检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病学报 2015年第5期31卷 472-474页

作者：成伟伟彭靖雯张克山刘永杰孔汉金尚佑军刘湘涛刘磊中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

羊衣原体是由专性细胞内寄生的流产嗜衣原体引起的一种人兽共患传染病,危害严重。为了解近年我国一些地区羊衣原体的流行情况,特以间接血凝试验(IHA)对采自全国8个省(区)的羊血清样本进行检测,阳性率达46.09%(342/742)。其中湖北省、安... 详细信息

羊衣原体是由专性细胞内寄生的流产嗜衣原体引起的一种人兽共患传染病,危害严重。为了解近年我国一些地区羊衣原体的流行情况,特以间接血凝试验(IHA)对采自全国8个省(区)的羊血清样本进行检测,阳性率达46.09%(342/742)。其中湖北省、安徽省、山东省、新疆省、吉林省、四川省、宁夏省和甘肃省分别为60%(12/20)、42.86%(51/119)、52.75%(48/91)、40.13%(122/304)、51.91%(68/131)、30.56%(11/36)、67.74%(21/31)和90%(9/10),显示羊衣原体在我国流行严重。与以往资料相比较,感染率在全国呈逐年增加趋势。绵羊、山羊的抗体阳性率分别为47.27%(268/576)和42.28%(74/175),表明前者感染率要高于后者。

关键词：羊衣原体间接血凝试验血清学调查分析

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羊传染性脓疱病毒血管内皮生长因子功能研究进展

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中国人兽共患病学报 2014年第9期30卷 960-964页

作者：成伟伟张克山刘永杰孔汉金尚佑军刘湘涛刘磊中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

羊传染性脓疱是由副痘病毒属的羊传染性脓疱病毒(orfv)引起的一种重要的人兽共患性传染病,orfv血管内皮生长因子(VEGF)是其重要的毒力基因之一。VEGF具有促进宿主表皮细胞增生、引起血管内皮细胞增殖和毛细血管通透性增加等功能。本文从... 详细信息

羊传染性脓疱是由副痘病毒属的羊传染性脓疱病毒(orfv)引起的一种重要的人兽共患性传染病,orfv血管内皮生长因子(VEGF)是其重要的毒力基因之一。VEGF具有促进宿主表皮细胞增生、引起血管内皮细胞增殖和毛细血管通透性增加等功能。本文从orfv编码VEGF的抗宿主免疫活性、结构、受体和配体相互作用、结合肝素和神经粘蛋白活性等方面进行了综述,以期全面阐明orfv编码的VEGF功能。

关键词：羊传染性脓疱病毒血管内皮生长因子功能

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表达EGFP报告基因口蹄疫病毒亚基因组复制子的构建

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微生物学通报 2016年第8期43卷 1746-1752页

作者：袁红李平花袁子文白兴文孙普马雪青李坤寻广谨卢曾军包慧芳陈应理曹轶梅付元芳张婧刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

【目的】构建含有EGFP报告基因的口蹄疫病毒(FMDV)亚基因组复制子系统。【方法】利用融合PCR方法,将EGFP报告基因替换O型FMDV全长c DNA克隆中的前导蛋白Lb和结构蛋白P1基因,构建含有EGFP报告基因的FMDV亚基因组复制子FMDV-EGFP。复制子... 详细信息

