检索结果-内蒙古大学图书馆

病毒学报 2012年第4期28卷 453-461页

作者：景志忠何小兵房永祥贾怀杰周涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃兰州730046

TLRs是一类古老的天然模式识别分子,通过识别病毒的PAMPs,活化依赖和非依赖于MyD88的信号通路,诱导IFNs、促炎性细胞因子和趋化因子等分子的释放和表达,清除病毒的感染;同时,病毒为了感染宿主,采用多种免疫逃避策略干扰机体TLRs的信号,... 详细信息

TLRs是一类古老的天然模式识别分子,通过识别病毒的PAMPs,活化依赖和非依赖于MyD88的信号通路,诱导IFNs、促炎性细胞因子和趋化因子等分子的释放和表达,清除病毒的感染;同时,病毒为了感染宿主,采用多种免疫逃避策略干扰机体TLRs的信号,尤其调节MyD88、NF-κB、TRIF和IRFs等重要信号分子,以逃避机体天然PRRs的监视、识别和清除。因此,本文重点以VACV、HCV和HIV为例,介绍病毒感染对宿主TLRs模式识别与免疫应答信号的调节,以进一步理解病毒与宿主相互作用的复杂性,为病毒病的有效防治提供理论依据。

关键词：天然免疫 Toll样受体信号通路免疫逃避机制

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Toll样受体对病原寄生虫的天然免疫识别

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生物工程学报 2012年第12期28卷 1401-1413页

作者：何小兵贾怀杰景志忠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃兰州730046

Toll样受体是机体天然免疫系统最重要的模式识别受体之一,通过识别病原寄生虫的病原相关分子模式,活化依赖和非依赖于髓样分化因子88的信号转导通路,诱导干扰素、炎症因子、趋化因子等的表达以及树突状细胞的成熟,抵御病原寄生虫的感染... 详细信息

Toll样受体是机体天然免疫系统最重要的模式识别受体之一,通过识别病原寄生虫的病原相关分子模式,活化依赖和非依赖于髓样分化因子88的信号转导通路,诱导干扰素、炎症因子、趋化因子等的表达以及树突状细胞的成熟,抵御病原寄生虫的感染。因此,以下综述了Toll样受体对原病寄生虫,尤其对动物寄生性原虫与蠕虫感染的模式识别与天然免疫应答机制,以进一步理解病原寄生虫与宿主相互作用的复杂性,为寄生虫病的有效防治提供理论参考。

关键词：天然免疫模式识别受体病原相关分子模式 Toll样受体病原寄生虫

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嵌合型口蹄疫病毒样颗粒构建、表达及鉴定

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生物工程学报 2020年第7期36卷 1305-1313页

作者：刘绒欢郭慧琛杜平董虎郭梦楠孙世琪中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室OIE/国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为提高口蹄疫病毒(Foot-and-mouthdiseasevirus,FMDV)病毒样颗粒(Virus-likeparticles,VLPs)的特异性识别和递呈,为靶向疫苗研究奠定基础,利用反向PCR技术,将卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)第257–264位氨基酸(Amino acids,aa)的短肽嵌入FMDV结构蛋白VP3第171–172位aa或第173–174位aa,通过大肠杆菌表达FMDV结构蛋白VP0、VP1和嵌合型VP3,体外组装得到嵌合OVA257-264肽的病毒样颗粒(VLPOVA)。用动态光散射、透射电镜检测VLPOVA大小和形态,免疫印迹、酶联免疫吸附试验和激光共聚焦显微镜检测短肽的嵌入情况。结果显示在VP3的第173–174位aa嵌入OVA,不影响蛋白表达和VLPs的组装且OVA位于VLPOVA的表面,VLPOVA粒径比VLPs稍大。

关键词：口蹄疫病毒嵌合型病毒样颗粒 OVA257-264 VP3

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荧光光谱法和分子模拟技术研究考马斯亮蓝G-250与牛血清白蛋白的相互作用

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光谱学与光谱分析 2017年第8期37卷 2474-2479页

作者：王永刚杨光瑞马雪青冷非凡马建忠王晓力兰州理工大学生命科学与工程学院甘肃兰州730050 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所甘肃兰州730050

