检索结果-内蒙古大学图书馆

华北农学报 2008年第3期23卷 1-4页

作者：周建华丛国正高闪电常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

以口蹄疫病毒株0A／58RNA为模板，反转录并扩增目的eDNA，然后与pMD18-T载体连接并转化JM109菌株，提取的重组质粒用凝胶电泳、PCR和BarnHI，HindIII双酶切法鉴定。运用同源模建得到0A／58VP2蛋白三维空间结构，并结合理化性质、亲水性... 详细信息

以口蹄疫病毒株0A／58RNA为模板，反转录并扩增目的eDNA，然后与pMD18-T载体连接并转化JM109菌株，提取的重组质粒用凝胶电泳、PCR和BarnHI，HindIII双酶切法鉴定。运用同源模建得到0A／58VP2蛋白三维空间结构，并结合理化性质、亲水性、可塑性和免疫原性进行分析，找出OA／58VP2蛋白的B细胞抗原表位。结果表明，0A／58VP2蛋白存在多个潜在的抗原表位，可能的蛋白质抗原表位区域：1～23，40～63，71～78，82～91，102～106，113～119，131～138，148～154，166～177，189～196，212～218。应用同源模建得到的OA／58VP2蛋白三维空间结构来预测其B细胞表位，为进一步研究0A／58vP2蛋白在引起易感宿主体液免疫应答方面提供了一种可视化的技术平台，并且为选择表达其他口蹄疫病毒株的VP2蛋白分子提供有参考价值的信息。

关键词：口蹄疫病毒 VP2蛋白 B细胞抗原表位

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FMDV OA／58病毒株VP3蛋白结构的模拟与分析

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华北农学报 2008年第6期23卷 28-31页

以口蹄疫病毒株OA／58 RNA为模板，反转录并扩增目的cDNA，然后与pMD18-T载体连接并转化JM109菌株，提取的重组质粒用凝胶电泳、PCR和BarnHⅠ、HindⅢ双酶切法鉴定。分析表明，口蹄疫病毒VP1、VP2、VP3和VP4在核苷酸水平上的变异率是无... 详细信息

以口蹄疫病毒株OA／58 RNA为模板，反转录并扩增目的cDNA，然后与pMD18-T载体连接并转化JM109菌株，提取的重组质粒用凝胶电泳、PCR和BarnHⅠ、HindⅢ双酶切法鉴定。分析表明，口蹄疫病毒VP1、VP2、VP3和VP4在核苷酸水平上的变异率是无差异的（P〉0．05）；而它们在氨基酸水平上的变异率差异显著（P〈0．05）。该毒株与20株源于GenBank中的VP3氨基酸序列比较发现其保守区主要位于第1～24、26～35、37～43、45～57、61～122、124～173、175～209、211～220位。运用同源模建，OA／58 VP3蛋白三维空间结构可分为A，B，C3个结构区域。保守区氨基酸残基在维持VP3蛋白的空间构象和功能方面具有重要作用。

关键词：口蹄疫病毒 VP3蛋白同源模建

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O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2008年第8期30卷 627-630页

作者：林密马军武祁淑芸冯霞张峰殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

本研究建立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法,确立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法检测O型口蹄疫血清阴阳性判定标准:抗体效价大于或等于1∶32时判为O型口蹄疫抗体阳性;1∶16～1∶32时判为O型口蹄疫抗体可疑。检测13... 详细信息

本研究建立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法,确立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法检测O型口蹄疫血清阴阳性判定标准:抗体效价大于或等于1∶32时判为O型口蹄疫抗体阳性;1∶16～1∶32时判为O型口蹄疫抗体可疑。检测131份阴性血清、口蹄疫亚洲1型阳性血清和A型阳性血清,固相竞争ELISA方法和液相阻断ELISA方法的特异性分别是95.5%,84.7%。固相竞争ELISA方法检测口蹄疫亚洲1型、口蹄疫A型阳性血清时,无交叉反应,O型口蹄疫病毒感染牛、免疫牛和感染猪血清的阳性检出率均为100%,免疫猪检出率为86.7%。

关键词：口蹄疫固相竞争ELISA 抗体效价血清

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口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体的制备

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中国兽医科学 2008年第12期38卷 1065-1069页

作者：赵建勇独军政高闪电林彤邵军军丛国正伏小平常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

以纯化的口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域重组蛋白为抗原,免疫雌性BALB/c小鼠,经3次免疫后取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,制备口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体(McAb);采用有限稀释法和间接ELIS... 详细信息

