检索结果-内蒙古大学图书馆

动物医学进展 2006年第10期27卷 62-65页

作者：路伟张杰刘永生卫广森沈阳农业大学畜牧兽医学院辽宁沈阳110161 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

以含有人叠朊编码基因Prnd的ORF的质粒HoPrnd-T为模板,PCR扩增出成熟叠朊编码基因片段homDpl,并将其插入原核表达载体pGEX-6P-1的EcoRⅠ和XhoⅠ位点之间,构建出重组表达质粒pGEX-homDpl。将pGEX-homDpl电转化到宿主菌株BL21(DE3)中,以1.... 详细信息

以含有人叠朊编码基因Prnd的ORF的质粒HoPrnd-T为模板,PCR扩增出成熟叠朊编码基因片段homDpl,并将其插入原核表达载体pGEX-6P-1的EcoRⅠ和XhoⅠ位点之间,构建出重组表达质粒pGEX-homDpl。将pGEX-homDpl电转化到宿主菌株BL21(DE3)中,以1.0 mmol/LIPTG诱导表达,SDS-PAGE结果显示人成熟叠朊被大肠埃希菌高效表达。

关键词：成熟叠朊大肠埃希菌表达人

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人朊蛋白基因的克隆与原核表达

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甘肃农业大学学报 2006年第3期41卷 11-15页

作者：姜海霞刘永生杨孝朴陈豪泰朱小玲张杰谢庆阁甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

以人血液中提取的总DNA为模板,克隆朊蛋白(prion protein,PrP)基因Prnp户的开放阅读框(ORF),与pMD -18T载体连接后转入*** JM109,用Blast软件比较重组质粒序列,结果表明获得的人Prnp的ORF与Genbank登录的相应核苷酸序列最高同源性为99．... 详细信息

以人血液中提取的总DNA为模板,克隆朊蛋白(prion protein,PrP)基因Prnp户的开放阅读框(ORF),与pMD -18T载体连接后转入*** JM109,用Blast软件比较重组质粒序列,结果表明获得的人Prnp的ORF与Genbank登录的相应核苷酸序列最高同源性为99．6％,推导的氨基酸序列同源性为99．8％,将编码人成熟PrP的基因定向克隆到 pET-30a(+)表达载体,将重组质粒pET-homPrP转化*** BL21(DE3),在37℃下用1．0 mmol／L IPTG诱导,重组融合蛋白获得高效表达,SDS-PAGE显示表达产物以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的20％～25％．用Ni-NTA 树脂亲和层析纯化了表达产物．Western-blotting分析表明,融合蛋白被抗PrP的单克隆抗体特异识别．因此,在大肠杆菌中表达的人成熟PrP融合蛋白可以作为制备PrP抗体的免疫原．

关键词：人朊蛋白基因克隆原核表达

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口蹄疫病毒3ABC绿色荧光蛋白载体构建及表达

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动物医学进展 2006年第4期27卷 72-74,106页

作者：孙德惠独军政常惠芸才学鹏甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

将O型口蹄疫病毒Akesu/58株适应细胞培养。用RT-PCR技术从适应细胞株中克隆了3ABC基因,将其克隆入pGEM-T载体,测序鉴定。然后将目的基因与线性化的绿色荧光蛋白(PEGFPN1)载体连接筛选阳性质粒命名为PEGFPN1-3ABC。将阳性质粒转入JM109... 详细信息

将O型口蹄疫病毒Akesu/58株适应细胞培养。用RT-PCR技术从适应细胞株中克隆了3ABC基因,将其克隆入pGEM-T载体,测序鉴定。然后将目的基因与线性化的绿色荧光蛋白(PEGFPN1)载体连接筛选阳性质粒命名为PEGFPN1-3ABC。将阳性质粒转入JM109大肠埃希菌增殖。提取PEGFPN1-3ABC质粒转染入BHK细胞,在荧光显微镜下直接观察表达结果。

关键词：绿色荧光蛋白口蹄疫病毒 3ABC基因表达

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猪带绦虫六钩蚴cDNA文库的构建及免疫原基因的筛选与克隆

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畜牧兽医学报 2005年第4期36卷 391-396页

作者：景志忠郭爱疆海岗宗瑞谦才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒病重点开放实验室兰州730046

研究避开庞大的猪带绦虫基因组DNA,以构建六钩蚴发育阶段的cDNA表达文库为策略,利用pSPORT1质粒表达载体首次成功构建了表达文库。经库容量、重组率和代表性测定,库容量达5.0×106,重组率100%,用特异性引物能扩增出六钩蚴发育阶段1... 详细信息

