检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2014年第1期44卷 62-67页

作者：李安岩刘爱红王锦明朱海马米玲任巧云关贵全罗建勋中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

以BORCT蛋白为包被抗原,优化最佳反应条件,确定阈值并测定其交叉反应,建立了一种特异性检测牛巴贝斯虫抗体的间接ELISA方法。利用该方法测定了试验感染的2头牛的抗体动态曲线,并对我国四川、甘肃、新疆3个省(自治区)的314份牛血清样品... 详细信息

以BORCT蛋白为包被抗原,优化最佳反应条件,确定阈值并测定其交叉反应,建立了一种特异性检测牛巴贝斯虫抗体的间接ELISA方法。利用该方法测定了试验感染的2头牛的抗体动态曲线,并对我国四川、甘肃、新疆3个省(自治区)的314份牛血清样品进行了检测。结果显示,经MedCalc 12.7.3.0软件分析86份阴性血清和69份阳性血清的检测结果,确定29.6%抗体比率为该方法的阳性阈值,对应的敏感性和特异性分别为94.2%和96.5%,并且与其他巴贝斯虫、泰勒虫和无浆体阳性血清均无交叉反应。对试验感染动物的检测结果显示,感染后的第6天出现特异性抗体,第12天达到最高值,一直持续到第270天。野外样品检测结果显示,3个省份均有牛巴贝斯虫的分布,平均阳性率为46.82%。

关键词：牛巴贝斯虫 BORCT 酶联免疫吸附试验特异性敏感性

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边缘无浆体病诊断方法的研究进展

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中国兽医科学 2008年第7期38卷 633-638页

作者：马米玲罗建勋殷宏刘志杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

综述了边缘无浆体病的常规病原学诊断方法、血清学诊断方法和分子生物学检测方法的国内外研究现状和发展水平,并探讨了核酸探针、PCR和反向线状印迹杂交技术在边缘无浆体病诊断中的应用及研究进展。

关键词：牛无浆体病诊断

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小反刍兽疫病毒细胞膜受体的鉴定

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2012年第9期40卷 13-18,23页

作者：蒙学莲窦永喜翟军军闫丰超张海瑞石晓妮才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

【目的】对小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)H蛋白胞外区(tH)细胞膜受体进行鉴定,为PPRV致病机制的研究奠定基础。【方法】克隆PPRV H基因胞外区(tH),在毕赤酵母(Pichia pasto-ris)中进行真核表达,纯化后免疫家兔... 详细信息

【目的】对小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)H蛋白胞外区(tH)细胞膜受体进行鉴定,为PPRV致病机制的研究奠定基础。【方法】克隆PPRV H基因胞外区(tH),在毕赤酵母(Pichia pasto-ris)中进行真核表达,纯化后免疫家兔,获得兔抗PPRV-tH蛋白特异性抗体;提取山羊外周血淋巴细胞膜蛋白,经SDS-PAGE检测后,湿转印法转印至NC膜,分别利用纯化的重组tH蛋白和PPRV进行病毒铺覆蛋白结合试验(VOPBA),对受体进行鉴定。【结果】成功克隆了1 653bp的PPRVtH基因,构建其重组酵母表达质粒pPIC9K-tH,诱导表达后获得了60ku目的蛋白。重组tH蛋白免疫家兔后获得了效价为1∶200的抗血清。Western-blotting分析发现,该重组蛋白可与PPRV多克隆抗体发生特异性反应,山羊外周血淋巴细胞膜蛋白上有2个与PPRV和重组tH蛋白结合的蛋白带,分子质量约为38和100ku。【结论】从山羊外周血淋巴细胞膜蛋白上鉴定到了2种与PPRV结合的蛋白组分,其特性有待于进一步研究。

关键词：小反刍兽疫病毒病毒受体病毒铺覆蛋白结合试验(VOPBA)

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牦牛外周血单个核细胞抑制消减cDNA文库的构建及部分差异表达分子的克隆分析

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中国预防兽医学报 2009年第8期31卷 631-636页

作者：何延华景志忠陈国华房永祥蒙学莲李小庆段风云王生富中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

为筛选牦牛外周血单核细胞(PBMC)差异性基因,以刀豆素A(ConA)和脂多糖(LPS)联合刺激的PBMC cDNA为实验组,未经诱导刺激的PBMC cDNA为驱动组,利用抑制性消减杂交技术(SSH)构建了丝裂原诱导刺激PBMC的消减文库并对其部分阳性克隆进行了ES... 详细信息

