检索结果-内蒙古大学图书馆

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2005年第3期23卷 171-174页

作者：王谨骆学农岳城胡志敏才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室兰州730046 新疆农业大学化工学院乌鲁木齐830052

目的从猪带绦虫六钩蚴总RNA中扩增45WB2基因,并在甲醇酵母分泌表达载体pPIC9K中获得高效表达。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),从孵化激活的六钩蚴克隆获得459bp的基因,亚克隆至酵母分泌表达载体pPIC9K中,经测序验证读码框正确后... 详细信息

目的从猪带绦虫六钩蚴总RNA中扩增45WB2基因,并在甲醇酵母分泌表达载体pPIC9K中获得高效表达。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),从孵化激活的六钩蚴克隆获得459bp的基因,亚克隆至酵母分泌表达载体pPIC9K中,经测序验证读码框正确后,重组质粒电转化毕赤酵母SMD1168菌株。用PCR方法检测结果表明,目的基因整合进毕赤酵母染色体DNA中。重组菌株用1%甲醇诱导,分别取诱导72和96h的上清和沉淀进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Westernblotting)分析。结果重组菌株在毕赤酵母中的表达蛋白分子量为Mr16000,表达产物占上清总蛋白量的32.8%,且能被猪囊尾蚴病患者血清识别。结论基因在毕赤酵母中成功表达,表达产物有望作为免疫原用于猪囊尾蚴病的免疫预防。

关键词：猪带绦虫六钩蚴表膜结合蛋白基因毕赤酵母菌基因表达

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猪水疱病病毒致病和免疫的分子基础

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中国病毒学 2005年第4期20卷 450-454页

作者：孙世琪郭慧琛刘湘涛谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室甘肃兰州730046

猪水泡病病毒(Swine vesicular disease virus,SVDV)属于小RNA病毒科(Picornavirdae)肠道病毒属(Enterovirus),其抗原特性与柯萨奇病毒B5(Coxsackievirus B5,CVB5)关系密切,被认为是CVB5的一个猪变种或亚种[1].SVDV只有一个血清型,但对其分离株进行系统发生分析可进一步分为4个抗原群或基因群[2,3].第1群包含SVDV早期分离株(ITL/1/66),第2群包含1972～1981年间欧洲和日本分离株,第3群包含意大利1988年12月～1992年6月间的分离株,第4群包含1987～1994年间,罗马尼亚、荷兰、意大利和西班牙的分离株.

关键词：猪水疱病病毒抗原表位受体

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猪囊尾蚴病病原入侵与免疫机理以及免疫预防研究进展

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动物医学进展 2005年第6期26卷 13-17页

作者：景志忠才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒病重点实验室甘肃兰州730046

猪囊尾蚴病是危害严重的人畜共患寄生虫病,其病原是复杂的真核生物,有猪带绦虫成虫、六钩蚴、囊尾蚴等多个发育阶段,在人猪之间循环感染寄生发育。目前国内外已在病原和宿主个体、细胞和分子水平上对猪囊尾蚴入侵与免疫、免疫与免疫逃... 详细信息

猪囊尾蚴病是危害严重的人畜共患寄生虫病,其病原是复杂的真核生物,有猪带绦虫成虫、六钩蚴、囊尾蚴等多个发育阶段,在人猪之间循环感染寄生发育。目前国内外已在病原和宿主个体、细胞和分子水平上对猪囊尾蚴入侵与免疫、免疫与免疫逃避以及免疫预防等方面进行了大量的研究,初步明确了虫体的组成成分与结构形态以及发育形式,与病原入侵和免疫的关系,为免疫预防控制,特别是分子免疫预防奠定了坚实的基础。但要完全控制和消灭该病,要走的路还很长。

关键词：猪囊尾蚴病阶段发育免疫机理免疫预防

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病毒调控宿主免疫反应的研究进展

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中国兽医科技 2005年第6期35卷 494-498页

作者：沈小燕丛国正常惠芸罗自清王建华谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒病重点开放实验室甘肃兰州730046 青海省尖扎县畜牧兽医站青海尖扎813000 西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100

病毒感染宿主后,针对宿主免疫反应的特点和薄弱环节,形成了多种方式拮抗宿主的免疫防御。论述了病毒抑制体液免疫及其抑制或调节细胞因子活性的过程和方式,旨在从分子水平上阐明病毒逃避免疫应答的机理。

关键词：病毒感染调控免疫反应

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我国近期7株猪瘟流行野毒E2基因变异研究

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动物医学进展 2005年第6期26卷 59-63页

作者：胡慧邱昌庆周继章张彦明中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室甘肃兰州730046 西北农林科技大学动物科技学院陕西杨陵712100

