检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2023年第2期54卷 706-714页

作者：张婷冯涛杨金柯郝雨杨行张大俊史喜绢闫文倩陈玲玲刘湘涛郑海学张克山中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

前期研究初步表明非洲猪瘟病毒(ASFV)编码的D1133L基因对ASFV复制至关重要,本研究拟进一步探究D1133L在ASFV复制中的作用。利用同源重组技术结合大肠杆菌lac阻遏操作系统实现条件性敲除D1133L基因,以pUC118为骨架重组转移载体ASFVΔi130... 详细信息

前期研究初步表明非洲猪瘟病毒(ASFV)编码的D1133L基因对ASFV复制至关重要,本研究拟进一步探究D1133L在ASFV复制中的作用。利用同源重组技术结合大肠杆菌lac阻遏操作系统实现条件性敲除D1133L基因,以pUC118为骨架重组转移载体ASFVΔi130,将重组转移载体转染骨髓源巨噬细胞(BMDMs),以ASFV CN/GS/2018为亲本毒株感染BMDM,在β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)存在的条件下,经绿色荧光和PCR鉴定,获得条件性敲除D1133L重组毒株vD1133Li。利用荧光显微镜观察该重组毒株与亲本毒株在猪肺泡巨噬细胞(PAMs)中的复制差异,利用qPCR技术比较重组病毒与亲本毒株的复制差异,分析vD1133Li在无IPTG情况下回补D1133L蛋白后与在IPTG诱导情况下的复制差异。结果显示:本研究成功构建了条件性敲除D1133L的ASFV重组病毒vD1133Li,重组毒株不表达D1133L,在IPTG诱导下复制能力显著低于亲本毒株;在稳定表达D1133L的MA-104细胞系中,vD1133Li复制能力恢复。综上所述,D1133L基因对于ASFV复制至关重要,试验结果为进一步研究D1133L在ASFV致病中的机制及针对D1133L靶向药物研发提供了研究基础。

关键词：非洲猪瘟病毒条件性D1133L基因缺失重组病毒增殖特性

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猪CD82蛋白的表达纯化和单克隆流式抗体的制备

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中国兽医科学 2025年

作者：常志海毛箬青栗亮亮郭金杰陈桂珍代宏宇董海聚朱紫祥刘芳郑海学河南农业大学动物医学院中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业农村部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室

为研究CD82蛋白在猪病中的功能，提供一种针对猪CD82蛋白的单克隆流式抗体，本研究通过原核表达系统制备猪CD82蛋白大细胞外环结构域(EC2)重组抗原，经Ni-NTA亲和层析柱纯化后免疫BALB/c小鼠。通过4次免疫和ELISA筛选，获得抗体效价最... 详细信息

为研究CD82蛋白在猪病中的功能，提供一种针对猪CD82蛋白的单克隆流式抗体，本研究通过原核表达系统制备猪CD82蛋白大细胞外环结构域(EC2)重组抗原，经Ni-NTA亲和层析柱纯化后免疫BALB/c小鼠。通过4次免疫和ELISA筛选，获得抗体效价最高的小鼠，用其脾细胞进行细胞融合。对融合细胞上清用流式细胞术进行筛选，选取效果最好的1株杂交瘤细胞株11G3制备腹水并纯化，其抗体亚型为IgG2a型。通过间接ELISA和流式细胞术对纯化后的CD82 mAb进行验证，显示出高亲和力和特异性，能有效标记表达CD82蛋白的猪肺巨噬细胞（PAM）。本研究结果为CD82蛋白在猪病中的功能研究提供了重要的生物学工具，为进一步探索其在免疫调节和抗病毒反应中的作用奠定了基础。

关键词： CD82蛋白单克隆抗体原核表达流式细胞术

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水佐剂增强磷酸钙矿化口蹄疫病毒样颗粒疫苗的黏膜免疫效果

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中国兽医科学 2025年

作者：谢茜茜王翱飞张珍珍孙世琪郭慧琛郭春和滕志东谢永生华南农业大学兽医学院中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室宜春学院生命科学与资源环境学院