为筛选牦牛外周血单核细胞(PBMC)差异性基因,以刀豆素A(ConA)和脂多糖(LPS)联合刺激的PBMC cDNA为实验组,未经诱导刺激的PBMC cDNA为驱动组,利用抑制性消减杂交技术(SSH)构建了丝裂原诱导刺激PBMC的消减文库并对其部分阳性克隆进行了EST序列分析。从消减文库中随机挑取16个阳性克隆,进行PCR鉴定,显示克隆的重组率大于93%,插入片段大小大部分集中在200bp～1000bp之间。随机挑取100个克隆进行测序及同源性分析,初步获得27条差异表达基因片段,其中24个为已知基因,3个为新ESTs序列;随机选择非重复的6个差异表达的序列设计引物,以半定量PCR方法验证其消减效率。结果显示,均从构建的消减文库中扩增到目的片段,其中5个为诱导性差异表达分子,1个为诱导特异性表达分子,说明该文库有较高的质量。本研究应用抑制消减杂交技术构建了牦牛PBMC的差异表达cDNA文库,并高通量克隆鉴定了相关功能基因片段,表明该技术手段有助于快速发现牦牛新功能基因。

关键词：外周血单个核细胞(PBMC) 诱导刺激抑制消减杂交 cDNA文库

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猪干扰素-γ哺乳动物细胞重组表达质粒作为疫苗佐剂在小鼠体内的组织分布及环境安全性研究

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中国预防兽医学报 2008年第4期30卷 289-294页

作者：蒙学莲景志忠房永祥窦永喜陈国华贾怀杰段凤云才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

重组表达质粒作为免疫佐剂从实验室走向临床必须解决其对机体和生物环境释放的安全性问题。本研究以pcDNA3.1/IFN-γ重组表达质粒作为免疫佐剂进行试验,探讨了其在小鼠体内组织的分布和生物安全性。将pcDNA3.1/IFN-γ重组表达质粒经肌... 详细信息

重组表达质粒作为免疫佐剂从实验室走向临床必须解决其对机体和生物环境释放的安全性问题。本研究以pcDNA3.1/IFN-γ重组表达质粒作为免疫佐剂进行试验,探讨了其在小鼠体内组织的分布和生物安全性。将pcDNA3.1/IFN-γ重组表达质粒经肌肉途径免疫小鼠,免疫后不同时间迫杀,并取各种组织抽提基因组DNA:一是利用PCR技术检测其在组织内的分布及与细胞基因组发生整合的可能性;二是以PCR技术检测免疫动物现场环境样品,监测pcDNA3.1/IFN-γ重组表达质粒中的猪IFN-γ基因、CMV启动子基因和抗性基因是否转移和扩散到环境细菌中。结果表明,免疫24h后在小鼠的各组织中仅注射部位肌肉存在重组表达质粒,免疫5d后仅有1只小鼠注射部位肌肉和血液中存在重组表达质粒,免疫15d后所有动物的各组织中无重组表达质粒存在;同时未发现pcDNA3.1/IFN-γ重组表达质粒整合到宿主细胞基因组和转化到环境其他细菌中。因此,认为pcDNA3.1/IFN-γ重组表达质粒对动物和环境是安全的。

关键词：重组表达质粒生物安全性组织分布基因组整合转移和扩散

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微小牛蜱Bm91基因的克隆及在毕赤酵母中的表达

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中国兽医科学 2008年第7期38卷 569-575页

作者：王玙罗建勋马米玲关贵全李有全刘爱红任巧云刘军龙殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

从我国半饱血微小牛蜱雌性成蜱肠道和唾液腺中提取总RNA;参照GenBank中已发表的微小牛蜱Bm91基因的核苷酸序列,设计了1对特异性引物。采用RT-PCR技术扩增Bm91基因,测序正确后将其亚克隆到巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K的EcoRⅠ酶... 详细信息

从我国半饱血微小牛蜱雌性成蜱肠道和唾液腺中提取总RNA;参照GenBank中已发表的微小牛蜱Bm91基因的核苷酸序列,设计了1对特异性引物。采用RT-PCR技术扩增Bm91基因,测序正确后将其亚克隆到巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K的EcoRⅠ酶切位点,构建重组表达载体pPIC9K-Bm91。再次测序正确后将其用SacⅠ内切酶线性化,电转化毕赤酵母GS115并经G418抗性筛选高拷贝重组菌株后用甲醇诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析,结果显示,Bm91基因获得了成功表达,诱导表达的培养上清液中表达出具有反应活性的83ku的重组Bm91蛋白。

关键词：微小牛蜱 Bm91基因分泌表达

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小反刍兽疫的研究进展

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中国兽医科学 2007年第11期37卷 994-999页

作者：骆学农郑亚东才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

概述了小反刍兽疫的易感动物、临床症状及病原的理化特征和基因组结构,重点阐述了病毒6种结构蛋白的大小和组成、小反刍兽疫病毒的分离培养、血清学及分子生物学诊断技术,并对其传统疫苗以及新型基因工程疫苗的研制进行了详细论述,以为... 详细信息

概述了小反刍兽疫的易感动物、临床症状及病原的理化特征和基因组结构,重点阐述了病毒6种结构蛋白的大小和组成、小反刍兽疫病毒的分离培养、血清学及分子生物学诊断技术,并对其传统疫苗以及新型基因工程疫苗的研制进行了详细论述,以为该病的流行病学研究、诊断和免疫防制提供参考。

关键词：小反刍兽疫病毒结构蛋白诊断疫苗

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环形泰勒虫微线体-棒状体基因的原核表达及表达产物的免疫原性分析

