检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术通报 2009年第10期25卷 40-44页

作者：李菁林彤宋帅高闪电邵军军丛国政独军政常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

随着对分子生物学研究和抗体分子结构功能的深入研究,利用细胞工程和遗传工程对抗体分子进行改建并赋予其新的功能,进而开发了新的抗体应用领域,使单克隆抗体技术又向前发展了一步。基因工程抗体是按人类设计所重新组装的新型抗体分子,... 详细信息

随着对分子生物学研究和抗体分子结构功能的深入研究,利用细胞工程和遗传工程对抗体分子进行改建并赋予其新的功能,进而开发了新的抗体应用领域,使单克隆抗体技术又向前发展了一步。基因工程抗体是按人类设计所重新组装的新型抗体分子,可保留或增加天然抗体的特异性和主要生物学活性,去除或减少无关结构,从而可克服单克隆抗体在临床应用方面的缺陷。

关键词：基因工程抗体人源化抗体小分子抗体核糖体展示

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病毒受体及其研究现状

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动物医学进展 2009年第7期30卷 95-100页

作者：赵清李冬中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

受体在宿主细胞与病毒的相互作用中起着极其重要的作用。病毒受体的特性与病毒的宿主范围、组织嗜性有密切关系,是病毒致病性的主要因素之一。病毒受体的研究方法有经典的研究方法,也有现代分子生物学方法。在病毒受体的研究中,通常以... 详细信息

受体在宿主细胞与病毒的相互作用中起着极其重要的作用。病毒受体的特性与病毒的宿主范围、组织嗜性有密切关系,是病毒致病性的主要因素之一。病毒受体的研究方法有经典的研究方法,也有现代分子生物学方法。在病毒受体的研究中,通常以分离纯化的细胞膜代替活体细胞来研究病毒受体。通过对病毒与细胞受体相互作用的深入研究,人们已经发现很多受体阻断剂例如植物凝集素和肝素等物质可以阻断病毒与受体的结合,从而为病毒病的防控提供繁殖一些有效的新方法。

关键词：病毒受体阻断剂

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过表达TPL2蛋白PK-15细胞系的建立及其功能验证

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中国兽医学报 2020年第7期40卷 1319-1324页

作者：郝军红闫鸣昊张大俊张学刚申超超徐国伟李国丽张克山郑海学刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

通过基因合成的TPL2(tumor progression locus 2)质粒,获得稳定表达TPL2的PK-15/TPL2细胞系。将慢病毒载体Lv-PCDH和TPL2(Pig)重组慢病毒载体Lv-TPL2(Pig)利用转染试剂将其转染至PK-15细胞。感染48 h后,加入嘌呤霉素进行药物筛选,通过... 详细信息

通过基因合成的TPL2(tumor progression locus 2)质粒,获得稳定表达TPL2的PK-15/TPL2细胞系。将慢病毒载体Lv-PCDH和TPL2(Pig)重组慢病毒载体Lv-TPL2(Pig)利用转染试剂将其转染至PK-15细胞。感染48 h后,加入嘌呤霉素进行药物筛选,通过筛选得到的阳性细胞株PK-15/TPL2即为稳定表达TPL2蛋白的PK-15细胞株。通过qRT-PCR法和琼脂糖凝胶电泳、IFA,TCID50技术验证PK-15/TPL2细胞系和对口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)和猪塞内加谷病毒(seneca valley virus,SVV)病原复制的影响。结果显示,细胞表达大量的TPL2的基因产物,用FMDV、SVV病毒感染稳定表达TPL2的PK-15细胞株时,明显抑制病毒的复制。结果表明,利用该技术可高效快速地建立了稳定高表达TPL2的PK-15细胞系,该细胞株的建立为病毒的分离及TPL2的生物学活性研究奠定理论基础。

关键词： TPL2基因 PK-15细胞系 FMDV SVV 慢病毒表达系统

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基于16S rRNA测序技术分析山羊皮肤脓包菌群结构特征

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中国兽医科学 2021年第9期51卷 1073-1081页

作者：杨金柯郝雨崔卉梅赵登率袁兴国陈学辉杨博张婷郑海学刘湘涛张克山中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为探讨山羊体表脓包中的微生物多样性,运用高通量测序技术对脓包积液中的16S rRNA和ITS基因测序。根据获得的有效序列和操作分类单元(OTU)数目,进行α多样性分析和菌群结构组成分析。结果表明,脓包中细菌和真菌OTU数目分别为53和410;细... 详细信息

为探讨山羊体表脓包中的微生物多样性,运用高通量测序技术对脓包积液中的16S rRNA和ITS基因测序。根据获得的有效序列和操作分类单元(OTU)数目,进行α多样性分析和菌群结构组成分析。结果表明,脓包中细菌和真菌OTU数目分别为53和410;细菌群落中优势菌属分别为葡萄球菌属(Staphylococcus,98.04%)、梭杆菌属(Fusobacterium,80.62%)和拟杆菌属(Bacteroides,19.32%),真菌群落中没有明显优势菌群。本研究通过16S rRNA高通量测序技术,分析了可能引起山羊皮肤脓包的病原微生物,为皮肤脓包病的防控和临床指导用药提供了参考。

