检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术通报 2025年第1期41卷 39-48页

作者：尹号尤留超韩瑞高鹏程付磊储岳峰中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心兰州730046

基因组编辑技术是研究细菌等微生物在基因功能、耐药机制及致病机制等方面的重要工具,而同源重组是细菌基因组编辑的重要方式之一,传统的细菌内源性重组途径存在效率低下的问题,而一种来自噬菌体的单链DNA退火蛋白(SSAP)表现出了远超内... 详细信息

基因组编辑技术是研究细菌等微生物在基因功能、耐药机制及致病机制等方面的重要工具,而同源重组是细菌基因组编辑的重要方式之一,传统的细菌内源性重组途径存在效率低下的问题,而一种来自噬菌体的单链DNA退火蛋白(SSAP)表现出了远超内源性重组途径的基因组编辑效率,该蛋白具有单链DNA结合活性、介导基因组定向重组的特点,使其成为目前极具潜力的基因组编辑工具。本文主要对同源重组基本原理、噬菌体源SSAP介导的同源重组途径的基本元件、重组机制模型以及应用策略展开概述,旨在为进一步解析单链DNA退火蛋白介导的同源重组过程提供帮助,为研究更多细菌基因功能、致病机制以及开发工程菌株提供技术支撑,也为缺乏基因编辑方法的细菌提供技术参考。

关键词：细菌单链DNA退火蛋白同源重组机制应用

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非洲猪瘟病毒p30抗体竞争化学发光法的建立

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中国兽医学报 2025年第1期45卷 1-7页

作者：温升辉邵军军高闪电彭德财常惠芸丁嘉烽刘伟师铭咸广西大学动物科学技术学院临床兽医学实验室中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室/甘肃省病原生物学基础学科研究中心OIE/国家口蹄疫参考实验室

非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)感染引起猪的一种急性、热性、高致死性疾病。鉴于当前尚缺乏商业化的疫苗，并且近年来ASFV不断演变，中等毒力基因Ⅱ型毒株的涌现以及基因Ⅰ型... 详细信息

非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)感染引起猪的一种急性、热性、高致死性疾病。鉴于当前尚缺乏商业化的疫苗，并且近年来ASFV不断演变，中等毒力基因Ⅱ型毒株的涌现以及基因Ⅰ型弱毒株的传入，导致猪仅出现了持续性和慢性感染的状况。因此，对ASFV的特异性抗体检测变得势在必行。本研究利用p30单克隆抗体建立了一种检测ASFV p30抗体的竞争化学发光法——p30-cCLIA。通过检测背景清晰的阴阳性血清，确定该方法的Cut-off值为50%时，诊断敏感性(Dsn)和诊断特异性(Dsp)均为100%。在最佳反应条件下筛选出适用于p30单抗16-5E7E8-HRP的酶标稳定剂。此外，本研究建立的p30-cCLIA方法的灵敏度比商品化阻断ELISA试剂盒更高(1∶2 048 vs 1∶512),并具有良好的重复性。通过检测其他病毒感染猪阳性血清，结果表明与这些血清无交叉反应性。该方法的建立为ASF早期诊断提供了有力工具。

关键词：非洲猪瘟 p30抗体抗体检测化学发光法

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基于遗传密码子扩展技术的口蹄疫病毒VP1蛋白位点特异性荧光标记

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中国兽医科学 2025年第4期55卷 427-434页

作者：郝荣增卢炳州杨洋毛玉涵王姿逸赵陇和李亚军茹毅郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

将荧光标记分子引入细胞内表达的口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP1的特异性氨基酸位点,从而实现在活细胞内对蛋白质的动态可视化标记。先对VP1蛋白中非天然氨基酸(UAA)插入位点进行筛选,利用遗传密码子扩展技术将UAA定点插入到VP1蛋白,并通... 详细信息