【目的】构建含有EGFP报告基因的口蹄疫病毒(FMDV)亚基因组复制子系统。【方法】利用融合PCR方法,将EGFP报告基因替换O型FMDV全长c DNA克隆中的前导蛋白Lb和结构蛋白P1基因,构建含有EGFP报告基因的FMDV亚基因组复制子FMDV-EGFP。复制子质粒连续转化、测序检验复制子载体的稳定性。Not I线性化的复制子FMDV-EGFP用脂质体介导法转染表达T7 RNA聚合酶的BSR/T7细胞后,不同时间段观察EGFP荧光表达情况。转染的细胞用流式、间接免疫荧光、RT-PCR和Western blot检测该复制子载体的自主复制能力和口蹄疫病毒蛋白的表达情况。【结果】复制子质粒的连续转化及测序表明报告基因可以稳定存在。FMDV-EGFP复制子转染BSR/T7细胞3 h后在荧光显微镜下能够看到绿色荧光,EGFP荧光信号随着转染时间的延长逐渐增加,并且荧光信号可持续6 d以上。转染24 h后的细胞流式分析显示转染的细胞中有6.0%发出荧光,说明构建的复制子载体能够有效表达EGFP蛋白。另外,间接免疫荧光、RT-PCR和Western blot方法也检测到该复制子RNA在BSR/T7细胞中能够进行自主复制,并且能够表达病毒的非结构蛋白。【结论】含有EGFP报告基因的FMDV亚基因组复制子的成功构建为进一步研究病毒复制、翻译机制及筛选抗病毒药物等奠定了坚实的基础。

关键词： EGFP 口蹄疫病毒复制子

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杆状病毒介导外源基因在哺乳动物细胞中表达的研究进展

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微生物学通报 2009年第12期36卷 1876-1881页

作者：田飞鹏曹轶梅卢曾军高云英刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100

杆状病毒(Baculovirus)是一种以昆虫为唯一宿主的病毒,可用做生物杀虫剂或作为表达载体在昆虫细胞中大量表达外源蛋白,制备疫苗。研究发现,在哺乳动物细胞中携带哺乳动物启动子的重组杆状病毒能启动下游外源基因的表达但病毒不能在哺乳... 详细信息

杆状病毒(Baculovirus)是一种以昆虫为唯一宿主的病毒,可用做生物杀虫剂或作为表达载体在昆虫细胞中大量表达外源蛋白,制备疫苗。研究发现,在哺乳动物细胞中携带哺乳动物启动子的重组杆状病毒能启动下游外源基因的表达但病毒不能在哺乳动物细胞中增值,对细胞毒性小,转导成功的细胞可以稳定传代并有效表达外源基因,哺乳动物细胞比昆虫细胞对蛋白质具有更好的翻译后修饰,表达出的蛋白结构更接近天然蛋白。因此,杆状病毒可作为一种新型的哺乳动物细胞基因转移载体,用于表达外源基因及作为一种基因治疗载体,具有巨大潜力,日益受到人们的关注。本文对杆状病毒作为一种表达载体在哺乳动物细胞中表达的研究进展进行了综述。

关键词：杆状病毒外源基因哺乳动物细胞

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口蹄疫病毒受体羊源整联蛋白β6亚基配体结合域的原核表达、纯化及鉴定

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华北农学报 2009年第5期24卷 55-58页

作者：薛霜独军政高闪电常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

利用原核细胞表达羊口蹄疫病毒(FMDV)受体整联蛋白β6亚基的配体结合域(LBD)片段,分离纯化目的蛋白。以含有羊整联蛋白β6亚基全长cDNA的质粒为模板,PCR扩增得到β6LBD基因片段,经酶切消化处理后与同样酶切处理的原核表达载体pPROEXTMHT... 详细信息

利用原核细胞表达羊口蹄疫病毒(FMDV)受体整联蛋白β6亚基的配体结合域(LBD)片段,分离纯化目的蛋白。以含有羊整联蛋白β6亚基全长cDNA的质粒为模板,PCR扩增得到β6LBD基因片段,经酶切消化处理后与同样酶切处理的原核表达载体pPROEXTMHTb相连,构建原核表达质粒pPRO/β6LBD,测序确认读码框正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3),IPTG诱导表达重组羊β6LBD融合蛋白。SDS-PAGE鉴定重组蛋白的表达并利用镍离子亲和树脂对其纯化,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot方法分析鉴定表达产物。成功构建了pPRO/β6LBD原核表达载体,实现了羊FMDV受体整联蛋白亚基β6LBD在大肠杆菌中的高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量(Mr)约为33 kDa,重组蛋白主要以包涵体形式存在于菌体中。用本试验室保存的抗FMDV受体猪源整联蛋白β6亚基LBD的单克隆抗体进行ELISA和Western blot检测,显示该单抗可与重组目的蛋白发生特异性反应,证明纯化后的蛋白与特异性抗体具有良好的特异性反应及抗原活性。为深入研究整联蛋白受体β6亚基在羊体内的分布及其在FMDV致病过程中的作用机制奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒受体整联蛋白β6亚基配体结合域原核表达

