检索结果-内蒙古大学图书馆

华北农学报 2009年第5期24卷 7-10页

作者：常惠芸丛国正独军政邵军军林彤冯金瑞刘萍中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州730046

将口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白基因P1的完整cDNA序列插入原核表达性载体pET-28α(+)中,获得融合表达质粒pET-P1,转化***21(DE3),经IPTG诱导,SDS-PAGE结果表明,pET-P1获得融合表达,Western Blot检测证实表达的融合蛋白具有免疫活性,表达产... 详细信息

将口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白基因P1的完整cDNA序列插入原核表达性载体pET-28α(+)中,获得融合表达质粒pET-P1,转化***21(DE3),经IPTG诱导,SDS-PAGE结果表明,pET-P1获得融合表达,Western Blot检测证实表达的融合蛋白具有免疫活性,表达产物主要以包涵体的形式存在,进一步采用纯化试剂盒纯化P1蛋白做为诊断抗原。

关键词： C型口蹄疫病毒重组蛋白P1 表达生物活性

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猪繁殖与呼吸综合征病毒兰州分离株ORF3基因的克隆及杆状病毒载体的构建

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西北农业学报 2009年第3期18卷 1-5页

作者：赵娜田宏祁燕蓉满自萍吴锦艳尚佑军何生虎刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 宁夏大学农学院宁夏银川750021

根据猪繁殖与呼吸综合症病毒已知序列(ch-1a,AY032626)设计包含完整ORF3序列的1对引物,采用RT-PCR方法扩增PRRSV甘肃Lanzhou株的ORF3基因,将其克隆到杆状病毒载体pFastBac HTA上,经酶切鉴定、PCR鉴定筛选出阳性重组转移载体pFastBac HTA... 详细信息

根据猪繁殖与呼吸综合症病毒已知序列(ch-1a,AY032626)设计包含完整ORF3序列的1对引物,采用RT-PCR方法扩增PRRSV甘肃Lanzhou株的ORF3基因,将其克隆到杆状病毒载体pFastBac HTA上,经酶切鉴定、PCR鉴定筛选出阳性重组转移载体pFastBac HTA-ORF3,并对阳性质粒进行测序及序列分析;将pFastBac HTA-ORF3转化到DH10Bac感受态细胞中,与Bacmid发生位点特异性转座作用,获得重组转座子rBacmid-ORF3。成功构建了PRRSV Lanzhou株ORF3基因的杆状病毒载体,为基因工程疫苗的研制奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF3基因克隆杆状病毒表达载体

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共表达O型口蹄疫病毒P12A＋3C基因的重组杆状病毒的构建

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华北农学报 2010年第1期25卷 1-5页

作者：田飞鹏曹轶梅卢曾军孙普高云英刘在新西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

构建共表达O型口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus,FMDV)衣壳蛋白前体P12A和蛋白酶3C的重组杆状病毒,为进一步研究FMDV空衣壳抗原和基因工程亚单位疫苗奠定基础。从质粒T-OP1中扩增出编码O型FM-DV衣壳蛋白前体的P12A基因,并将其... 详细信息

构建共表达O型口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus,FMDV)衣壳蛋白前体P12A和蛋白酶3C的重组杆状病毒,为进一步研究FMDV空衣壳抗原和基因工程亚单位疫苗奠定基础。从质粒T-OP1中扩增出编码O型FM-DV衣壳蛋白前体的P12A基因,并将其插入到杆状病毒转移载体pFastDual-3C的PH启动子之下,构建重组杆状病毒转移载体pD-P12A3C。通过在大肠杆菌内转座重组,获得重组杆粒B-P12A3C,转染Sf9细胞,获得表达O型FMDV衣壳蛋白的重组杆状病毒。重组杆状病毒经增殖并感染Sf9细胞后,通过双抗体夹心ELISA方法及间接免疫荧光来检测目的蛋白的表达。结果表明,表达产物能被O型FMDV阳性血清识别,具有一定的反应原性,表明重组杆状病毒构建成功,该研究为O型FMDV空衣壳的体外组装及基因工程亚单位疫苗的研究提供了前期材料。

关键词：口蹄疫病毒衣壳蛋白重组杆状病毒构建

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非洲猪瘟病毒CP312R蛋白T细胞表位的筛选及抗原性分析

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中国兽医科学 2022年第4期52卷 410-416页

作者：周晓丽毛箬青朱紫祥孙德惠朱昱茜王凌云齐萌郑海学塔里木大学动物科学学院新疆阿拉尔843300 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业农村部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

利用免疫表位数据库(IEDB)预测和筛选非洲猪瘟病毒(ASFV)CP312R蛋白的T细胞表位;通过流式细胞术检测表位肽促进ASFV抗原特异性脾淋巴细胞增殖情况,促进免疫细胞分泌IFN-γ水平及其对T淋巴细胞杀伤作用的影响;通过RT-qPCR技术分析表位肽... 详细信息

