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副猪嗜血杆菌S-核糖基高半胱氨酸酶基因序列分析与推导蛋白三维结构的分子模拟

中国兽医学报 2011年第1期31卷 40-44页

作者：马艳平张杰陈豪泰马丽娜赵娜丁耀忠刘文倩王猛刘永生中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046 广东省农业科学院兽医研究所广东省兽医公共卫生公共实验室广东广州510640

利用PCR方法获得副猪嗜血杆菌S-核糖基高半胱氨酸酶(luxS)基因全长DNA,将PCR纯化产物与pMD18-T载体连接并转化*** DH5α菌株,重组阳性质粒测序并采用生物信息学软件对所推导的氨基酸序列进行三维结构分析。结果表明,该基因全长510bp,并... 详细信息

利用PCR方法获得副猪嗜血杆菌S-核糖基高半胱氨酸酶(luxS)基因全长DNA,将PCR纯化产物与pMD18-T载体连接并转化*** DH5α菌株,重组阳性质粒测序并采用生物信息学软件对所推导的氨基酸序列进行三维结构分析。结果表明,该基因全长510bp,并与GenBank中登录的其他5株菌株luxS基因完整参考序列进行比较,同源性均在70%以上。用ExPAsy软件包预测了推导蛋白的特性,运用Swiss-PDB viewer软件的SWISS-Model处理器,并利用同源建模的思想建立HPS-luxS的三维结构。拉马钱德兰图证明,构建的luxS蛋白的空间结构是合理的。

关键词：副猪嗜血杆菌 S-核糖基高半胱氨酸酶序列分析分子模拟

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microRNA在免疫细胞中作用的研究进展

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细胞与分子免疫学杂志 2015年第5期31卷 704-707,712页

作者：张学勇骆学农郑亚东中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

microRNA(miRNA)是一种非编码性单链小分子RNA,广泛存在于生物中,可与靶基因mRNA的3'非编码区(3'-UTR)结合,再通过形成沉默复合体而调控靶基因的表达。miRNA参与多种生物学过程,与细胞增殖、分化、器官形成以及免疫应答过程等... 详细信息

microRNA(miRNA)是一种非编码性单链小分子RNA,广泛存在于生物中,可与靶基因mRNA的3'非编码区(3'-UTR)结合,再通过形成沉默复合体而调控靶基因的表达。miRNA参与多种生物学过程,与细胞增殖、分化、器官形成以及免疫应答过程等都息息相关。miRNA在各种免疫细胞的产生、增殖、发育以及免疫应答过程中,通过调节相关靶基因的表达发挥着重要的调控作用。本文综述了主要免疫细胞miRNA功能调控研究,横向比较突出miRNA的网络调控作用,有助于多角度理解免疫平衡和发现免疫应答新靶点,为相关免疫疾病的防治提供新思路。

关键词： miRNA 免疫细胞靶基因调控综述

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抗原表位预测方法的研究进展

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中国兽医科学 2009年第10期39卷 938-940页

作者：王艳华张德林殷宏付宝权中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

概述了B细胞线性表位、B细胞构象性表位、CTL表位及Th表位等抗原表位预测方法的研究进展,并对每种表位预测方法的预测结果进行了比较,旨在为从事抗原表位研究的人员提供理论参考。

关键词： B细胞表位 T细胞表位表位预测

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甘肃合作猪白细胞抗原经典Ⅱ类分子DR基因克隆及生物信息学分析

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畜牧兽医学报 2009年第11期40卷 1662-1668页

作者：莫斯科房永祥冯海燕景志忠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

为了克隆甘肃合作猪白细胞抗原(SLA)DRA和DRB基因,分析SLA-DR基因特性和抗原多态性,首次研究了甘肃合作猪在异种移植等研究领域中的应用前景。应用RT-PCR分别扩增合作猪SLA-DRA和SLA-DRB基因并进行测序,将所获得基因序列登录GenBank(登... 详细信息

为了克隆甘肃合作猪白细胞抗原(SLA)DRA和DRB基因,分析SLA-DR基因特性和抗原多态性,首次研究了甘肃合作猪在异种移植等研究领域中的应用前景。应用RT-PCR分别扩增合作猪SLA-DRA和SLA-DRB基因并进行测序,将所获得基因序列登录GenBank(登录号分别为FJ905823和FJ9058258),再用NCBI中的BLAST和ExPASy等相关软件进行生物信息学分析。发现在猪-人异种移植中,近亲繁殖的合作猪种在与人类主要组织相容性复合体遗传基因水平相似性方面有一定优势,也可作为备选猪种对相关基因进行必要的修饰和改造。