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口蹄疫A型灭活疫苗毒种和种子批的研究

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中国兽医科学 2006年第5期36卷 371-375页

作者：王永录张永光方玉珍蒋守田潘丽刘力宽吕建亮张维德甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为了保证制苗及攻毒用毒种的质量和稳定性,在对制苗和攻毒毒种的毒力、特异性、保存期、扩繁代次等进行研究的基础上,建立了口蹄疫A型灭活疫苗制苗和攻毒用毒种种子批。结果表明,原始毒种和基础毒种的扩繁代次均控制在5代以内,适宜的保... 详细信息

为了保证制苗及攻毒用毒种的质量和稳定性,在对制苗和攻毒毒种的毒力、特异性、保存期、扩繁代次等进行研究的基础上,建立了口蹄疫A型灭活疫苗制苗和攻毒用毒种种子批。结果表明,原始毒种和基础毒种的扩繁代次均控制在5代以内,适宜的保存方法和保存期均为加含 500 mL／L甘油的PBS后在-30℃保存1年、-70℃保存2年;用于生产抗原的工作毒种,最高扩繁代次控制在15代以内,最佳保存方法和保存期为加保护剂后在-20℃保存半年、-70℃保存1 年;用于效力检验的攻毒毒种采用原始毒种。通过制苗和攻毒用毒种种子批的建立,规范了口蹄疫疫苗生产和检验过程中的毒种管理。

关键词：口蹄疫 A型灭活疫苗毒种种子批

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O型口蹄疫病毒OA58株3C基因的克隆与真核表达

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中国兽医科学 2007年第1期37卷 20-23页

作者：刘萍丛国正杨孝朴沈小燕邵军军独军政林彤王光华易华山常惠芸谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

利用RT-PCR技术扩增获得了长度约640 bp的口蹄疫病毒目的基因,回收片段后与pMD18-T载体进行连接,测序结果表明获得了口蹄疫病毒3C基因。将重组质粒pMD18-3C与表达载体pEGFP-N1分别用BamHⅠ+XhoⅠ双酶切后,进行定向亚克隆,对重组表达质粒... 详细信息

利用RT-PCR技术扩增获得了长度约640 bp的口蹄疫病毒目的基因,回收片段后与pMD18-T载体进行连接,测序结果表明获得了口蹄疫病毒3C基因。将重组质粒pMD18-3C与表达载体pEGFP-N1分别用BamHⅠ+XhoⅠ双酶切后,进行定向亚克隆,对重组表达质粒pEGFP-3C进行PCR、酶切鉴定及DNA测序,结果表明重组表达质粒所含的3C基因读码框正确。用pEGFP-3C转染BHK-21细胞,荧光显示目的基因EGFP发出绿色荧光;对3C转录的mRNA进行RT-PCR鉴定,证实3C基因在BHK-21细胞中得到了表达。

关键词：口蹄疫病毒 3C基因真核表迭

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猪繁殖与呼吸综合征病毒重组质粒pEGFP-NSP9的构建与表达

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中国兽医科学 2012年第8期42卷 843-847页

作者：吴锦艳田宏陈妍尚佑军刘湘涛吴润甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

为验证siRNAs对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的抑制效果,构建了猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9基因与增强型绿色荧光蛋白基因GFP的融合表达质粒,并在Marc145细胞中进行了表达。通过RT-PCR方法扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9基因,将其克隆... 详细信息