利用免疫表位数据库(IEDB)预测和筛选非洲猪瘟病毒(ASFV)CP312R蛋白的T细胞表位;通过流式细胞术检测表位肽促进ASFV抗原特异性脾淋巴细胞增殖情况,促进免疫细胞分泌IFN-γ水平及其对T淋巴细胞杀伤作用的影响;通过RT-qPCR技术分析表位肽对ASFV在骨髓巨噬细胞中复制的影响。结果显示,筛选出2条表位肽PP8和PP9,均可促进ASFV抗原特异性脾淋巴细胞增殖(P<0.05),促进CD8^(+)T细胞分泌IFN-γ的水平(P<0.05)。表位肽PP8不能显著促进CD8^(+)T细胞对ASFV感染的靶细胞的杀伤效率(P>0.05),而表位肽PP9能够显著促进CD8^(+)T细胞对靶细胞的杀伤效率(P<0.01)。2条表位肽均可显著抑制ASFV在骨髓巨噬细胞中的复制(P<0.01)。本研究结果为筛选ASFV保护抗原或表位提供了基础数据。

关键词：非洲猪瘟病毒 T细胞表位筛选蛋白抗原性

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非洲猪瘟病毒D1133L蛋白腺苷三磷酸酶活性的测定

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中国兽医科学 2022年第5期52卷 572-578页

作者：崔卉梅张婷杨博杨金柯赵登率袁兴国陈学辉郝雨闫文倩张克山刘霞郑海学刘湘涛甘肃农业大学生命科学技术学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业农村部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为测定非洲猪瘟病毒(ASFV)编码的D1133L蛋白的腺苷三磷酸酶活性,首先原核表达和纯化了D1133L蛋白。然后,利用Kinase-Glo Plus Luminescent Kinase Assay Platform试剂盒优化了反应条件,建立了D1133L蛋白腺苷三磷酸酶活性的测定方法,测定... 详细信息

为测定非洲猪瘟病毒(ASFV)编码的D1133L蛋白的腺苷三磷酸酶活性,首先原核表达和纯化了D1133L蛋白。然后,利用Kinase-Glo Plus Luminescent Kinase Assay Platform试剂盒优化了反应条件,建立了D1133L蛋白腺苷三磷酸酶活性的测定方法,测定了D1133L蛋白腺苷三磷酸酶活性。结果显示,在25μL的反应体系中,当蛋白浓度为1.8μmol/L,Cu^(2+)浓度为10 mmol/L,37℃反应70 min时D1133L蛋白具有最佳腺苷三磷酸酶活性,可水解体系中40.04%的腺苷三磷酸。本结果为进一步明确D1133L功能,揭示其解旋机制和靶向D1133L解旋活性的高通量化学药物筛选奠定了基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 D1133L 腺苷三磷酸酶活性测定

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羊口疮病毒疫苗株和野毒株F1L基因的比较分析

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中国动物传染病学报 2019年第4期27卷 83-87页

作者：王文莉魏楠楠徐守兴卢炳洲张大俊张克山郑海学刘湘涛甘肃省动物疫病预防控制中心兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

羊口疮(Orf)是由羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)引起的人兽共患传染病,ORFV F1L基因编码肝素结合蛋白。为比较分析ORFV疫苗株和野毒株编码的F1L基因的特征,本试验对疫苗株和野毒株的F1L基因进行PCR扩增、克隆及序列测定,并应用生物信息学... 详细信息

羊口疮(Orf)是由羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)引起的人兽共患传染病,ORFV F1L基因编码肝素结合蛋白。为比较分析ORFV疫苗株和野毒株编码的F1L基因的特征,本试验对疫苗株和野毒株的F1L基因进行PCR扩增、克隆及序列测定,并应用生物信息学相关软件及方法,对两者的F1L基因在核酸水平和氨基酸水平的变异情况及其二、三级蛋白结构变化情况进行了比较分析。结果显示,此次测定的ORFV疫苗株与野毒株F1L基因核苷酸序列相似性为95.9%,氨基酸序列相似性为94.5%。本研究结果为揭示ORFV异源宿主致弱的机制积累了资料。

关键词：羊口疮病毒疫苗株野毒株 F1L基因

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不同ELISA试剂盒检测感染猪口蹄疫病毒3ABC抗体效果比较

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动物医学进展 2019年第2期40卷 39-44页

作者：王文莉刘华南卢炳州赵俊皓徐守兴胡永浩郑海学张克山刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

为更准确研究口蹄疫病毒(FMDV)感染猪非结构蛋白抗体变化规律,选取3种不同的试剂盒,分别检测接种O型口蹄疫病毒猪FMDV非结构蛋白3ABC抗体。试验数据表明,人工感染O型口蹄疫病毒猪最早在感染后第5天检测到非结构蛋白抗体,至第7天3ABC抗... 详细信息