以纯化的口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域重组蛋白为抗原,免疫雌性BALB/c小鼠,经3次免疫后取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,制备口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体(McAb);采用有限稀释法和间接ELISA克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株,并用SDS-PAGE、间接ELISA以及间接免疫荧光法对制备的McAb的特异性进行鉴定。结果显示,成功获得5株能稳定传代并分泌抗β6亚基配体结合域的杂交瘤细胞株,分别命名为C4C7、E7C7、B8C9、C2D8和B7B6,其分泌的McAb为IgG2b(C2D8)和IgG2a(C4C7、E7C7、B8C9、B7B6)亚类。制备的口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域McAb可为深入研究整联蛋白αvβ6在口蹄疫病毒感染过程中的作用奠定基础。

关键词：口蹄疫病毒受体整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体

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口蹄疫病毒持续感染的黄牛分离毒株VP1和3ABC基因变异特征分析

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农业生物技术学报 2008年第5期16卷 729-735页

作者：沈小燕丛国正常惠芸刘湘涛谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室

为明确口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)持续感染与病毒基因变异潜在关系,研究FMDV持续感染分离株结构蛋白VP1和非结构蛋白3ABC基因在牛体内的动态变化。实验用O/Akesu/58毒株以104ID50/mL剂量舌面穿刺接种5头黄牛,出现... 详细信息

为明确口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)持续感染与病毒基因变异潜在关系,研究FMDV持续感染分离株结构蛋白VP1和非结构蛋白3ABC基因在牛体内的动态变化。实验用O/Akesu/58毒株以104ID50/mL剂量舌面穿刺接种5头黄牛,出现临床或亚临床症状后痊愈动物会成为可能的FMDV带毒牛。用探杯定期采集实验牛咽喉部黏性液体(O/P液),接种BHK-21细胞增殖病毒后共分离到12株毒株。RT-PCR扩增持续感染分离毒株VP1和3ABC基因,克隆测序发现,所有持续感染分离毒株的VP1基因核苷酸和氨基酸同源性都在98%以上,且没有碱基缺失或插入现象;但与O/Akesu/58的核苷酸同源性仅为85%左右,氨基酸同源性也仅为90%。持续感染分离株VP1基因有多处位点发生突变,其中有16个核苷酸位点发生一致突变,但只有两个位点造成氨基酸突变(I56→T、A210→E);在所有FMDV持续感染分离毒株之间有4个核苷酸位点和3个氨基酸位点发生了颠换。非结构蛋白3ABC基因较为稳定,仅有13个核苷酸位点和5个氨基酸位点的颠换,与宿主嗜性相关的3A基因也没有缺失。推测FMDV持续感染的形成与主要结构抗原基因VP1和宿主嗜性相关基因3ABC变异的关系不显著。

关键词：口蹄疫病毒持续感染黄牛基因变异 VP1和3ABC

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口蹄疫病毒A／AKT／58株基因组全长感染性cDNA克隆的体内拯救

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中国科学（C辑） 2008年第11期38卷 1028-1035页

作者：白兴文李平花曹轶梅李冬卢曾军郭建宏孙德惠郑海学孙普刘湘涛罗建勋刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046 广东省农业科学院广东广州540640

构建了两种口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)基因组全长cDNA克隆pTA/FMDV和pCA/FMDV,利用体外转录和体内转录方法制备感染性病毒,并对其抗原性,乳鼠毒力(LD50)和病毒生长动力学等生物学特性进行了分析.为了鉴别野毒与重... 详细信息

构建了两种口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)基因组全长cDNA克隆pTA/FMDV和pCA/FMDV,利用体外转录和体内转录方法制备感染性病毒,并对其抗原性,乳鼠毒力(LD50)和病毒生长动力学等生物学特性进行了分析.为了鉴别野毒与重组病毒,利用融合PCR技术在两种全长cDNA基因组内分别引入了几个点突变(pTA/FMDV:T1029G,pCA/FMDV:A174G,A308G,T1029G)作为遗传标记.结果表明,两种重组病毒对3日龄乳鼠均表现致病性.但是由pTA/FMDV合成的感染性体外转录本RNA的毒力较弱(10?6);而与pCT7RNAP质粒共转染的pCA/FMDV体内拯救病毒的毒力较强(10?7.5),并在BHK-21细胞上表现出与野毒相似的生长特性.这一结果表明,在FMDV的拯救过程中,以pCT7RNAP为基础的体内拯救系统相比体外转录方法更为简便、实用.该系统为利用反向遗传操作技术深入研究FMDV的分子致病机制及其准种特性等奠定了良好的基础.

