-6页

作者：马友记柳纪省李志勇殷相平杨彬李发弟张利中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物科学技术学院甘肃兰州730070

根据GenBank中发表的猪2型圆环病毒（PCV2）全基因组序列,设计合成了2对引物,采用PCR方法对来自甘肃不同猪场的3份病料中的PCV2进行基因的扩增、克隆和测序,得到全基因组长度为1 768 bp的PCV2Ww株（登录号DQ322701）以及全基因组长度为1... 详细信息

根据GenBank中发表的猪2型圆环病毒（PCV2）全基因组序列,设计合成了2对引物,采用PCR方法对来自甘肃不同猪场的3份病料中的PCV2进行基因的扩增、克隆和测序,得到全基因组长度为1 768 bp的PCV2Ww株（登录号DQ322701）以及全基因组长度为1 767 bp的PCV2 LZ株和TS株（登录号DQ363860和DQ355153）.应用DNAstar软件序列分析可得,3个分离株全基因组与国内外参考毒株核苷酸序列同源性在94.8%~99.4%,3个分离株之间的核苷酸序列同源性为96.4%~99.4%;PCV2分离株与PCV1分离株核苷酸序列同源性为69.0%~70.0%;ORF1和ORF2所编码的氨基酸序列与国内外PCV2毒株比较,同源性也很高,分别为99.0%~99.4%和92.7%~98.7%.进化树分析表明,PCV2分离毒株在进化上存在地域上的相关性.

关键词：猪2型圆环病毒基因组 ORF1 ORF2 序列分析

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基因芯片技术及口蹄疫病毒基因芯片研究进展

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动物医学进展 2007年第B08期28卷 37-40页

作者：王建东郭建宏杨春生刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室宁夏动物防疫站宁夏银川750001

口蹄疫的暴发与流行给世界各国的畜牧生产、社会经济和国际贸易构成严重威胁并造成巨大的经济损失,经典的血清学和PCR检测方法越来越不适应进出口动物检疫的快速、准确、高通量的要求。建立一种快速的诊断方法,使其在很短时间能够区别... 详细信息

口蹄疫的暴发与流行给世界各国的畜牧生产、社会经济和国际贸易构成严重威胁并造成巨大的经济损失,经典的血清学和PCR检测方法越来越不适应进出口动物检疫的快速、准确、高通量的要求。建立一种快速的诊断方法,使其在很短时间能够区别各血清型口蹄疫和其他水泡性疾病是非常必要的。口蹄疫病毒基因芯片包括155个寡核苷酸探针,总长35bp～45bp,设计在VP3-VP1-2A区,既有共有的病毒型别,也包含特异的血清型别。这项技术的优点是能在单一的芯片上检测多元病原体。

关键词：口蹄疫病毒基因芯片检测

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山羊痘病毒通用转移载体的构建及鉴定

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中国兽药杂志 2007年第2期41卷 1-4,9页

作者：鞠厚斌张强郑海学施程洪韩若婵谢芳吴国华颜新敏李健朱海霞朱彩珠卫广森沈阳农业大学畜牧兽医学院辽宁沈阳110161 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

转移载体的构建是重组羊痘病毒构建的重要环节,在分析羊痘病毒基因组的基础上,以TK基因为插入靶序列,经PCR、酶切鉴定,获得了带有EcoRⅠ、BamHⅠ酶切位点的TK基因片段。将此片段与经相同酶切的pUC119载体连接,构建转移载体pUC119-TK,并... 详细信息

转移载体的构建是重组羊痘病毒构建的重要环节,在分析羊痘病毒基因组的基础上,以TK基因为插入靶序列,经PCR、酶切鉴定,获得了带有EcoRⅠ、BamHⅠ酶切位点的TK基因片段。将此片段与经相同酶切的pUC119载体连接,构建转移载体pUC119-TK,并且以此为基础构建表达绿色荧光蛋白山羊痘病毒转移载体pTK-P7.5-GFP。将pTK-P7.5-GFP转染羊痘病毒感染的BHK21细胞,48 h后报告基因得到表达,这为羊痘病毒载体系统的进一步开发奠定了基础。

关键词：羊痘病毒 TK基因转移载体构建鉴定

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反义核酸技术及其在口蹄疫中的应用

反义核酸技术及其在口蹄疫中的应用

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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：韩晓荣柳纪省杨彬中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州 730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州 730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州 730046

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。虽然传统疫苗已被广泛应用，但是免疫效果均不理想。随着分子生物学的迅速发展，反义核酸技术已成为基因治疗的一种重要方法，在口蹄疫的防治中有良好的前景。

关键词：反义核酸口蹄疫疫苗

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