将荧光标记分子引入细胞内表达的口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP1的特异性氨基酸位点,从而实现在活细胞内对蛋白质的动态可视化标记。先对VP1蛋白中非天然氨基酸(UAA)插入位点进行筛选,利用遗传密码子扩展技术将UAA定点插入到VP1蛋白,并通过生物正交点击化学反应引入荧光分子,观察细胞内的荧光标记蛋白;进一步通过间接免疫荧光试验验证荧光标记的蛋白。结果显示,成功筛选出VP1蛋白中UAA插入效率较高的氨基酸突变位点,并可以通过UAA控制VP1蛋白的表达。证实荧光分子染料DIBO-Alexa Fluor-488与VP1蛋白上的UAA发生点击化学反应可以进行活细胞染色,同时进行间接免疫荧光染色,可以观察到2种染色结果存在共定位趋势。本研究采用新方法实现了活细胞内FMDV VP1蛋白特异位点的荧光标记,为VP1蛋白功能研究和在细胞内示踪FMDV的感染及复制过程奠定了基础。

关键词：蛋白质标记口蹄疫病毒 VP1蛋白点击化学非天然氨基酸

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GP35蛋白在牛支原体中互作分子的挖掘

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中国兽医科学 2025年第2期55卷 151-162页

作者：尹号尤留超黄蓉韩瑞高鹏程支飞杰马轲付磊储岳峰中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

通过在牛支原体中表达GP35蛋白,利用IP-MS筛选其在牛支原体中的互作分子,将互作分子及GP35蛋白进行原核表达后展开互作验证。结果表明,牛支原体中的IP-MS筛选到了SSB蛋白和RmuC蛋白,前者为参与DNA复制过程的重要蛋白,而后者与DNA重组过... 详细信息

通过在牛支原体中表达GP35蛋白,利用IP-MS筛选其在牛支原体中的互作分子,将互作分子及GP35蛋白进行原核表达后展开互作验证。结果表明,牛支原体中的IP-MS筛选到了SSB蛋白和RmuC蛋白,前者为参与DNA复制过程的重要蛋白,而后者与DNA重组过程相关。完成对GP35、SSB和RmuC蛋白的原核表达后,通过pull-down确定了GP35蛋白与SSB蛋白和RmuC蛋白存在互作关系,结果将有助于解析GP35蛋白在牛支原体中介导重组的机制。

关键词：牛支原体 GP35重组酶互作分子同源重组

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宿主蛋白HERC4影响口蹄疫病毒复制的作用研究

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中国兽医科学 2025年第4期55卷 435-440页

作者：郑东东冯涛郝荣增杨彪晏子龙齐晓兰郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

本研究旨在探究宿主蛋白HERC4对口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响,首先利用CRISPR/Cas9技术在PK15细胞中构建了HERC4基因敲除细胞系,通过DNA测序和蛋白免疫印迹试验证明构建的基因敲除细胞系成功,然后在BHK21细胞中转染不同剂量的HERC4蛋白... 详细信息

本研究旨在探究宿主蛋白HERC4对口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响,首先利用CRISPR/Cas9技术在PK15细胞中构建了HERC4基因敲除细胞系,通过DNA测序和蛋白免疫印迹试验证明构建的基因敲除细胞系成功,然后在BHK21细胞中转染不同剂量的HERC4蛋白表达质粒,制备了HERC4基因过表达细胞,随后在HERC4基因敲除细胞和过表达细胞中,分别利用蛋白免疫印迹、实时荧光定量和病毒滴度测定方法检测了HERC4蛋白对FMDV复制的影响,结果表明,HERC4蛋白对FMDV复制有影响,敲除可以抑制病毒复制,过表达可以促进病毒复制。该研究结果为后续开展HERC4蛋白调控FMDV复制机制研究奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒宿主蛋白HERC4 基因敲除基因过表达

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结节性皮肤病病毒A27L蛋白的可溶性表达及其多克隆抗体制备