关键词：山羊皮肤脓包 16S rRNA 微生物多样性菌群结构

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HEK293T细胞敲除TPL2基因促进塞内卡病毒复制的研究

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中国兽医科学 2020年第9期50卷 1073-1082页

作者：闫鸣昊郝军红张大俊申超超徐国伟侯景张克山郑海学刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

肿瘤进展位点2(TPL2)在不同病毒感染过程中扮演着不同角色。为探究TPL2对塞内卡病毒(SVA)复制的影响,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建TPL2基因敲除HEK293T细胞系,以PCR测序和Western-blot对TPL2敲除效率进行双重鉴定,同时检测TPL... 详细信息

肿瘤进展位点2(TPL2)在不同病毒感染过程中扮演着不同角色。为探究TPL2对塞内卡病毒(SVA)复制的影响,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建TPL2基因敲除HEK293T细胞系,以PCR测序和Western-blot对TPL2敲除效率进行双重鉴定,同时检测TPL2缺失对细胞形态和细胞增殖速度的影响。最后,用SVA感染细胞,采用IFA、RT-qPCR、Western-blot和TCID50方法检测病毒增殖水平,综合评价TPL2敲除对SVA复制的影响。结果,获得两株敲除TPL2基因的HEK293T细胞。随机选取B1细胞株(HEK293T-TPL2-/-)进行后续功能评价,发现TPL2敲除后细胞的增殖速度与对照HEK293T细胞无显著差异,均为贴壁、上皮样细胞形态。SVA感染后与对照细胞相比,敲除TPL2基因显著增加病毒拷贝数,病毒mRNA的转录,病毒蛋白的翻译以及子代病毒的毒力。综上所述,本研究成功建立TPL2基因敲除HEK293T细胞系并证明TPL2在SVA感染过程中发挥着抗病毒作用,为进一步揭示TPL2相关免疫反应和SVA感染过程的具体作用机制奠定试验基础并提供良好的细胞模型,也为疫苗生产过程中提高病毒产量提供一种可行性策略。

关键词： CRISPR/Cas9 TPL2基因 HEK293T细胞基因敲除塞内卡病毒

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猪繁殖与呼吸综合征病毒的纯化与形态观察

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中国兽医科学 2021年第12期51卷 1519-1524页

作者：魏德陇张婧李坤孙普白兴文包慧芳李冬刘在新卢曾军曹轶梅中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)全病毒抗原,用于免疫学研究,本研究在Marc-145细胞上繁殖了PRRSV基因Ⅱ型VR2332株,经聚乙二醇浓缩后,用蔗糖密度梯度离心法纯化PRRSV病毒粒子。用电子显微镜观察病毒粒子形态结构,并用SDS-PAGE、免... 详细信息

为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)全病毒抗原,用于免疫学研究,本研究在Marc-145细胞上繁殖了PRRSV基因Ⅱ型VR2332株,经聚乙二醇浓缩后,用蔗糖密度梯度离心法纯化PRRSV病毒粒子。用电子显微镜观察病毒粒子形态结构,并用SDS-PAGE、免疫印迹等方法分析了纯化效果。结果显示,电子显微镜观察到PRRSV形状呈球形或椭圆形,囊膜表面有微绒毛样突起,病毒粒子大小不一,大多数直径在50~80 nm之间,有极少数直径超过120 nm。SDS-PAGE可见病毒的多个结构蛋白条带,利用感染康复猪血清进行免疫印迹检测显示,M蛋白的印迹条带最深,显示纯化病毒具有良好的反应活性,为后续免疫学研究奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒纯化形态学蔗糖密度梯度

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口蹄疫病毒持续感染的黄牛分离毒株VP1和3ABC基因变异特征分析

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农业生物技术学报 2008年第5期16卷 729-735页

作者：沈小燕丛国正常惠芸刘湘涛谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室

为明确口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)持续感染与病毒基因变异潜在关系,研究FMDV持续感染分离株结构蛋白VP1和非结构蛋白3ABC基因在牛体内的动态变化。实验用O/Akesu/58毒株以104ID50/mL剂量舌面穿刺接种5头黄牛,出现... 详细信息