为提升磷酸钙矿化口蹄疫(FMD)病毒样颗粒疫苗(VLPs-CaP)诱导的黏膜免疫应答，本研究选用IMS1313和J1两种水佐剂与VLPs-CaP进行配伍，通过滴鼻方式免疫小鼠。HE染色观察显示各疫苗组均未引起小鼠主要器官的损伤，表现出良好的生物相容性... 详细信息

为提升磷酸钙矿化口蹄疫(FMD)病毒样颗粒疫苗(VLPs-CaP)诱导的黏膜免疫应答，本研究选用IMS1313和J1两种水佐剂与VLPs-CaP进行配伍，通过滴鼻方式免疫小鼠。HE染色观察显示各疫苗组均未引起小鼠主要器官的损伤，表现出良好的生物相容性。利用ELISA检测免疫小鼠各黏膜组织分泌的IgA和血清中IgG及细胞因子水平显示，J1和IMS1313两种佐剂均提高VLPs-CaP诱导的黏膜免疫应答水平，尤其VLPs-CaP-J1在免疫后第17天黏膜部位和血清中的IgA水平均显著高于VLPs-CaP组(P<0.01)，而且免疫后第24天VLPs-CaP-J1免疫组中IgG、IL-2、IL-4和IFN-γ的水平也显著高于VLPs-CaP免疫组(P<0.01)，表明J1佐剂显著增强了VLPs-CaP诱导的黏膜免疫。本研究为获得具有良好黏膜免疫效果的新型口蹄疫疫苗提供了选择。

关键词：磷酸钙矿化口蹄疫病毒样颗粒水佐剂黏膜免疫

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羊口疮病毒E3L蛋白亚细胞定位及生物信息学分析

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中国病原生物学杂志 2023年第2期18卷 141-146页

作者：蒙泽菁房永祥贾怀杰高真贞陈国华何小兵景志忠王晓霞兰州大学公共卫生学院营养与食品卫生学研究所甘肃兰州730000 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室

目的克隆羊口疮病毒020基因,构建其重组真核表达质粒并转染HeLa细胞,分析020基因编码E3L蛋白的亚细胞定位,分析该蛋白生物信息学特征。方法提取羊口疮病毒基因组,PCR扩增020基因并构建重组真核表达质粒,转染HeLa细胞,采用Western blo... 详细信息

目的克隆羊口疮病毒020基因,构建其重组真核表达质粒并转染HeLa细胞,分析020基因编码E3L蛋白的亚细胞定位,分析该蛋白生物信息学特征。方法提取羊口疮病毒基因组,PCR扩增020基因并构建重组真核表达质粒,转染HeLa细胞,采用Western blot检测其在该细胞中的表达,免疫荧光法检测该蛋白的亚细胞定位。利用DNAstar软件分析不同毒株ORFV E3L氨基酸序列特点及其遗传演化关系;利用SOMPA软件分析其二级结构;利用SignalP4.0软件预测信号肽;利用TMHMM2.0软件预测跨膜结构;利用NetPhos 3.1预测磷酸化位点;利用NetNGlyc-1.0预测糖基化位点;应用IDEB和SYFPEITHI预测ORFV E3L蛋白的抗原表位。结果成功克隆得到ORFV 020基因,全长549 bp,编码183个氨基酸;亚细胞定位显示该蛋白定位于细胞核和细胞质。生物信息学分析ORFV E3L蛋白α螺旋约占40.44%、β折叠约占5.46%、延伸链约占16.94%、无规则卷曲约占37.16%;该蛋白无信号肽和跨膜结构,可能存在15个磷酸化位点,7个N-糖基化位点,5个B细胞线性表位,2个CTL表位,3个Th细胞表位,3个B细胞和CTL联合表位,3个B细胞和Th细胞联合表位。结论 ORFV E3L蛋白定位于细胞核和细胞质,含有多个抗原表位,可能具有免疫原性。该蛋白高度保守,具有成为优势保护性抗原的潜力。为进一步揭示ORFV E3L蛋白的功能奠定基础,为ORFV诊断方法的建立及疫苗的研制提供了理论依据。