应用RT-PCR和nPCR扩增了7株国内近期(2001年-2003年)流行的猪瘟野毒E2基因,分别克隆至pGEM-T载体并对其进行了核苷酸序列测定及氨基酸序列推导,同时将其与C株、Alfort株、Brecsia株进行了同源性比较及遗传进化分析,构建了CSFV的遗传发生... 详细信息

应用RT-PCR和nPCR扩增了7株国内近期(2001年-2003年)流行的猪瘟野毒E2基因,分别克隆至pGEM-T载体并对其进行了核苷酸序列测定及氨基酸序列推导,同时将其与C株、Alfort株、Brecsia株进行了同源性比较及遗传进化分析,构建了CSFV的遗传发生树,并对E2结构与功能进行了分析.所测7株野毒均包括完整的信号肽序列及部分跨膜区在内的1 170 bp,与C株、Alfort株、Brescia株核苷酸序列同源性分别为91.6%～94.5%、89.2%～92.7%、85.9%～89.3%,氨基酸同源性分别为91.2%～95.8%、88.9%～92.0%、84.0%～90.1%;而7株野毒之间的差异很小,其核苷酸序列同源性为95.8%～99.7%,氨基酸同源性为96.3%～99.1%.所绘制的遗传发生树分为2个组群,所测得7株流行野毒均属于第1群,而且可分为两亚群,与C株在同一亚群.同时对主要抗原区氨基酸位点变异进行了分析,对其抗原决定簇的变异情况进行了推测.

关键词：猪瘟病毒 E2基因同源性遗传发生树

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猪囊尾蚴RNA聚合酶亚基基因的筛选及结构初探

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2004年第3期22卷 160-163页

作者：骆学农郑亚东窦永喜侯俊琳景志忠才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所畜禽病毒病重点实验室兰州730046

的　从构建的剪切引导序列 (SL)cDNA文库中筛选猪囊尾蚴相关基因。　方法　提取猪囊尾蚴总RNA ,利用SL特异序列和带有噬菌体M13M4的olig(dT)为引物 ,反转录成cDNA ,构建猪囊尾蚴SLcDNA文库。随机筛选并通过酶切、PCR鉴定阳性克隆 ,分析... 详细信息

的　从构建的剪切引导序列 (SL)cDNA文库中筛选猪囊尾蚴相关基因。　方法　提取猪囊尾蚴总RNA ,利用SL特异序列和带有噬菌体M13M4的olig(dT)为引物 ,反转录成cDNA ,构建猪囊尾蚴SLcDNA文库。随机筛选并通过酶切、PCR鉴定阳性克隆 ,分析其同源性。　结果　鉴定出一 3 3 2bp的插入片段 ,含有 2 0 4bp的开放阅读框(ORF)和 3′端 2 0bp的polyA尾巴 ,经核苷酸和氨基酸序列分析 ,所克隆的基因的氨基酸序列与其他真核生物如人、秀丽隐杆线虫、果蝇及拟南芥等的RNA聚合酶亚基基因同源性均高达 71.6%以上。　结论　筛选鉴定的基因推测为猪囊尾蚴RNA聚合酶亚基基因 ,而且在不同物种间很保守。

关键词：猪囊尾蚴 RNA聚合酶亚基基因噬菌体基因文库

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牛朊蛋白(bPrP^C)基因的克隆和序列分析

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畜牧兽医学报 2004年第3期35卷 318-323页

作者：吴润谢庆阁刘湘涛陈豪泰中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室

分别从9头牛(3头牦牛、3头荷斯坦牛和3头秦川黄牛)全血中提取基因组总DNA,用所设计引物以聚合酶链式反应扩增出细胞型朊蛋白(PrPC)基因,并克隆到pMD18-T载体。序列分析表明所克隆的牛PrPC的片段大小为795bp,包含了牛朊蛋白基因的完整编... 详细信息

分别从9头牛(3头牦牛、3头荷斯坦牛和3头秦川黄牛)全血中提取基因组总DNA,用所设计引物以聚合酶链式反应扩增出细胞型朊蛋白(PrPC)基因,并克隆到pMD18-T载体。序列分析表明所克隆的牛PrPC的片段大小为795bp,包含了牛朊蛋白基因的完整编码区序列,为含单一外显子的完整开放阅读框,与国内外报道的已知序列基本相同。本次所报道的牛PrP(bPrPC)基因含6个短而富含G-C的元件,可编码八肽Pro-His-Gly-Gly-Gly-Trp-Gly-Gln/Arg或九肽Pro-Gln/His-Gly-Gly-Gly-Gly-Trp/Arg-Gly-Gln。这些bPrPC基因序列相比较,其核苷酸和氨基酸同源性分别在99.0%～100.0%和99.2%～100.0%之间。在整个18个碱基替换中,多数替换是保守的,为同义突变,仅有5个替换引起氨基酸突变,分别为HN200302的W60R、HN200303的S154N、MN200301的A129V、NN200302的Q234R和NN200303的Q94R突变。发现牦牛朊粒基因在126(A→G)、234(G→A)和678(T→C)位的特征性核苷酸替换,但均为同义码替换。