为验证siRNAs对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的抑制效果,构建了猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9基因与增强型绿色荧光蛋白基因GFP的融合表达质粒,并在Marc145细胞中进行了表达。通过RT-PCR方法扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9基因,将其克隆入表达载体pEGFP-N1,并进行双酶切、PCR及测序鉴定。将阳性重组质粒转染Marc145细胞,检测绿色荧光蛋白的表达和NSP9基因转录水平。结果显示,经双酶切及PCR鉴定,目的基因的大小与预期相符。荧光显微镜和流式细胞仪均检测到细胞内绿色荧光蛋白的表达,荧光定量PCR检测到细胞内有NSP9基因的转录。本研究成功构建的猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9基因GFP融合表达质粒,为在细胞水平快速筛选有效的siRNAs提供了工具。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP9基因绿色荧光蛋白融合表达

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Asia 1型口蹄疫病毒前导蛋白(L^(pro))亚细胞定位

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中国兽医学报 2011年第5期31卷 687-691页

作者：刘永杰张克山尚佑军杨顺利卢国栋刘湘涛吴润甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为研究Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)前导蛋白(Lpro)亚细胞定位,利用RT-PCR方法获得L基因,将其定向克隆入pEGFP-N1真核表达载体,经PCR扩增、酶切鉴定及序列测定分析,将鉴定为阳性重组表达质粒命名为pEGFP-L。利用脂质体介导法将pEGFP-L转染B... 详细信息

为研究Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)前导蛋白(Lpro)亚细胞定位,利用RT-PCR方法获得L基因,将其定向克隆入pEGFP-N1真核表达载体,经PCR扩增、酶切鉴定及序列测定分析,将鉴定为阳性重组表达质粒命名为pEGFP-L。利用脂质体介导法将pEGFP-L转染BHK-21细胞,用荧光显微镜观察和Western blotting方法检测目的基因的表达,经碘化丙啶(PI)染色后在激光共聚焦显微镜下观察Lpro的亚细胞定位。结果表明,成功构建重组表达质粒pEGFP-L;FMDV L基因在BHK-21细胞中得到表达;Western blotting证实表达的Lpro具有反应活性;激光共聚焦显微镜观察发现Lpro在BHK-21细胞中呈弥散性分布。

关键词： Asia1型口蹄疫病毒前导蛋白亚细胞定位

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A型塞内卡病毒激活炎症因子表达及诱导细胞焦亡

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中国兽医科学 2022年第5期52卷 586-594页

作者：李媛媛马旭升 Mohiuddin 郑海学刘湘涛马永华甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业农村部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

初步探索A型塞内卡病毒(SVA)感染3D4/21细胞后引起细胞因子的变化,以及诱导细胞焦亡的分子机制。用SVA感染3D4/21细胞,不同时间点分别检测IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-12、GM-CSF、IL-10、IFN-γ、CXCL10细胞因子mRNA的表达水平和相关炎... 详细信息

初步探索A型塞内卡病毒(SVA)感染3D4/21细胞后引起细胞因子的变化,以及诱导细胞焦亡的分子机制。用SVA感染3D4/21细胞,不同时间点分别检测IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-12、GM-CSF、IL-10、IFN-γ、CXCL10细胞因子mRNA的表达水平和相关炎症因子分泌水平;采用CCK-8检测细胞活力;用乳酸脱氢酶释放试验检测细胞膜的损伤程度;用Western-blot检测目的基因在蛋白水平的表达程度。结果显示:SVA感染细胞后,IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-12、GM-CSF、IL-10、IFN-γ、CXCL10细胞因子mRNA表达水平均升高,与转录水平相似,SVA能够诱导IL-1β、IL-6、TNF-α以及IL-12分泌水平上调;SVA感染3D4/21细胞后,焦亡相关基因在mRNA水平表达增加,焦亡相关蛋白GSDMD、IL-1β以及Caspase-1被激活;SVA感染细胞后,导致细胞活力下降,细胞膜完整性丧失;转染sh-NLRP3或加入NLRP3抑制剂MCC950,Caspase-1抑制剂VX765,然后感染SVA,发现焦亡相关活性蛋白表达降低。结论:SVA感染3D4/21细胞后引起上述细胞因子表达增加,激活Caspase-1引起的细胞焦亡,且与NLRP3炎症小体途径相关。

关键词： A型塞内卡病毒炎症反应细胞焦亡 NLRP3炎症小体

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