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中国兽医科学 2014年第6期44卷 599-604页

作者：岑双庆李有全陈泽张晓李安岩何海宁刘志杰杨吉飞关贵全牛庆丽刘爱红任巧云罗建勋殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

为了解环形泰勒虫微线体-棒状体蛋白的生物学特性,通过生物信息学分析,选取环形泰勒虫微线体-棒状体蛋白特异性和抗原性最高的一段开放阅读框进行RT-PCR扩增,将所获基因片段连接到原核表达载体pGEX-4T-1中进行表达,将表达产物纯化后免... 详细信息

为了解环形泰勒虫微线体-棒状体蛋白的生物学特性,通过生物信息学分析,选取环形泰勒虫微线体-棒状体蛋白特异性和抗原性最高的一段开放阅读框进行RT-PCR扩增,将所获基因片段连接到原核表达载体pGEX-4T-1中进行表达,将表达产物纯化后免疫家兔制备该蛋白的多克隆抗体。通过SDS-PAGE和Western-blot分析该基因的原核表达情况和表达产物的反应原性。生物信息学分析发现,该蛋白第470~650位氨基酸残基的特异性和抗原性最高。对诱导条件的摸索发现,在37℃、1.0mmol/L IPTG条件下诱导6h表达量最高,表达产物大小为43ku。Western-blot结果显示,该蛋白能被环形泰勒虫阳性的牛血清所识别,具有很好的反应原性。本研究制备的多克隆抗体为后期研究微线体-棒状体蛋白与宿主细胞的相互作用奠定了基础。

关键词：环形泰勒虫微线体-棒状体蛋白原核表达 Western-blot

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牛巴贝斯虫棒状体相关蛋白1C端的克隆与表达

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中国兽医科学 2013年第6期43卷 588-593页

用生物信息学方法,对牛巴贝斯虫棒状体相关蛋白(rhoptry-associated protein-1,RAP-1)的编码基因进行分析,并与其他巴贝斯虫和泰勒虫对应序列进行比对,以筛选出抗原性、特异性良好的RAP-1基因C端区域,设计特异引物,对基因进行克隆和原... 详细信息

用生物信息学方法,对牛巴贝斯虫棒状体相关蛋白(rhoptry-associated protein-1,RAP-1)的编码基因进行分析,并与其他巴贝斯虫和泰勒虫对应序列进行比对,以筛选出抗原性、特异性良好的RAP-1基因C端区域,设计特异引物,对基因进行克隆和原核表达,并应用Western-blot对重组蛋白的反应原性与特异性进行了分析。结果表明,目的蛋白的分子质量为51ku,可溶性表达量为1.51mg/mL,只与牛巴贝斯虫阳性血清发生特异性反应,而与其他巴贝斯虫、泰勒虫和无浆体阳性血清无交叉反应,预期可作为ELISA诊断方法的候选抗原,为牛巴贝斯虫病诊断方法的建立奠定了基础。

关键词：牛巴贝斯虫棒状体相关蛋白原核表达特异性

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环形泰勒虫微线体-棒状体蛋白基因侧翼序列的hiTAIL-PCR扩增及其生物信息学分析

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中国兽医科学 2014年第1期44卷 1-6页

作者：岑双庆李有全张晓何海宁刘志杰陈泽杨吉飞关贵全牛庆丽刘爱红任巧云罗建勋殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

为扩增环形泰勒虫微线体一棒状体蛋白基因的侧翼序列，从感染环形泰勒虫的淋巴细胞系中提取RNA，反转录合成第1链cDNA。以该cDNA为模板，利用高效热不对称交互PCR法（hiTAIL-PCR）进行扩增，将目的片段连接到pGEM—TEasy载体并进行测序... 详细信息

为扩增环形泰勒虫微线体一棒状体蛋白基因的侧翼序列，从感染环形泰勒虫的淋巴细胞系中提取RNA，反转录合成第1链cDNA。以该cDNA为模板，利用高效热不对称交互PCR法（hiTAIL-PCR）进行扩增，将目的片段连接到pGEM—TEasy载体并进行测序。结果显示，获得了环形泰勒虫微线体一棒状体蛋白基因的5’端侧翼序列，该序列编码894个氨基酸。生物信息学分析结果表明，该蛋白具有信号肽，信号肽剪切部位位于第19～20个氨基酸残基之间，很可能是一种分泌蛋白；经TMHMM2．0预测，该蛋白在第875～892位氨基酸残基部位具有典型的跨膜结构；Motifscan预测的结果显示，环形泰勒虫微线体一棒状体蛋白存在2处N-糖基化位点（153NLSF、333NESM）和15处CK2蛋白激酶磷酸化位点；在该蛋白第500～650位氨基酸残基部分具有较高的抗原性，推测可能是该蛋白与其他蛋白发生相互作用的区域。

关键词：环形泰勒虫 RT—PCR 微线体一棒状体蛋白 hiTAIL—PCR 生物信息学分析

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