关键词：牛朊蛋白基因克隆序列分析神经变性疾病疯牛病朊病毒

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猪带绦虫六钩蚴TsO1基因的克隆、表达与结构预测

猪带绦虫六钩蚴TsO1基因的克隆、表达与结构预测

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会

作者：才学鹏景志忠窦永喜蒙学莲吴国华骆学农郑亚东中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒病重点实验室

从猪带绦虫六钩蚴cDNA 表达文库中筛选、克隆的TSOl 基因,设计表达性引物,亚克隆到pGEX-4T-1表达载体,构建pGEX-GST-TSO1的融合表达的重组载体,转化BL21寄主菌和IPTG 诱导表达后,经SDS-PAGE 和Western 蛋白分析,成功地高效表达了约40kD... 详细信息

从猪带绦虫六钩蚴cDNA 表达文库中筛选、克隆的TSOl 基因,设计表达性引物,亚克隆到pGEX-4T-1表达载体,构建pGEX-GST-TSO1的融合表达的重组载体,转化BL21寄主菌和IPTG 诱导表达后,经SDS-PAGE 和Western 蛋白分析,成功地高效表达了约40kD 左右的融合蛋白质,与预测的分子量大小一致,表达量达达40%左右,具有免疫学活性,而且表达的产物呈可溶性,未形成包涵体,这与用蛋白质软件分析的TSO1编码蛋白水溶性相一致。

关键词：六钩蚴免疫筛选基因克隆融合表达结构预测

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猪水泡病病毒非结构蛋白编码区的克隆与序列分析

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中国兽医科技 2004年第7期34卷 13-18页

作者：冶贵生刘湘涛张彦明马玉花邓明俊洪海霞韩雪清中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室甘肃兰州730046 西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100

以猪水泡病病毒 (Swinevesiculardiseasevirus ,SVDV)HK’70为材料 ,用特异性引物扩增出非结构蛋白编码区的 4个重叠目的片段 ,连接于pMD 18 T载体 ,转化JM 10 9感受态细胞。经对重组质粒双酶切、PCR鉴定、序列分析表明 ,HK’70非结构... 详细信息

以猪水泡病病毒 (Swinevesiculardiseasevirus ,SVDV)HK’70为材料 ,用特异性引物扩增出非结构蛋白编码区的 4个重叠目的片段 ,连接于pMD 18 T载体 ,转化JM 10 9感受态细胞。经对重组质粒双酶切、PCR鉴定、序列分析表明 ,HK’70非结构蛋白编码区核苷酸长 4 0 0 2nt ,氨基酸长 1334aa ;与J1’73、H/ 3’76、SVDV(Seechrn等测株 )、NET/ 1/ 92的核苷酸同源性分别为 98.6 %、98.3%、98.3%、91.2 % ,推导氨基酸序列的同源性分别为 98.9%、99.1%、99.2 %和 97.2 %。

关键词：猪水泡病病毒非结构蛋白编码区序列分析同源性

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猪水泡病病毒VP2基因抗原区在大肠杆菌中的表达

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微生物学报 2004年第5期44卷 593-595页

作者：冶贵生刘湘涛张彦明马玉花张淼涛洪海霞韩雪清中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室兰州730046 西北农林科技大学动物科技学院杨凌712100

利用RT_PCR技术 ,以SVDVHK’70为材料 ,扩增出VP2基因抗原区。将目的基因的PCR扩增产物直接进行双酶切 ,然后将酶切产物与酶切后的表达载体pGEX 4T_1进行连接 ,转化BL2 1菌体并提质粒 ,经酶切、PCR鉴定为阳性的重组质粒命名为pGEX_VP2 ... 详细信息

利用RT_PCR技术 ,以SVDVHK’70为材料 ,扩增出VP2基因抗原区。将目的基因的PCR扩增产物直接进行双酶切 ,然后将酶切产物与酶切后的表达载体pGEX 4T_1进行连接 ,转化BL2 1菌体并提质粒 ,经酶切、PCR鉴定为阳性的重组质粒命名为pGEX_VP2 ,并测序。测序结果表明 ,目的基因插入的位置、大小和读码框均正确 ,表达载体构建成功。将含有阳性质粒的BL2 1菌液经IPTG诱导后进行SDS_PAGE分析 ,出现预期的目的蛋白条带 ,此目的蛋白经Westernblot检测确定其有免疫活性。

关键词： SVDV HK’70 VP2基因抗原区 pGEX—VP2 SDS—PAGE Western blot

来源：评论

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