关键词：羊口疮病毒基因克隆亚细胞定位生物信息学

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植物乳杆菌表达重组新冠病毒M抗原表位及免疫原性分析

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中国兽医学报 2024年第8期44卷 1719-1727页

作者：邓安琦叶丹妮艾雪言唐秀兰陈文聪陈嘉豪郝嘉翼邓玲聪李昌陈永福金俊杰王茂鹏温州大学病毒学研究所温州市病毒学与免疫学重点实验室浙江温州325035 中国农业科学院长春兽医研究所吉林长春130122 内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室内蒙古呼和浩特010018 温州科技职业学院(温州市农业科学研究院) 浙江温州325006

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)是引起新冠肺炎的病原体,其变异快、传播强,导致疫情广泛流行,以疫苗接种为主要防控措施。尽管已有大量新冠肽表位疫苗和黏膜型疫苗的研究,但靶向黏膜的肽表位疫苗和其功能评价的研究鲜有报道。本研究以IEDB数... 详细信息

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)是引起新冠肺炎的病原体,其变异快、传播强,导致疫情广泛流行,以疫苗接种为主要防控措施。尽管已有大量新冠肽表位疫苗和黏膜型疫苗的研究,但靶向黏膜的肽表位疫苗和其功能评价的研究鲜有报道。本研究以IEDB数据库预测SARS-CoV-2结构蛋白M肽表位作为抗原靶点,设计含3050及1229信号肽和DCpep优化的MS-3S基因,插入MS2噬菌体衣壳蛋白中,通过PCR和无缝克隆技术构建表达质粒pSIP:MS-3S,转化到植物乳杆菌LP18中获得重组菌LP18:MS-3S。通过对诱导时间、诱导剂质量浓度、转速和初始pH值等表达条件进行优化及鼻内免疫实验,验证重组菌免疫效果。结果显示,获得出916 bp修饰和优化的目的基因MS-3S,并成功构建重组菌LP18:MS-3S,经Western blot、流式细胞术、免疫荧光等检测方法验证,获得重组蛋白表达的最佳条件:诱导时间为4 h,诱导肽质量浓度为100μg/L,培养基初始pH值为7.0,转速为100 r/min。通过ELISA试验验证,在小鼠的血清、肺泡灌洗液和粪便稀释液中,检测出抗肽表位的特异性抗体。本研究成功构建了1株表达新冠M蛋白肽表位抗原的重组菌,并且可诱导机体产生体液和黏膜免疫,为新冠黏膜免疫候选疫苗的研制奠定了基础。

关键词： SARS-CoV-2 M蛋白肽表位植物乳杆菌鼻内免疫

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阿瑞吡坦在体外对PAMs内非洲猪瘟病毒复制的抑制作用

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中国兽医科学 2022年第10期52卷 1207-1214页

作者：崔卉梅史喜绢张大俊杨行杨博杨金柯郝雨陈玲玲闫文倩刘湘涛郑海学张克山中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业农村部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

阿瑞吡坦具有抗肿瘤和抗HIV-1活性。为了探究与非洲猪瘟病毒(ASFV)D1133L亲和力较高的阿瑞吡坦是否具有抗ASFV作用,利用MTT方法测定阿瑞吡坦对PAMs细胞的毒性,然后将荧光蛋白重组ASFV感染PAMs细胞后观察荧光变化和TCID_(50)、同时用RT-q... 详细信息