关键词：猪白细胞抗原合作猪 RT-PCR 生物信息学

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猪带绦虫TSOL18特异性单克隆抗体的制备及其体外杀虫作用的研究

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畜牧兽医学报 2010年第2期41卷 208-213页

作者：郭爱疆吴润贾万忠刘斌闫鸿斌骆学农才学鹏甘肃农业大学动物医学院兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046

本研究目的在于制备抗猪带绦虫TSOL18单克隆抗体,并分析单抗对六钩蚴的杀伤作用。采用SephadexG-100纯化在毕赤酵母中表达的猪带绦虫六钩蚴TSOL18蛋白;纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术建立能分泌抗TSOL18单克隆抗体的细胞株;通... 详细信息

本研究目的在于制备抗猪带绦虫TSOL18单克隆抗体,并分析单抗对六钩蚴的杀伤作用。采用SephadexG-100纯化在毕赤酵母中表达的猪带绦虫六钩蚴TSOL18蛋白;纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术建立能分泌抗TSOL18单克隆抗体的细胞株;通过ELISA叠加试验进行mAb的抗原表位分析;采用间接ELISA法测定TSOL18单克隆抗体特异性及腹水效价;采用抗TSOL18单克隆抗体对激活的猪带绦虫六钩蚴进行体外六钩蚴杀伤试验,观察单抗对猪带绦虫六钩蚴活力的影响。结果成功获得12株稳定分泌抗TSOL18单克隆抗体的杂交瘤细胞株,识别2个不同抗原表位,不同抗原表位的2株单克隆抗体腹水效价分别为1×102、1×106。抗体体外六钩蚴杀伤试验结果证明,在有补体的情况下,多抗和单抗作用6 d后,六钩蚴结构模糊,边缘不清晰。表明单抗对六钩蚴有一定的杀伤作用。

关键词：猪带绦虫六钩蚴 TSOL18 单抗体外杀六钩蚴作用

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应用三磷酸核苷水解酶基因检测弓形虫方法的建立

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中国兽医科学 2010年第12期40卷 1223-1227页

作者：王萌王艳华蔡志杰付宝权李文卉张德林中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

用Primer Explorer V4软件针对弓形虫三磷酸核苷水解酶(NTPase)基因设计了6条环介导等温扩增(LAMP)特异性引物,建立弓形虫LAMP反应体系,并进行特异性和敏感性试验。结果显示,用该反应体系30 min即可检测出弓形虫NTPase基因,产生瀑布状... 详细信息

用Primer Explorer V4软件针对弓形虫三磷酸核苷水解酶(NTPase)基因设计了6条环介导等温扩增(LAMP)特异性引物,建立弓形虫LAMP反应体系,并进行特异性和敏感性试验。结果显示,用该反应体系30 min即可检测出弓形虫NTPase基因,产生瀑布状的特异性条带,检测极限为20 copies,敏感性比PCR高10倍。与犬新孢子虫、鹦鹉热衣原体、柔嫩艾美耳球虫、吕氏泰勒虫、羊巴贝斯虫未定种和牛巴贝斯虫间无交叉反应,且重复性良好。应用此方法,可以在攻虫后第2天于试验猪血液中检测出弓形虫,比PCR方法提前2 d。表明将弓形虫NTPase基因作为环介导等温扩增检测弓形虫的目的基因,具有特异性强、敏感性高的特点,是快速诊断弓形虫病的一种新方法。

关键词：弓形虫三磷酸核苷水解酶基因环介导等温扩增

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感染弓形虫的肉鸡的临床症状及病理变化

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中国兽医科学 2014年第9期44卷 951-955页

作者：蒲元华王萌杨晓宇张德林中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

为观察鸡感染弓形虫后的临床症状及组织器官的病理特点,以弓形虫GJS株速殖子人工感染鸡,然后在不同时间剖杀,观察其组织器官病理变化;取内脏组织器官,浸泡于100mL/L中性福尔马林溶液中,运用常规HE染色观察其病理变化特点,并用免疫组织... 详细信息

为观察鸡感染弓形虫后的临床症状及组织器官的病理特点,以弓形虫GJS株速殖子人工感染鸡,然后在不同时间剖杀,观察其组织器官病理变化;取内脏组织器官,浸泡于100mL/L中性福尔马林溶液中,运用常规HE染色观察其病理变化特点,并用免疫组织化学检测组织中弓形虫速殖子。结果显示,鸡感染弓形虫后出现精神沉郁、食欲不振、形体消瘦、跛行、拉稀等临床症状。解剖发现,被感染鸡肝肿大,肺发炎,胸、腹腔液增多,心肌变性,脾肿大,肠道出血。HE染色观察发现,肺的病理变化尤为明显,出现出血、充血;肝汇管区增大,有炎性细胞浸润;脾出血、充血,出现弥漫性增生;大脑中纤维组织增生,脑细胞减少。说明鸡感染弓形虫速殖子后能产生比较明显的临床症状和病理变化。