为更准确研究口蹄疫病毒(FMDV)感染猪非结构蛋白抗体变化规律,选取3种不同的试剂盒,分别检测接种O型口蹄疫病毒猪FMDV非结构蛋白3ABC抗体。试验数据表明,人工感染O型口蹄疫病毒猪最早在感染后第5天检测到非结构蛋白抗体,至第7天3ABC抗体全部转为阳性;3种试剂盒检测最早3ABC抗体与症状对应关系有差异,每两种商业试剂盒呈现不同程度的相关性。其中A试剂盒显示出最大的灵敏度,而B试剂盒显示最高的特异性,C试剂盒的敏感性依可疑样品的处理方式而变化,因此对3种试剂盒进行比较,发现A试剂盒更稳定,更适合于猪FMDV非结构蛋白抗体检测。

关键词：口蹄疫病毒 3ABC抗体酶联免疫吸附试验猪

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不同试剂盒检测接种FMDV的牛非结构蛋白抗体结果及分析

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畜牧与兽医 2018年第9期50卷 56-62页

作者：王文莉赵俊皓刘华南卢炳州魏南南张学刚郑海学胡永浩张克山甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/国家口蹄疫参考实验室.甘肃兰州730046

选取国内外3家不同的研发公司的甲、乙、丙3种试剂盒,利用ELISA方法分别检测了接种A型与O型口蹄疫病毒的牛口蹄疫病毒（FMDV）非结构蛋白3ABC抗体的变化规律。结果：接种A型与O型口蹄疫病毒的牛在感染后第3天发病,这与最早检测出阳性的... 详细信息

选取国内外3家不同的研发公司的甲、乙、丙3种试剂盒,利用ELISA方法分别检测了接种A型与O型口蹄疫病毒的牛口蹄疫病毒（FMDV）非结构蛋白3ABC抗体的变化规律。结果：接种A型与O型口蹄疫病毒的牛在感染后第3天发病,这与最早检测出阳性的时间相一致,至第9天3ABC抗体全部为阳性;接种A型口蹄疫病毒的牛与接种O型口蹄疫病毒的牛3ABC非结构蛋白抗体应答有差异。选取的3种试剂盒检测显示,每2种试剂盒呈现不同程度的相关性,并且甲试剂盒显示出最大的灵敏度,而乙试剂盒显示最大的特异性,丙试剂盒的敏感性依可疑样品的处理方式而变化。因此,对3种试剂盒进行比较发现甲试剂盒更稳定,更适合于检测。

关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白 3ABC抗体

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细胞凋亡信号传导通路的研究进展

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湖北农业科学 2010年第3期49卷 715-717,726页

作者：刘萍丛国正独军政邵军军林彤常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/国家口蹄疫参考实验室兰州730046 中农威特生物科技股份有限公司兰州730046

细胞凋亡是机体维持自身稳定的一种基本生理机制,是有许多基因产物及细胞因子参与的一种有序的细胞自我消亡形式。细胞凋亡发生过程的启动和进行受到精确调控,具有独特而复杂的信号系统。各种凋亡信号通过信号传导通路传至细胞内,激活... 详细信息

细胞凋亡是机体维持自身稳定的一种基本生理机制,是有许多基因产物及细胞因子参与的一种有序的细胞自我消亡形式。细胞凋亡发生过程的启动和进行受到精确调控,具有独特而复杂的信号系统。各种凋亡信号通过信号传导通路传至细胞内,激活靶分子而产生细胞效应,引发细胞凋亡。一般认为,细胞凋亡存在3条主要通路:线粒体通路、内质网通路和死亡受体通路,各通路间互相联系,共同调节细胞凋亡。

关键词：细胞凋亡信号传导死亡受体线粒体内质网

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灭活的羊口疮病毒抑制口蹄疫病毒在BHK-21细胞中的复制

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中国兽医科学 2022年第4期52卷 403-409页

作者：张大俊王国春史喜绢杨博张婷崔卉梅袁兴国赵登率陈学辉杨金柯郝雨郑海学刘湘涛张克山中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业农村部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 辽宁省现代农业生产基地建设工程中心辽宁沈阳110000

为探究灭活的羊口疮病毒(ORFV)调节宿主免疫应答后对口蹄疫病毒(FMDV)复制的调控作用,本研究通过制备、灭活、纯化ORFV,采用RT-qPCR方法评估并分析在预先使用灭活的ORFV处理的BHK-21细胞中FMDV的复制情况以及细胞因子的变化情况。研究... 详细信息

为探究灭活的羊口疮病毒(ORFV)调节宿主免疫应答后对口蹄疫病毒(FMDV)复制的调控作用,本研究通过制备、灭活、纯化ORFV,采用RT-qPCR方法评估并分析在预先使用灭活的ORFV处理的BHK-21细胞中FMDV的复制情况以及细胞因子的变化情况。研究结果显示,灭活的ORFV上调细胞因子GM-CSF、IFN-γ、IL-1α、IL-2、IL-6和IL-10的转录水平,显著抑制FMDV在BHK-21细胞中的复制。也就是说,灭活的ORFV通过上调宿主细胞因子的转录进而抑制FMDV复制。这一研究结果为灭活的ORFV作为免疫调节剂提供了依据并为其应用提供了可能性。

关键词：口疮病毒口蹄疫病毒细胞因子 BHK-21细胞

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