关键词：口蹄疫病毒感染性cDNA克隆体内转录 A/AKT/58株

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三株O型口蹄疫病毒单克隆抗体的抗原识别位点分析

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中国兽医科学 2008年第9期38卷 747-752页

作者：宋帅林彤邵军军丛国正独军政常惠芸胡永浩中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

用抗O型口蹄疫病毒(FMDV)单克隆抗体杂交瘤细胞株(4A9、4C3、9F12)制备腹水并进行纯化,经ELISA检测,单抗4A9、4C3和9F12的腹水效价分别为1∶25600、1∶102400和1∶51200,SDS-PAGE分析显示,3株纯化单抗均以IgG重链和轻链为主,其分子质量... 详细信息

用抗O型口蹄疫病毒(FMDV)单克隆抗体杂交瘤细胞株(4A9、4C3、9F12)制备腹水并进行纯化,经ELISA检测,单抗4A9、4C3和9F12的腹水效价分别为1∶25600、1∶102400和1∶51200,SDS-PAGE分析显示,3株纯化单抗均以IgG重链和轻链为主,其分子质量分别约为45ku和25ku。单抗4A9、4C3和9F12的饱和度分别为1∶40、1∶40和1∶1000,叠加试验所得增值指数分别为0.27%、13.05%、13.34%,均小于50%。Western-blotting结果显示,3株单抗均可与O型FMDV结构蛋白VP1发生特异性反应。表明,此3株单抗均识别O型FMDV VP1蛋白上的同一个抗原位点,存在干扰现象。

关键词： O型口蹄疫病毒单克隆抗体抗原位点

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用口蹄疫病毒非结构蛋白区分注苗动物和自然感染动物研究进展

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生物技术通讯 2008年第3期19卷 448-451页

作者：毕研丽沈小燕才学鹏从国正常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的偶蹄类动物烈性传染病,疫苗接种是防治口蹄疫暴发的主要措施之一,而要控制口蹄疫流行,首先要将病毒感染动物从疫苗接种群体中区分开来。以口蹄疫病毒非结构蛋白(NSP)为抗原,检测动物体内的NSP抗体是一种很好... 详细信息

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的偶蹄类动物烈性传染病,疫苗接种是防治口蹄疫暴发的主要措施之一,而要控制口蹄疫流行,首先要将病毒感染动物从疫苗接种群体中区分开来。以口蹄疫病毒非结构蛋白(NSP)为抗原,检测动物体内的NSP抗体是一种很好的区分感染动物和疫苗免疫动物的诊断方法,许多实验室开展了相关研究,并取得了一定的成绩。

关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白鉴别诊断

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猪圆环病毒2型河北株的全基因组克隆与系统进化分析

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动物医学进展 2008年第10期29卷 1-4页

作者：王光祥郑海学刘湘涛尚佑军常艳燕靳野中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

应用PCR方法从疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的死亡仔猪组织病料中扩增出PCV-2全基因组(1767bp),将此基因片段克隆入pMD20-T载体,筛选获得重组质粒pMD-PCV2并对其进行序列测定,然后对全基因组进行同源性和遗传进化分析。结果表明,... 详细信息

应用PCR方法从疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的死亡仔猪组织病料中扩增出PCV-2全基因组(1767bp),将此基因片段克隆入pMD20-T载体,筛选获得重组质粒pMD-PCV2并对其进行序列测定,然后对全基因组进行同源性和遗传进化分析。结果表明,PCV-2分离毒株与参考株的全基因组同源性介于94%～98.4%之间,ORF1的同源性介于97.0%～98.8%,ORF2的同源性略低,介于91.9%～98.4%之间。该毒株与荷兰株、广西株和上海株等在一个进化分支上。本研究有助于监测PCV-2的疫源和进化关系,为进一步深入研究病毒基因功能奠定一定基础。

关键词：猪圆环病毒2型基因组克隆序列分析

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细胞凋亡的研究进展

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生物技术通讯 2008年第2期19卷 274-276页

细胞凋亡是存在于所有哺乳动物细胞中的保守途径,它在胚胎发育阶段的组织形成和维持细胞动态平衡中有十分重要的作用。细胞凋亡的途径主要为两种,即死亡受体信号途径和线粒体途径,它们的激活会产生不同的上游事件,但下游事件是一致的。... 详细信息

细胞凋亡是存在于所有哺乳动物细胞中的保守途径,它在胚胎发育阶段的组织形成和维持细胞动态平衡中有十分重要的作用。细胞凋亡的途径主要为两种,即死亡受体信号途径和线粒体途径,它们的激活会产生不同的上游事件,但下游事件是一致的。细胞凋亡是受多基因严格控制的过程。随着分子生物学技术的发展,对多种细胞凋亡的过程有了相当的认识,但凋亡过程的确切机制尚不完全清楚。简要阐述了与细胞凋亡相关的信号转导途径,以及参与其中的多种调节因子的作用机理。

关键词：细胞凋亡信号转导途径调节因子

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