阿瑞吡坦具有抗肿瘤和抗HIV-1活性。为了探究与非洲猪瘟病毒(ASFV)D1133L亲和力较高的阿瑞吡坦是否具有抗ASFV作用,利用MTT方法测定阿瑞吡坦对PAMs细胞的毒性,然后将荧光蛋白重组ASFV感染PAMs细胞后观察荧光变化和TCID_(50)、同时用RT-qPCR和Western-blot分析阿瑞吡坦对ASFV复制及D1133L、P30和P72转录和翻译的影响。结果表明,当DMSO处理PAMs时,细胞存活率未达到100%,对PAMs细胞具有一定毒性;当浓度为20和40μmol/L的阿瑞吡坦处理PAMs后,PAMs细胞存活率均接近100%,当浓度为80μmol/L的阿瑞吡坦处理PAMs时,细胞存活率达到70%以上:当阿瑞吡坦处理感染荧光蛋白重组ASFV的PAMs细胞后,ASFV的荧光值、基因组拷贝数和TCID_(50)被显著降低,ASFV D1133L、P30和P72转录和翻译被显著抑制。结论:阿瑞吡坦在体外对PAMs细胞的毒性较小,通过靶向ASFV编码的D1133L蛋白显著抑制ASFV的体外复制,对ASFVP30和P72的转录和翻译也具有抑制作用。

关键词：非洲猪瘟阿瑞吡坦抗病毒药物抑制作用

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痘病毒E3L蛋白在调控细胞程序性死亡中的功能

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中国兽医科学 2023年第2期53卷 223-230页

作者：蒙泽菁房永祥韦雨松谭金龙高真贞陈国华何小兵景志忠王晓霞兰州大学公共卫生学院营养与食品卫生学研究所甘肃兰州730000 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃兰州730046 榆林学院生命科学学院陕西榆林719000

细胞程序性死亡是一种受基因调控的细胞死亡方式,包括细胞凋亡、焦亡、坏死性凋亡、铁死亡、自噬等,这些多元化的细胞程序性死亡方式在病毒的复制和传播中发挥重要作用。其中,痘病毒通过编码大量的病毒蛋白(例如E3L、F1L等)参与介导痘... 详细信息

细胞程序性死亡是一种受基因调控的细胞死亡方式,包括细胞凋亡、焦亡、坏死性凋亡、铁死亡、自噬等,这些多元化的细胞程序性死亡方式在病毒的复制和传播中发挥重要作用。其中,痘病毒通过编码大量的病毒蛋白(例如E3L、F1L等)参与介导痘病毒免疫逃逸,抵抗宿主细胞死亡,以此维持自身复制。本文综述了痘病毒E3L蛋白在调控细胞凋亡、焦亡、坏死性凋亡中的作用,深入剖析了PKR、F1L和Zα结构域介导的E3L相关细胞程序性死亡分子机制,以期为痘病毒免疫逃逸机制探索、抗病毒药物开发等提供新思路。

关键词：痘病毒 E3L 细胞凋亡坏死性凋亡细胞焦亡

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黑龙江省部分地区蓝舌病血清学调查及血清1型病毒的分离鉴定

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中国兽医科学 2023年第3期53卷 312-319页

作者：李佳璇汪昭睿独军政王晓娜邵怡岚姜艳平崔文单智夫周晗王丽乔薪瑗李一经唐丽杰东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃兰州730046 农业部动物疫病病原生物学重点实验室东北科学观测实验站黑龙江哈尔滨150030

为了解蓝舌病(BT)在黑龙江省部分地区的流行情况,调查黑龙江省不同地区、不同季节牛、绵羊感染蓝舌病的血清学情况,用已建立的BT的竞争ELISA方法检测不同季节黑龙江省部分地区997份牛、绵羊血清,通过鸡胚及BHK21细胞分离病毒,并利用BT... 详细信息