关键词：鸡弓形虫临床症状病理变化

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弓形虫GJS株致密颗粒6基因真核表达质粒的构建及在BHK-21细胞中的表达

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中国兽医科学 2010年第4期40卷 363-367页

作者：张燕丽曹丽艳芦赟蔡志杰王艳华付宝权李文卉张德林中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

根据GenBank数据库中弓形虫RH株GRA6基因序列设计1对引物,采用PCR技术从弓形虫GJS株基因组DNA中扩增GRA6基因,导入真核表达载体pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO,转化大肠杆菌DH5α,经酶切、PCR及测序鉴定,将重组质粒转染BHK-21细胞。GFP标签证明质... 详细信息

根据GenBank数据库中弓形虫RH株GRA6基因序列设计1对引物,采用PCR技术从弓形虫GJS株基因组DNA中扩增GRA6基因,导入真核表达载体pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO,转化大肠杆菌DH5α,经酶切、PCR及测序鉴定,将重组质粒转染BHK-21细胞。GFP标签证明质粒DNA成功转染到细胞中并得以表达,通过Western-blot分析,细胞裂解液中有一条约52 ku的条带,可被山羊抗弓形虫超免疫血清识别,大小与预测值相符。表明真核表达质粒pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO-GRA6中的GRA6基因在BHK-21细胞中获得表达且表达产物具有抗原性。

关键词：刚地弓形虫致密颗粒6 基因克隆真核表达

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带科绦虫线粒体基因组全序列研究进展

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中国人兽共患病学报 2010年第6期26卷 596-600页

作者：贾万忠闫鸿斌郭爱疆史万贵詹芳付宝权中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046 甘肃省动物疫病控制中心兰州730046

带科绦虫(Taeniidae)幼虫引起的绦虫蚴病(Larval cestodiasis/infections with larva of cestodes)如棘球蚴病、囊尾蚴病等是一类重要的人兽共患寄生虫病,在我国和世界各地普遍流行,危害严重。本文将对带科绦虫线粒体基因组序列分析的... 详细信息

带科绦虫(Taeniidae)幼虫引起的绦虫蚴病(Larval cestodiasis/infections with larva of cestodes)如棘球蚴病、囊尾蚴病等是一类重要的人兽共患寄生虫病,在我国和世界各地普遍流行,危害严重。本文将对带科绦虫线粒体基因组序列分析的研究进展、应用和今后发展方向做一简要综述。迄今,[第一段]

关键词：带科绦虫基因组全序列线粒体 infections 人兽共患寄生虫病基因组序列分析棘球蚴病囊尾蚴病

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旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制因子基因的克隆与原核表达

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中国兽医科学 2010年第5期40卷 470-474页

作者：盖文燕李文卉王鸿盛姚菊霞曲自刚王艳华张德林付宝权中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

根据GenBank中旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制因子(Tsserpin)基因序列设计1对引物,从旋毛虫肌幼虫提取总RNA,应用RT-PCR扩增获得目的基因片段,进行限制性酶切后连接到表达质粒载体pET30a,构建重组表达质粒pET30a-Tsserpin,转化大肠杆菌DH5α,... 详细信息

根据GenBank中旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制因子(Tsserpin)基因序列设计1对引物,从旋毛虫肌幼虫提取总RNA,应用RT-PCR扩增获得目的基因片段,进行限制性酶切后连接到表达质粒载体pET30a,构建重组表达质粒pET30a-Tsserpin,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,经PCR、限制性酶切分析及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG进行了诱导表达。SDS-PAGE分析表达产物,表达产物纯化后用Western-blotting鉴定Tsserpin重组蛋白的抗原性。PCR与酶切鉴定结果显示,构建的重组表达质粒pET30a-Tsserpin与预期结果一致。测序结果表明,插入片段为1122bp,编码373个氨基酸,与GenBank中旋毛虫Tsserpin基因的相似性为99%。含有pET30a-Tsserpin重组表达质粒的大肠杆菌BL21(DE3)诱导后得到了高效表达,SDS-PAGE分析结果显示,表达产物的分子质量约为48.5ku,而且主要以包涵体形式存在。Western-blot分析结果表明Tsserpin重组蛋白可以被旋毛虫感染猪阳性血清特异性识别,提示其具有良好的抗原性,可以作为猪旋毛虫病免疫诊断的候选抗原。

关键词：旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制因子重组蛋白抗原性

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