检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2006年第12期36卷 951-954页

作者：王光华独军政薛慧文李冬刘萍易华山常惠芸甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046

在大肠杆菌BL21(DE3)中分别表达了牛IFN-α基因、亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒(FMDV)VP1和VP1 C末端基因,并纯化了所表达的蛋白。用透析的方法进行蛋白复性后制成油乳剂疫苗,经皮下多点注射免疫小鼠,以MTT法检测小鼠脾淋巴细胞经植物血凝素(PHA)... 详细信息

在大肠杆菌BL21(DE3)中分别表达了牛IFN-α基因、亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒(FMDV)VP1和VP1 C末端基因,并纯化了所表达的蛋白。用透析的方法进行蛋白复性后制成油乳剂疫苗,经皮下多点注射免疫小鼠,以MTT法检测小鼠脾淋巴细胞经植物血凝素(PHA)刺激后的增殖反应活性;以液相阻断ELISA检测血清FMDV特异抗体的变化。结果表明,重组VP1(rVP1)和rVP1 C末端蛋白能单独诱发小鼠的体液免疫反应和微量的细胞免疫反应,而与重组牛IFN-α(rBoIFN-α)共同接种的小鼠,体液免疫反应和细胞免疫反应更为明显。

关键词：口蹄疫病毒 VP1基因蛋白表达免疫反应佐剂

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口蹄疫O-A-AsiaⅠ型三价灭活疫苗免疫效力和最小免疫剂量的研究

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中国兽医科学 2006年第4期36卷 278-281页

作者：王永录张永光方玉珍蒋守田潘丽刘力宽吕建亮张维德甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046

为确定口蹄疫O-A-AsiaⅠ型三价灭活疫苗的安全性和免疫效果，按OIE口蹄疫疫苗效检标准和我国口蹄疫灭活疫苗质量标准，对实验室条件下制备的4批疫苗进行了安全性试验、免疫效力试验、免疫持续期试验、疫苗保存期试验和最小免疫剂量试验... 详细信息

为确定口蹄疫O-A-AsiaⅠ型三价灭活疫苗的安全性和免疫效果，按OIE口蹄疫疫苗效检标准和我国口蹄疫灭活疫苗质量标准，对实验室条件下制备的4批疫苗进行了安全性试验、免疫效力试验、免疫持续期试验、疫苗保存期试验和最小免疫剂量试验。结果显示，4批疫苗均对靶动物和实验动物安全，无任何毒副反应；对O、A、AsiaⅠ型口蹄疫的平均免疫效力分别为4．73、6．84和8．10PD50／头份；一次接种的有效免疫期达6个月；2～8℃下的疫苗保存期为12个月；适宜的免疫剂量为，6月龄以上牛每头3．0mL，6月龄以下牛每头1．5mL。该疫苗对接种动物安全，免疫效果良好，一次接种可同时预防O、A、AsiaⅠ型3个血清型的口蹄疫。

关键词：口蹄疫 O-A-AsiaⅠ型三价灭活疫苗免疫效力最小免疫剂量

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口蹄疫A型灭活疫苗毒种和种子批的研究

引用

中国兽医科学 2006年第5期36卷 371-375页

作者：王永录张永光方玉珍蒋守田潘丽刘力宽吕建亮张维德甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为了保证制苗及攻毒用毒种的质量和稳定性,在对制苗和攻毒毒种的毒力、特异性、保存期、扩繁代次等进行研究的基础上,建立了口蹄疫A型灭活疫苗制苗和攻毒用毒种种子批。结果表明,原始毒种和基础毒种的扩繁代次均控制在5代以内,适宜的保... 详细信息

为了保证制苗及攻毒用毒种的质量和稳定性,在对制苗和攻毒毒种的毒力、特异性、保存期、扩繁代次等进行研究的基础上,建立了口蹄疫A型灭活疫苗制苗和攻毒用毒种种子批。结果表明,原始毒种和基础毒种的扩繁代次均控制在5代以内,适宜的保存方法和保存期均为加含 500 mL／L甘油的PBS后在-30℃保存1年、-70℃保存2年;用于生产抗原的工作毒种,最高扩繁代次控制在15代以内,最佳保存方法和保存期为加保护剂后在-20℃保存半年、-70℃保存1 年;用于效力检验的攻毒毒种采用原始毒种。通过制苗和攻毒用毒种种子批的建立,规范了口蹄疫疫苗生产和检验过程中的毒种管理。