为明确口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)持续感染与病毒基因变异潜在关系,研究FMDV持续感染分离株结构蛋白VP1和非结构蛋白3ABC基因在牛体内的动态变化。实验用O/Akesu/58毒株以104ID50/mL剂量舌面穿刺接种5头黄牛,出现临床或亚临床症状后痊愈动物会成为可能的FMDV带毒牛。用探杯定期采集实验牛咽喉部黏性液体(O/P液),接种BHK-21细胞增殖病毒后共分离到12株毒株。RT-PCR扩增持续感染分离毒株VP1和3ABC基因,克隆测序发现,所有持续感染分离毒株的VP1基因核苷酸和氨基酸同源性都在98%以上,且没有碱基缺失或插入现象;但与O/Akesu/58的核苷酸同源性仅为85%左右,氨基酸同源性也仅为90%。持续感染分离株VP1基因有多处位点发生突变,其中有16个核苷酸位点发生一致突变,但只有两个位点造成氨基酸突变(I56→T、A210→E);在所有FMDV持续感染分离毒株之间有4个核苷酸位点和3个氨基酸位点发生了颠换。非结构蛋白3ABC基因较为稳定,仅有13个核苷酸位点和5个氨基酸位点的颠换,与宿主嗜性相关的3A基因也没有缺失。推测FMDV持续感染的形成与主要结构抗原基因VP1和宿主嗜性相关基因3ABC变异的关系不显著。

关键词：口蹄疫病毒持续感染黄牛基因变异 VP1和3ABC

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小反刍兽疫根除计划及其疫苗的最新研究进展

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中国兽医科学 2021年第4期51卷 412-420页

作者：张大俊杨博史喜绢张婷杨金柯崔卉梅赵登率袁兴国郑海学刘湘涛张克山中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

主要介绍了小反刍兽疫国内外控制和根除战略方面的内容以及近年来小反刍兽疫疫苗的最新研究进展,以期为我国小反刍兽疫的净化和根除提供参考。

关键词：小反刍兽疫全球根除计划疫苗控制

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SAT2型口蹄疫病毒南非地区分离株结构蛋白VP1及其C端的表达、纯化和反应原性分析

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细胞与分子免疫学杂志 2010年第7期26卷 631-634页

作者：高闪电常惠芸独军政邵军军丛国正林彤韩雪清谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 中国检验检疫科学研究院动植物检疫研究所北京100029

目的：表达SAT2型口蹄疫病毒结构蛋白VPl及其C端，进行反应原性分析并制备多克隆抗体。方法：以SAT2型口蹄疫病毒南非地区分离株结构蛋白VPl编码区的重组克隆载体为模板，设计特异性引物，扩增VPl基因及其C端编码区，然后将该其分别克... 详细信息

目的：表达SAT2型口蹄疫病毒结构蛋白VPl及其C端，进行反应原性分析并制备多克隆抗体。方法：以SAT2型口蹄疫病毒南非地区分离株结构蛋白VPl编码区的重组克隆载体为模板，设计特异性引物，扩增VPl基因及其C端编码区，然后将该其分别克隆至原核表达载体pET-30a（＋）中，转化大肠杆菌工程菌株BL21（DE3）plysS，经IPTG诱导，以金属离子螯合层析法对表达的VPl、VP1C端融合蛋白进行纯化，经Westernblot对其反应原性进行分析。用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔制备其多克隆抗体，以ELISA方法测定抗体效价。结果：实现了SAT2型口蹄疫病毒结构蛋白VPl及其C端的高效表达，表达产物主要以包涵体的形式存在。SDS—PAGE显示纯化的目的蛋白分别在相对分子质量35000和19000处有单一目的条带，具有较高的纯度。Western blot结果显示，纯化的VP1及其C端均可与牛SAT2型FMDV阳性血清反应，而与阴性对照血清无交叉反应。结论：用纯化的VPl及VP1C融合蛋白免疫新西兰大耳白兔制备的多克隆抗体效价达1：12800以上，具有较高的特异性。

关键词： SAT2型口蹄疫病毒结构蛋白VP1 原核表达反应原性分析

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整联蛋白αvβ3与口蹄疫病毒感染

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中国兽医杂志 2009年第9期45卷 46-48页

作者：赵建勇高闪电独军政伏小平常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

病毒受体是决定病毒宿主特异性和组织嗜性的主要因素之一,其本质是糖蛋白、蛋白聚糖、脂类或糖脂,多数属于蛋白质.大多数病毒受体分布于细胞表面,病毒需要细胞受体的参与才能进入细胞并进行复制、转录、包装成病毒粒子.整联蛋白αvβ3... 详细信息

病毒受体是决定病毒宿主特异性和组织嗜性的主要因素之一,其本质是糖蛋白、蛋白聚糖、脂类或糖脂,多数属于蛋白质.大多数病毒受体分布于细胞表面,病毒需要细胞受体的参与才能进入细胞并进行复制、转录、包装成病毒粒子.整联蛋白αvβ3具有多种配体其主要包括:细胞间配体、细胞外基质(extracellular matrix,ECM)配体、血管细胞黏附配体,还能识别多种病毒表面上特定的'精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp,RGD)序列',并介导病毒感染细胞的过程,口蹄疫病毒可利用VP1的G-H环(约为130～160残基)上的此序列吸附整联蛋白αvβ3感染细胞.本文就整联蛋白αvβ3的结构、分子生物学特性以及其介导的口蹄疫病毒感染细胞机制作一综述.

关键词：病毒感染整联蛋白口蹄疫病毒受体细胞表面宿主特异性组织嗜性蛋白聚糖

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