研究避开庞大的猪带绦虫基因组DNA,以构建六钩蚴发育阶段的cDNA表达文库为策略,利用pSPORT1质粒表达载体首次成功构建了表达文库。经库容量、重组率和代表性测定,库容量达5.0×106,重组率100%,用特异性引物能扩增出六钩蚴发育阶段10ku基因、18ku基因和45W基因家族的A型、B型、C型转录本,说明文库质量高,代表性强。应用快速筛选质粒表达文库和克隆免疫原基因的技术,成功地筛选和克隆到TsO1基因,其完整阅读框架(ORF)为393bp。将其登录到GenBank(AY327451),经BLAST分析,证实是猪带绦虫六钩蚴发育阶段的1个新免疫原基因。

关键词：猪带绦虫六钩蚴免疫原 cDNA文库克隆构建 cDNA表达文库基因组DNA 发育阶段质粒表达载体特异性引物 BLAST 基因家族快速筛选库容量代表性重组率转录本

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猪带绦虫六钩蚴免疫原基因的克隆、表达与结构预测

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中国兽医学报 2005年第4期25卷 382-384,387页

作者：景志忠窦永喜蒙学莲吴国华才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒病重点实验室甘肃兰州730046

从猪带绦虫六钩蚴cDNA表达文库中筛选、克隆的Ts01基因,设计表达性引物,亚克隆到pGEX-4T-1表达载体,构建了pGEX-GST-Ts01的融合表达重组载体,转化BL21寄主菌和IPTG诱导表达后,经SDS-PAGE和Western蛋白分析,表明成功地高效表达了约40000... 详细信息

从猪带绦虫六钩蚴cDNA表达文库中筛选、克隆的Ts01基因,设计表达性引物,亚克隆到pGEX-4T-1表达载体,构建了pGEX-GST-Ts01的融合表达重组载体,转化BL21寄主菌和IPTG诱导表达后,经SDS-PAGE和Western蛋白分析,表明成功地高效表达了约40000左右的融合蛋白质,与预测的相对分子质量大小一致,表达量达40%左右。表达产物具有免疫学活性,而且呈可溶性,未形成包涵体,这与用蛋白质软件分析的Ts01编码蛋白水溶性相一致。

关键词：猪带绦虫六钩蚴免疫筛选基因克隆融合表达结构预测

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羊朊蛋白基因的克隆和序列分析

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畜牧兽医学报 2005年第8期36卷 794-799页

作者：吴润谢庆阁刘湘涛陈豪泰中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室

分别从6只羊(3只藏绵羊和3只山羊)全血中提取基因组总DNA,用所设计引物以聚合酶链式反应扩增出细胞型朊蛋白(PrPC)基因,并克隆到pMD18-T载体。序列分析表明所克隆的羊PrP基因片段大小为771bp,包含了羊朊蛋白基因的完整编码区序列,为包... 详细信息

分别从6只羊(3只藏绵羊和3只山羊)全血中提取基因组总DNA,用所设计引物以聚合酶链式反应扩增出细胞型朊蛋白(PrPC)基因,并克隆到pMD18-T载体。序列分析表明所克隆的羊PrP基因片段大小为771bp,包含了羊朊蛋白基因的完整编码区序列,为包含在单一外显子内的完整开放阅读框,其与国外报道的已知序列基本相同。所克隆的羊PrP基因含5个短而富含G-C的元件,可编码八肽Pro-His-Gly-Gly-Gly-Trp-Gly-Gln或九肽Pro-Gln/His-Gly-Gly-Gly-Gly-Trp-Gly-Gln。这些PrP基因序列相比较,其核苷酸序列和推导氨基酸序列同源性分别在99.0%~100.0%和98.1%~100.0%之间。共发现17个碱基替换,其中6个为同义码替换、11个为异义突变。异义突变中,除SY200301~SY200303的S240P和MY200301的M112T外,其余均位于PrP氨基酸125~228的C-端球形结构区,分别为MY200301的G129S突变、MY200302的T191R突变、MY200303的G127S突变及SY200302和SY200303的H143R和R211G。6个羊PrP基因均为密码子136、154和171的PrPARQ等位基因。

关键词：藏绵羊山羊朊蛋白基因 DNA克隆序列分析

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用大肠杆菌表达FMDV NSP3ABC鉴别感染与注苗动物ELISA方法的建立

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畜牧兽医学报 2005年第4期36卷 381-386页

作者：曹轶梅卢曾军刘在新谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室兰州730046

用大肠杆菌表达的FMDV NSP3ABC经纯化复性后作为抗原,建立了鉴别感染动物与注苗动物的间接ELISA方法。用该方法检测了大量的牛血清样品,确定了3ABC-I-ELISA判定标准。3ABC-I-ELISA以(OD样品-OD阴性)÷(OD阳性-OD阴性)来计算待测样... 详细信息