关键词：口蹄疫 A型灭活疫苗毒种种子批

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口蹄疫病毒转基因番茄对豚鼠诱导免疫保护

口蹄疫病毒转基因番茄对豚鼠诱导免疫保护

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中国畜牧兽医学会2006学术年会

分别构建了O型口蹄疫病毒China99株结构蛋白VP1基因及结构蛋白前体P1-2A、非结构蛋白3C及部分2B 基因(P1-2X3C)的植物表达载体,分别命名为pBin438／VP1及pBin438/P1-2X3C,通过农杆菌介导法转化番茄,对获得的卡那霉素抗性植株进行分子生... 详细信息

分别构建了O型口蹄疫病毒China99株结构蛋白VP1基因及结构蛋白前体P1-2A、非结构蛋白3C及部分2B 基因(P1-2X3C)的植物表达载体,分别命名为pBin438／VP1及pBin438/P1-2X3C,通过农杆菌介导法转化番茄,对获得的卡那霉素抗性植株进行分子生物学检测,85％的再生植株PCR检测阳性;RT-PCR结果证实VP1、P1-2X3C基因在转基因番茄中能够有效转录;将ELISA和Western blot检测阳性的转基因番茄叶片蛋白提取液经肌肉途径免疫豚鼠,于第3次免疫后 28d用100ID50／0．2mL的同源强毒攻击,结果表明口蹄疫病毒VP1、P1-2X3C转基因番茄的表达产物具有良好的免疫原性, 豚鼠3免后血清效价可达1:64-1:128,攻毒后两组免疫豚鼠保护率分别达4/5和5/5。

关键词：口蹄疫病毒转基因番茄免疫原性豚鼠

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Asia1型口蹄疫病毒YNBS／58株基因组特征及其表达研究

Asia1型口蹄疫病毒YNBS／58株基因组特征及其表达研究

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中国畜牧兽医学会2006学术年会

本研究利用RT-PCR方法测定了Asial型口蹄疫病毒YNBS／58株的基因组序列,全长为8164nt,编码区长 6990nt,编码2329个氨基酸;P1基因由2199nt组成,其中VP4、VP2、VP3、VP1基因依次包括255nt、657nt、654nt和633nt,5’非编码区长1061nt,其中S片段长371nt,核糖体进入位点(IRES)片段435nt,功能未知区255nt;3’非编码区长113nt。在完成了基因组测序的基础上,将结构蛋白基因P1、VP1、VP1C末端(cVP1)及VP1-牛干扰素a(boIFNa)融合基因分别克隆到原核表达载体中诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析表明,实现了重组P1、VP1、cVP1和VP1-boIFNa蛋白在大肠杆菌中的高效表达。重组蛋白均以不溶性的包涵体形式存在于菌体中。利用蛋白纯化试剂盒对重组蛋白进行了有效纯化。

关键词： Asial型口蹄疫病毒基因组特征结构蛋白表达

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RNA干扰及其应用进展

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动物医学进展 2006年第6期27卷 1-5页

作者：孙德惠才学鹏常惠芸独军政中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA介导的基因沉默现象。RNAi主要发生在核外,RNAi具有操作简便快速等特点。RNAi现象自发现至今已逾10年,在此期间,已将研究重点由机理研究转向应用研究。文章以RNAi的应用为重点,从RNAi的... 详细信息

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA介导的基因沉默现象。RNAi主要发生在核外,RNAi具有操作简便快速等特点。RNAi现象自发现至今已逾10年,在此期间,已将研究重点由机理研究转向应用研究。文章以RNAi的应用为重点,从RNAi的起源、可能的作用机制、作用特点、研究方法、应用前景及展望等方面进行了综述。

关键词： RNA干扰双链RNA 基因沉默作用机制研究方法

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RNAi及其抑制口蹄疫病毒复制的研究进展

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生物技术通报 2006年第6期22卷 34-37页

作者：独军政常惠芸才学鹏谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指由双链RNA(double strand RNA,dsRNA)介导的序列特异的RNA降解过程。已经证明,在植物和昆虫细胞中RNAi是其主要的抗病毒免疫机制,至今为止几乎没有发现在病毒感染哺乳动物细胞过程中诱发有效的抗病毒... 详细信息