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中国兽医科学 2025年

作者：包燕玲宋昱庆户鑫兵张格林田占成关贵全罗建勋苟惠天殷宏独军政甘肃农业大学动物医学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心

旨在获得结节性皮肤病病毒（LSDV）的重组A27L蛋白并制备其多克隆抗体，将密码子优化的A27L基因进行人工合成，随后克隆至pET-28a表达载体中，成功构建重组表达质粒pET-28a-A27L，将其转化入BL21(DE3)感受态细胞中，用0.5 mmol/L IPTG... 详细信息

旨在获得结节性皮肤病病毒（LSDV）的重组A27L蛋白并制备其多克隆抗体，将密码子优化的A27L基因进行人工合成，随后克隆至pET-28a表达载体中，成功构建重组表达质粒pET-28a-A27L，将其转化入BL21(DE3)感受态细胞中，用0.5 mmol/L IPTG进行诱导表达，利用SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行分析。经优化表达条件获得分子质量约为19 kDa的可溶性重组A27L蛋白。采用High Affinity Ni-Charged Resin FF对可溶性表达产物进行纯化，成功获得高纯度的重组A27L蛋白，将其免疫新西兰大白兔4次后收集血清，Western-blot分析和间接免疫荧光鉴定结果表明A27L多克隆抗体可特异识别BHK-21细胞中表达的重组A27L蛋白。本研究利用大肠杆菌成功表达了可溶性重组LSDV A27L蛋白，并制备出特异的A27L多克隆抗体，为深入研究A27L蛋白的生物学功能以及研发结节性皮肤病疫苗和诊断技术提供了基础。

关键词：结节性皮肤病病毒 A27L蛋白可溶性表达多克隆抗体

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非洲猪瘟病毒p15蛋白在昆虫细胞中的表达及其免疫原性评价

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中国兽医科学 2025年

作者：党海迷杨洋茹毅郝荣增蒋成辉赵陇和卢炳州李亚军胡馨予韩盛楠伍国强郑海学兰州理工大学生命科学与工程学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心

本研究旨在利用昆虫杆状病毒表达系统制备非洲猪瘟病毒(ASFV) p15蛋白，并对其免疫原性进行评价，为非洲猪瘟亚单位疫苗研究提供试验基础。首先把编码p15蛋白的基因序列克隆至载体pFastBac1中，构建重组质粒pFastBac-p15，将该质粒与DH1... 详细信息

本研究旨在利用昆虫杆状病毒表达系统制备非洲猪瘟病毒(ASFV) p15蛋白，并对其免疫原性进行评价，为非洲猪瘟亚单位疫苗研究提供试验基础。首先把编码p15蛋白的基因序列克隆至载体pFastBac1中，构建重组质粒pFastBac-p15，将该质粒与DH10Bac同源重组后转染昆虫细胞收获重组杆状病毒rBac-p15，将rBac-p15感染sf9细胞进行重组蛋白的表达；然后利用亲和层析纯化获得目的蛋白，并利用SDS-PAGE、Western-blot和IFA鉴定重组蛋白的表达及反应性；再将p15蛋白免疫小鼠，评估其体液和细胞免疫应答水平。结果表明，在感染重组杆状病毒rBac-p15的sf9细胞中，p15蛋白获得高效表达，并可被ASFV康复猪血清特异性识别。p15蛋白免疫小鼠诱导产生高水平的特异性抗体和细胞因子，有利于刺激脾脏CD4+、CD8+ T淋巴细胞的增殖。综上，本研究利用昆虫杆状病毒表达系统成功制备了p15蛋白，该蛋白能够同时诱导很好的体液和细胞免疫应答，有助于非洲猪瘟疫苗的进一步研究。

关键词：非洲猪瘟病毒 p15蛋白昆虫杆状病毒表达系统免疫原性评价

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靶向FMDV基因组3B和3Cpro基因CRISPR/Cas13d转基因细胞系的构建及应用