采用多种光谱技术结合圆二色谱技术研究了考马斯亮蓝G-250(CBBG-250)相互作用于牛血清白蛋白(BSA),探究了两者之间的作用机理。荧光光谱结果表明BSA与CBBG-250结合形式是静态猝灭,随CBBG-250浓度增加,其形成常数随温度逐渐减小,结合比为... 详细信息

采用多种光谱技术结合圆二色谱技术研究了考马斯亮蓝G-250(CBBG-250)相互作用于牛血清白蛋白(BSA),探究了两者之间的作用机理。荧光光谱结果表明BSA与CBBG-250结合形式是静态猝灭,随CBBG-250浓度增加,其形成常数随温度逐渐减小,结合比为1∶1,根据Stern-Volmer曲线计算焓变值(ΔH)和熵变值(ΔS)分别为-4.38kJ·mol^(-1)和-6.16J·mol^(-1)·K^(-1),均小于零,证明该过程是一个自发过程。傅里叶红外光谱测定结果表明CBBG-250的加入引起BSA结构的变化,随着CBBG-250溶液浓度的增加,BSA中色氨酸微环境极性被改变,在1 600~1 700cm^(-1)(酰胺带Ⅰ)和1 600~1 500cm^(-1)(酰胺带Ⅱ)处的特征吸收带蓝移。其中1 650cm^(-1)移动至1 710cm^(-1),1 544cm^(-1)移动到1 573cm^(-1),显示BSAα-螺旋(1 650~1 658cm^(-1))和β-折叠(1 620~1 640cm^(-1),1 675cm^(-1))结构发生变化,且α-螺旋含量比结合前有所降低。圆二色谱分析结果表明,两者间通过氢键和范德华力为主的作用力使得BSA二级结构发生变化,α-螺旋含量由42.15%下降至1.27%,该结果进一步被分子建模对接技术证明。

关键词：光谱法分子模拟考马斯亮蓝G-250 牛血清白蛋白相互作用

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A型塞内卡病毒的病毒样颗粒的制备及其免疫原性分析

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生物工程学报 2021年第9期37卷 3211-3220页

作者：伍春平茹毅田宏马坤郝荣增李亚军罗俊聪石正旺刘华南左志郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室OIE/国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为了研制A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)的病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)疫苗,以SVA田间流行毒株CH-FJ-2017结构蛋白基因序列为研究对象,构建了能够同时表达SVA的3种结构蛋白VP0、VP1和VP3的单个原核重组表达质粒pET28a-SVA... 详细信息

为了研制A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)的病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)疫苗,以SVA田间流行毒株CH-FJ-2017结构蛋白基因序列为研究对象,构建了能够同时表达SVA的3种结构蛋白VP0、VP1和VP3的单个原核重组表达质粒pET28a-SVA-VP031。通过大肠杆菌Escherichia coli表达、亲和层析纯化和体外自组装,获得SVA VLPs。透射电子显微镜鉴定显示,SVA的3种结构蛋白在体外能够自组装成直径约25–30 nm的VLPs,并且动物免疫试验结果表明,该VLPs能够有效刺激豚鼠产生高水平的抗原特异性中和抗体。上述研究结果为SVA VLPs疫苗的研制奠定了基础。

关键词： A型塞内卡病毒病毒样颗粒结构蛋白免疫原性

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表达O型口蹄疫病毒衣壳蛋白的重组腺病毒构建及其免疫原性分析

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生物工程学报 2022年第5期38卷 1824-1836页

作者：王灿灿张莉萍刘新生周鹏潘丽王永录中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室OIE/国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为构建表达O型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus, FMDV)衣壳蛋白的复制缺陷型人5型腺病毒(Ad5)为载体的重组腺病毒,本研究设计、合成特异性引物并扩增出FMDV-OZK93的P12A、3B3C基因,通过融合PCR方法连接2个片段,获得P12A3B3C基... 详细信息