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指由双链RNA(double strand RNA,dsRNA)介导的序列特异的RNA降解过程。已经证明,在植物和昆虫细胞中RNAi是其主要的抗病毒免疫机制,至今为止几乎没有发现在病毒感染哺乳动物细胞过程中诱发有效的抗病毒RNAi反应。因此,人们希望能够利用人工方法在哺乳动物细胞中建立有效的抗病毒RNAi防御策略。迄今为止,对多种哺乳动物病毒的研究结果令人振奋。主要围绕RNAi的分子基础、基本策略及其在抑制口蹄疫病毒复制中的研究现状作了综述。

关键词： KNAi 口蹄疫病毒抗病毒

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奶牛群发性流产的诊断

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中国奶牛 2006年第4期 43-45页

作者：邱昌庆周继章曹小安中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

2005年初，甘肃省某奶源基地一奶牛场发生群发性怀孕母牛流产，一个多月流产26头．流产率高达25％。流产多发生在妊娠7个月以上，流产胎儿外观正常，剖检可见肝、脾肿大，心包积液，心包膜水肿．有的腹腔有渗出液。奶牛在流产前采食、... 详细信息

2005年初，甘肃省某奶源基地一奶牛场发生群发性怀孕母牛流产，一个多月流产26头．流产率高达25％。流产多发生在妊娠7个月以上，流产胎儿外观正常，剖检可见肝、脾肿大，心包积液，心包膜水肿．有的腹腔有渗出液。奶牛在流产前采食、饮水正常．未见任何明显异常先兆，检查所饲喂的青贮饲料和精饲料未见有霉变。本次奶牛群流产发病突然而集中，为查明病因，采集病料以诊断是否与病原微生物感染有关．

关键词：流产率奶牛场群发性诊断微生物感染怀孕母牛奶源基地流产胎儿青贮饲料甘肃省

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口蹄疫病毒亚洲Ⅰ型YNBS/58株P12A-3C转基因植物双元表达载体的构建

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中国人兽共患病学报 2006年第11期22卷 1059-1061,1064页

作者：王炜张永光王永录方玉珍潘丽蒋守田刘力宽孙元吕建亮智晓莹黄振华中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

目的:双元载体是目前转基因植物工程普遍应用的载体,本文将口蹄疫病毒P12A基因、3C基因串联,构建植物表达载体pBin-438P12A-3G。方法:为便于实验操作,本试验采用先将基因片段P12A、3C构建到一个中间质粒pcDNA3.1(+)的策略,构建成pcDNA3.... 详细信息

目的:双元载体是目前转基因植物工程普遍应用的载体,本文将口蹄疫病毒P12A基因、3C基因串联,构建植物表达载体pBin-438P12A-3G。方法:为便于实验操作,本试验采用先将基因片段P12A、3C构建到一个中间质粒pcDNA3.1(+)的策略,构建成pcDNA3.1(+)-P12A-3C。结果:通过对构建好的pBin438-P12A-3C(Mini-Ti)重组质粒进行PCR鉴定和序列测定,证明中间表达载体构建成功。结论:通过三亲杂交法将重组质粒载体pBin438-P12A-3C导入到农杆菌GV3101,通过抗性筛选、PCR鉴定和序列测定,证明构建成功,与农杆菌中的help-Ti质粒共同组成植物双元表达载体,为以后的植物转化奠定基础。

关键词：基因表达口蹄疫病毒/遗传学遗传载体植物基因修饰质粒

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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌PCR鉴定及人工感染血清的制备

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌PCR鉴定及人工感染血清的制备

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中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议

作者：石琴逯忠新贺英赵萍储岳峰高鹏程中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

本试验主要是以过夜培养的猪传染性胸膜肺炎血清8型标准菌菌液作为感染原,经滴鼻感染30 日龄断奶仔猪,于第1天及第8天感染两次,感染后定期采集血清进行抗体检测,并采集发病猪病料进行细菌分离培养,用PCR方法进行检测,确定为胸膜肺炎单... 详细信息

本试验主要是以过夜培养的猪传染性胸膜肺炎血清8型标准菌菌液作为感染原,经滴鼻感染30 日龄断奶仔猪,于第1天及第8天感染两次,感染后定期采集血清进行抗体检测,并采集发病猪病料进行细菌分离培养,用PCR方法进行检测,确定为胸膜肺炎单一感染后,取抗体效价最高者:感染后30-45天内都维持较高水平,且产生的抗体个体差异不大,将其作为感染猪阳性血清,为以后的实验做准备。

关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌 PCR 人工感染血清制备

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