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中国兽医科学 2025年

作者：郑东东齐晓兰杨彪晏子龙郑海学冯涛徐红伟西北民族大学生命科学与工程学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心

基因组编辑工具在抗病研究中具有巨大潜力。本研究旨在探究CRISPR/Cas13d系统在体外抗口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus，FMDV）研究的可行性。首先，靶向FMDV非结构蛋白3B和3Cpro的基因序列设计了2条向导RNA （guide RNA， ... 详细信息

基因组编辑工具在抗病研究中具有巨大潜力。本研究旨在探究CRISPR/Cas13d系统在体外抗口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus，FMDV）研究的可行性。首先，靶向FMDV非结构蛋白3B和3Cpro的基因序列设计了2条向导RNA （guide RNA， gRNA），并将其构建到Cas13d表达载体中；通过脂质体将表达载体转染到BHK21细胞中，再通过嘌呤霉素筛选，获得了转基因细胞系。随后，利用RT-qPCR、Western-blot以及TCID50等试验检测FMDV在转基因细胞系中的复制情况。结果显示，CRISPR/Cas13d系统显著抑制了FMDV在BHK21细胞中的复制。提示，CRISPR/Cas13d系统在口蹄疫病毒抗病研究中发挥重要作用，同时为创制具有抗病特性的家畜新品种提供了重要的理论基础，为畜禽疫病的防控提供了新的途径。

关键词：口蹄疫病毒 CRISPR/Cas13d 家畜抗病转基因

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口蹄疫病毒非结构蛋白3D的研究进展

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中国兽医科学 2025年第2期55卷 247-254页

作者：翟凤格聂振宇张涵张钊裴晶晶郑海学河南农业大学动物医学院河南郑州450046 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的一种在偶蹄动物间感染与传播的急性、热性、高度传染性疾病,动物死亡率高,严重影响农业生产,造成巨大的经济损失。FMDV 3D^(pol)蛋白不仅在基因组复制中发挥至关重要的作用,还参与调节宿主细胞生... 详细信息

口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的一种在偶蹄动物间感染与传播的急性、热性、高度传染性疾病,动物死亡率高,严重影响农业生产,造成巨大的经济损失。FMDV 3D^(pol)蛋白不仅在基因组复制中发挥至关重要的作用,还参与调节宿主细胞生物学过程,包括病毒复制复合体的组装和定位以及先天免疫反应。本文对FMDV 3D^(pol)与宿主的相互作用、抗病毒靶点研究以及病毒检测应用等内容进行了系统综述,旨在为疫病防控提供新思路。

关键词：口蹄疫病毒 3D^(pol) 宿主病毒相互作用药物靶点

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脯氨酰寡肽酶的研究进展

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中国兽医科学 2025年第2期55卷 240-246页

作者：王姿逸茹毅卢炳州杨洋马坤冷非凡郝荣增郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046 兰州理工大学生命科学与工程学院甘肃兰州730050 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

脯氨酰寡肽酶(prolyl oligopeptidase,POP)属于丝氨酸蛋白酶S9家族的成员,能特异性水解多肽链中脯氨酸残基或少数疏水性氨基酸残基的肽键、降解部分多肽类神经递质和激素,具有重要的酶学功能和非酶学活性。近年来,随着对POP结构解析及... 详细信息

脯氨酰寡肽酶(prolyl oligopeptidase,POP)属于丝氨酸蛋白酶S9家族的成员,能特异性水解多肽链中脯氨酸残基或少数疏水性氨基酸残基的肽键、降解部分多肽类神经递质和激素,具有重要的酶学功能和非酶学活性。近年来,随着对POP结构解析及其功能的研究,证明其在细胞生命周期、代谢、炎症以及自噬等方面均发挥多种重要的生物学功能,可能做为多种疾病的重要治疗靶点。本文主要综述了POP的结构特点、酶学活性和非酶学功能。

关键词：脯氨酰寡肽酶丝氨酸蛋白酶酶学活性非酶学功能

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