为了解蓝舌病(BT)在黑龙江省部分地区的流行情况,调查黑龙江省不同地区、不同季节牛、绵羊感染蓝舌病的血清学情况,用已建立的BT的竞争ELISA方法检测不同季节黑龙江省部分地区997份牛、绵羊血清,通过鸡胚及BHK21细胞分离病毒,并利用BT国际参考实验室创立的RT-PCR方法和间接免疫荧光方法鉴定病毒的血清型。结果表明,该地区牛、绵羊血清的阳性率分别为13.70%、12.65%,并初步鉴定黑龙江省部分地区流行的蓝舌病病毒毒株为BTV-1型,为黑龙江省蓝舌病的防控提供了理论依据并奠定了基础。

关键词：蓝舌病病毒血清学调查分离鉴定 BTV-1

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组织蛋白酶S抑制塞内卡病毒在IBRS-2细胞中的复制

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微生物学报 2021年第10期61卷 3305-3314页

作者：史喜绢张婷杨博申超超张大俊陈学辉崔卉梅袁兴国赵登率张克山郑海学刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

【目的】本研究旨在探究猪源组织蛋白酶S(cathepsinS,CTSS)对塞内卡病毒(SenecaValley virus,SVV)复制的影响。【方法】SVV感染IBRS-2细胞,采用RT-qPCR在转录水平探究SVV感染对内源性CTSS表达的调控;采用ELISA测定SVV感染对CTSS酶活性... 详细信息

【目的】本研究旨在探究猪源组织蛋白酶S(cathepsinS,CTSS)对塞内卡病毒(SenecaValley virus,SVV)复制的影响。【方法】SVV感染IBRS-2细胞,采用RT-qPCR在转录水平探究SVV感染对内源性CTSS表达的调控;采用ELISA测定SVV感染对CTSS酶活性的影响;通过Western blotting(WB)和RT-qPCR检测过表达CTSS对SVV复制及SVV诱导的抗病毒细胞因子的调控作用;合成针对CTSS的特异性siRNA,利用WB和RT-qPCR检测siRNA对CTSS的干扰效果以及CTSS被干扰后对SVV复制的影响。【结果】结果表明SVV感染IBRS-2细胞能显著上调内源性CTSS表达并增强CTSS酶活性;过表达CTSS能显著抑制SVV在IBRS-2细胞中的复制,同时促进宿主抗病毒细胞因子的表达;siRNA-2947下调内源性CTSS表达进而促进SVV复制。【结论】CTSS通过增强宿主抗病毒细胞因子上调表达而抑制SVV复制,本研究为进一步深入探究宿主CTSS在抗SVV免疫应答中的作用及机制提供参考依据。

关键词：组织蛋白酶S 塞内卡病毒 IBRS-2细胞抗病毒功能

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兰州市宠物猫隐孢子虫流行情况调查及分子生物学鉴定

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畜牧与兽医 2023年第10期55卷 76-81页

作者：李雅琪王玉桂邹扬张月玥马平平叶得河王帅马永华甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室/农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

为探究兰州市宠物猫隐孢子虫的感染情况,采集兰州市五大主城区宠物猫粪便样品共计655份,提取DNA,采用套式PCR扩增结合测序的方法进行基因分型并构建遗传关系树。兰州市宠物猫隐孢子虫的感染率为3.97%(26/655),测序鉴定发现均为猫隐孢子... 详细信息

为探究兰州市宠物猫隐孢子虫的感染情况,采集兰州市五大主城区宠物猫粪便样品共计655份,提取DNA,采用套式PCR扩增结合测序的方法进行基因分型并构建遗传关系树。兰州市宠物猫隐孢子虫的感染率为3.97%(26/655),测序鉴定发现均为猫隐孢子虫(Cryptosporidium felis)。统计学分析结果显示,兰州市宠物猫隐孢子虫的感染率与品种、季节及样品来源显著相关(P<0.05)。结果表明,兰州市宠物猫携带隐孢子虫且存在传播给人的风险,研究结果为预防兰州地区人、猫感染隐孢子虫提供一定的依据。

关键词：隐孢子虫宠物猫兰州流行病学调查

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