用大肠杆菌表达的FMDV NSP3ABC经纯化复性后作为抗原,建立了鉴别感染动物与注苗动物的间接ELISA方法。用该方法检测了大量的牛血清样品,确定了3ABC-I-ELISA判定标准。3ABC-I-ELISA以(OD样品-OD阴性)÷(OD阳性-OD阴性)来计算待测样品效价。当效价小于012为阴性,介于012～013之间为可疑,大于013为阳性。根据此判定标准所测试验感染动物血清都为阳性,敏感性达100%;97.06%疫苗注射动物血清为阴性;98.39%的非免疫健康牛(未感染也未注射疫苗牛)血清为阴性。研究证实感染牛在1年以后仍能检测到3ABC抗体。这说明3ABC-I-ELISA能够鉴别FMDV感染动物和注苗动物,可作为大面积疫情监测的方法应用。

关键词：大肠杆菌表达鉴别间接ELISA方法 FMDV 感染动物判定标准动物血清血清样品疫苗注射注射疫苗方法应用疫情监测阳性敏感性健康牛检测效价抗原后作免疫抗体

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双峰驼朊蛋白基因的克隆和序列分析

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中国兽医科技 2005年第12期35卷 969-973页

作者：吴润陈豪泰刘湘涛谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室

分别从4峰双峰驼全血中提取基因组总DNA,用所设计的引物扩增了细胞型朊蛋白(PrP)基因,并克隆到pMD 18-T载体.序列分析表明,所克隆的4个双峰驼PrP基因片段大小分别为768、768、792和795 bp,包含了朊蛋白基因的完整编码区序列,为包含在单... 详细信息

分别从4峰双峰驼全血中提取基因组总DNA,用所设计的引物扩增了细胞型朊蛋白(PrP)基因,并克隆到pMD 18-T载体.序列分析表明,所克隆的4个双峰驼PrP基因片段大小分别为768、768、792和795 bp,包含了朊蛋白基因的完整编码区序列,为包含在单一外显子内的完整开放阅读框,均与国外报道的同属单峰驼PrP序列基本相同.4个双峰驼PrP基因含5个或6个短而富含G-C的元件,可编码5个或6个八肽(九肽)重复序列Pro-His-Gly-Gly-Gly-Trp-Gly-Gln或Pro-Gln/His-Gly-Gly-Gly-Gly-Trp-Gly-Gln,其氨基酸序列含有24个氨基酸的N-端信号肽和22个氨基酸(除LT200302为23个氨基酸外)的C-端信号肽.4个双峰驼PrP基因之间相比较,其核苷酸和推导氨基酸序列的同源性为91.0%～100.0%和94.2%～100.0%.共发生133个碱基替换,其中107个为同义码替换,26个为异义突变.

关键词：双峰驼朊蛋白基因 DNA克隆序列分析

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用原位RT-PCR对BHK-21细胞中的FMDV检测和定位

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中国人兽共患病杂志 2005年第12期21卷 1086-1088页

作者：邵军军常惠芸林彤丛国正独军政谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室兰州730046

目的为了明确FMDV在BHK-21细胞中的复制和增殖部位,建立原位检测FMDV的方法。方法以地高辛标记的寡核苷酸作为探针,用间接原位RT-PCR技术对实验接种FMDV的BHK-21细胞中的FMDV RNA进行检测和定位。结果在接毒细胞的细胞质中有大量强阳性... 详细信息

目的为了明确FMDV在BHK-21细胞中的复制和增殖部位,建立原位检测FMDV的方法。方法以地高辛标记的寡核苷酸作为探针,用间接原位RT-PCR技术对实验接种FMDV的BHK-21细胞中的FMDV RNA进行检测和定位。结果在接毒细胞的细胞质中有大量强阳性蓝染颗粒,阴性对照细胞中没有蓝染颗粒出现,也没有明显的背景染色。结论结果表明FMDV RNA在细胞的细胞质中进行复制和增殖,同时也表明原位RT-PCR是检测细胞内病毒的一种敏感、特异的方法。

关键词：原位RT-PCR FMDV BHK-21细胞原位杂交

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疯牛病与新型克-雅病研究进展

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基础医学与临床 2005年第12期25卷 1090-1094页

作者：陈豪泰张杰刘永生吴润刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室甘肃兰州730046

朊病毒是一种不含核酸的感染性蛋白颗粒,能导致哺乳动物中枢神经系统组织的病变,其繁殖是通过构象变构由正常型(PrPC)转变为致病型(PrPSc)而完成的。这两种结构异型体来源于同一基因,具有相同的氨基酸序列,但其二级和三级结构不同。作... 详细信息

朊病毒是一种不含核酸的感染性蛋白颗粒,能导致哺乳动物中枢神经系统组织的病变,其繁殖是通过构象变构由正常型(PrPC)转变为致病型(PrPSc)而完成的。这两种结构异型体来源于同一基因,具有相同的氨基酸序列,但其二级和三级结构不同。作者就疯牛病和新型克-雅病的病原、结构特征、诊断与防治作此综述。

关键词：朊病毒疯牛病新型克-雅病结构

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