为构建表达O型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus, FMDV)衣壳蛋白的复制缺陷型人5型腺病毒(Ad5)为载体的重组腺病毒,本研究设计、合成特异性引物并扩增出FMDV-OZK93的P12A、3B3C基因,通过融合PCR方法连接2个片段,获得P12A3B3C基因后插入到pDC316-mCMV-EGFP质粒,构建了能够表达FMDV-OZK93株衣壳蛋白前体P12A和3B3C蛋白酶的重组穿梭质粒pDC316-mCMV-EGFP-P12A3B3C。利用AdMax^(TM)腺病毒包装系统进行重组腺病毒rAdv-P12A3B3C-OZK93的包装、鉴定及扩增;并感染人胚胎肾细胞HEK-293进行表达验证。将鉴定正确且高度纯化后的重组腺病毒肌肉免疫小鼠进行免疫原性分析。结果显示,rAdvP12A3B3C-OZK93在病毒传代过程中目的基因稳定存在,且病毒滴度可达1×10^(9.1)TCID_(50)/mL。间接免疫荧光和Western blotting结果均表明rAdv-P12A3B3C-OZK93在HEK-293细胞中表达了FMDV特异性蛋白P12A和VP1。PK细胞感染实验证明rAdv-P12A3B3C-OZK93可感染猪源细胞,这为构建的rAdv-P12A3B3C-OZK93用于猪对抗FMDV的免疫与保护奠定了基础。相比于FMDV灭活疫苗免疫的小鼠,重组腺病毒免疫小鼠后可诱导机体产生更高水平的FMDV特异性抗体以及γ-IFN和IL-10应答反应,表明该重组腺病毒可对动物机体产生良好的免疫原性,为后续研制新型口蹄疫活载体疫苗奠定了重要基础。

关键词： O型口蹄疫病毒重组腺病毒 P12A和3B3C 免疫原性

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CRISPR/Cas9介导的RPSA基因敲除细胞系的建立及其应用

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微生物学报 2021年第7期61卷 1945-1956页

作者：高利利王聪聪杨帆曹伟军张向乐刘湘涛朱紫祥郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

【目的】利用CRISPR/Cas9技术建立RPSA基因缺失的乳仓鼠肾细胞(baby hamster kidney cells,BHK21)细胞系,为开展RPSA调控病毒复制机制研究提供工具;同时,初步探究RPSA对塞内卡病毒复制的影响。【方法】根据GenBank中仓鼠的RPSA基因序列... 详细信息

【目的】利用CRISPR/Cas9技术建立RPSA基因缺失的乳仓鼠肾细胞(baby hamster kidney cells,BHK21)细胞系,为开展RPSA调控病毒复制机制研究提供工具;同时,初步探究RPSA对塞内卡病毒复制的影响。【方法】根据GenBank中仓鼠的RPSA基因序列找到产生不同转录本的共同外显子段,设计并合成4对引导RNA(sgRNA),分别构建至PX330载体中;经过筛选选择打靶活性较高的PX330-RPSA-sgRNA2质粒用于后续敲除细胞系构建。将PX330-RPSA-sgRNA2质粒转染BHK21细胞后,通过有限稀释法筛选单克隆细胞,通过Western blot及序列测定检测RPSA基因的敲除。通过Western blot及qPCR分析比较塞内卡病毒在野生型及RPSA基因敲除BHK21细胞中的复制差异。【结果】Western blot检测及序列测序证实了RPSA基因敲除单克隆细胞构建成功。进一步研究发现,塞内卡病毒在RPSA基因敲除细胞中的复制水平明显低于其在野生型BHK21细胞中复制的水平。【结论】成功构建了RPSA基因敲除的BHK21细胞系,首次表明RPSA对塞内卡病毒的复制具有重要作用,为进一步开展RPSA在细胞内调控病毒复制机制研究奠定基础。

关键词： CRISPR/Cas9 RPSA 基因缺失细胞塞内卡病毒

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口蹄疫病毒自身核酸片段对病毒样颗粒组装的促进作用

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生物工程学报 2020年第10期36卷 2076-2082页

作者：柳海云董虎靳野郭慧琛孙世琪中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室OIE/国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

选取能够与口蹄疫病毒结构蛋白相互作用且有特殊结构的核酸片段5′非翻译区(5′UTR)和内部核糖体进入位点(Internal ribosome entry site,IRES)作为支架,进行病毒样颗粒组装的研究。通过对组装产物进行粒径、表面电位、凝胶阻滞、核酸... 详细信息

选取能够与口蹄疫病毒结构蛋白相互作用且有特殊结构的核酸片段5′非翻译区(5′UTR)和内部核糖体进入位点(Internal ribosome entry site,IRES)作为支架,进行病毒样颗粒组装的研究。通过对组装产物进行粒径、表面电位、凝胶阻滞、核酸酶消化、尺寸排阻色谱、透射电镜、圆二色光谱等检测,结果表明,核酸片段5′UTR和IRES能与口蹄疫病毒样颗粒共组装并形成病毒样颗粒。通过统计学分析发现VLPs-5′UTR的75S颗粒的组装效率显著高于单纯VLPs组(P<0.001)和VLPs-IRES(P<0.01),而VLPs-IRES的12S颗粒的组装效率显著高于单纯VLPs组(P<0.0001)和VLPs-5′UTR(P<0.0001),表明口蹄疫病毒自身核酸片段5′UTR更有利于口蹄疫病毒样颗粒的组装。该研究对促进口蹄疫病毒样颗粒组装提出了新的思路和优化策略,有助于病毒样颗粒疫苗的研发。

关键词：口蹄疫病毒病毒样颗粒 5′非翻译区内部核糖体进入位点尺寸排阻色谱法

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口蹄疫反向疫苗研究进展

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病毒学报 2014年第2期30卷 213-220页

作者：杨波杨帆王松豪张岩曹伟军殷宏郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

利用反向遗传技术对口蹄疫病毒基因的改造和修饰,可以实现对疫苗种毒的生产性能、抗原匹配性、抗原稳定性、免疫应答能力、生物安全性等特征的改良,能够迅速获得预期生物学特性的疫苗候选株,进而可以减少和避免流行毒株驯化环节带来的... 详细信息

利用反向遗传技术对口蹄疫病毒基因的改造和修饰,可以实现对疫苗种毒的生产性能、抗原匹配性、抗原稳定性、免疫应答能力、生物安全性等特征的改良,能够迅速获得预期生物学特性的疫苗候选株,进而可以减少和避免流行毒株驯化环节带来的负面影响。不仅改变了对流行毒株筛选驯化受病毒自然属性制约、费时费力、成功率低的缺陷,而且可以实现更为主动有效的疫苗毒株的设计,对整体提升疫苗品质和效力具有重大意义。本文以口蹄疫病毒为例,从改良疫苗毒株的生物学特性方面进行了综述,为相关研究提供参考和借鉴。

关键词：口蹄疫反向遗传标记疫苗

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细丝蛋白A通过活化Ⅰ型干扰素信号通路抑制H5N6流感病毒复制

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中国科学：生命科学 2018年第12期48卷 1279-1286页

作者：韩璐汪亮曾艳陈化兰朱启运徐帅中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室兰州730046 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069

H5N6 A型流感病毒(influenza A virus, IAV)是严重危害公共卫生安全的新发人兽共患病病原,其复制和致病的科学问题需进一步深入研究.细丝蛋白A(filamin A, FLNA)是一种多功能的肌动蛋白结合蛋白,其可作为细胞信号转导中的支架蛋白,广泛... 详细信息

H5N6 A型流感病毒(influenza A virus, IAV)是严重危害公共卫生安全的新发人兽共患病病原,其复制和致病的科学问题需进一步深入研究.细丝蛋白A(filamin A, FLNA)是一种多功能的肌动蛋白结合蛋白,其可作为细胞信号转导中的支架蛋白,广泛参与细胞内的多种重要生物学过程,但其在流感病毒感染与免疫过程中的作用尚未见报道.前期深度测序分析发现H5N6流感病毒感染细胞后可显著下调FLNA的表达水平,而FLNA过表达能够显著抑制流感病毒在细胞中的复制,并且可以活化Ⅰ型干扰素信号通路.通过siRNA或抑制剂阻断Ⅰ型干扰素下游信号通路之后, FLNA对流感病毒复制的抑制作用消失.以上结果表明, FLNA可以通过活化Ⅰ型干扰素信号通路来抑制H5N6流感病毒在细胞中的复制.本文阐明了FLNA蛋白在流感病毒复制过程中的作用,发现了FLNA参与细胞天然免疫反应的新功能,同时为抗流感病毒药物研发提供了理论依据和研究思路.

关键词：细丝蛋白A 流感病毒 H5N6 Ⅰ型干扰素

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