检索结果-内蒙古大学图书馆

浙江农业学报 2010年第2期22卷 145-149页

作者：王光华周继章蔺国珍郑福英曹小安邱昌庆中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

用PCR技术,从一株田间分离的产气荚膜梭菌基因组中扩增出了1194bp的α毒素基因,经限制性核酸内切酶EcoRⅠ和NcoⅠ双酶切处理后将其连接在经同样内切酶处理的载体pET-28a(+)中的相应位点上,最后转化至受体菌BL21(DE3)中。经PCR、双酶切... 详细信息

用PCR技术,从一株田间分离的产气荚膜梭菌基因组中扩增出了1194bp的α毒素基因,经限制性核酸内切酶EcoRⅠ和NcoⅠ双酶切处理后将其连接在经同样内切酶处理的载体pET-28a(+)中的相应位点上,最后转化至受体菌BL21(DE3)中。经PCR、双酶切和核苷酸序列分析,证明重组质粒pET-28a-CPA含有产气荚膜梭菌α毒素基因,再将其转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,目的基因获得了良好表达。以羊抗α毒素多克隆血清进行Western blot分析,抗血清可与该融合蛋白发生特异性反应,表明目的蛋白具有较好的免疫原性。

关键词：产气荚膜梭菌 α毒素基因基因克隆核苷酸序列

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猪繁殖与呼吸综合症诊断技术的研究进展

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中国农学通报 2010年第9期26卷 13-17页

作者：徐娜李宝玉柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所传染病室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

猪繁殖与呼吸综合征是目前养猪业中一种严重的病毒性传染病,分布广泛且对养猪业造成巨大损失。就该病的临床症状,病理变化,血清学,分子生物学等诊断与检测方法的研究进展进行综述。

关键词：猪生殖和呼吸系统综合征病毒临床诊断病理组织学检查病毒分离血清学诊断分子生物学诊断

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腺病毒在动物口蹄疫防治中的研究进展

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江苏农业科学 2010年第2期38卷 240-241页

作者：王猛刘永生张杰中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046

由于腺病毒载体转导目的基因具有高效率、低致病性、高滴度以及在体内不整合到动物宿主细胞染色体等优点,已被认为是最有效的转基因载体之一,成为重组疫苗和基因治疗研究的热点。本文就腺病毒载体的生物学特性、研究进展及在口蹄疫防治... 详细信息

由于腺病毒载体转导目的基因具有高效率、低致病性、高滴度以及在体内不整合到动物宿主细胞染色体等优点,已被认为是最有效的转基因载体之一,成为重组疫苗和基因治疗研究的热点。本文就腺病毒载体的生物学特性、研究进展及在口蹄疫防治中发挥的重要作用进行综述。

关键词：腺病毒载体重组疫苗 shRNA 干扰素口蹄疫

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细菌密度感应信号AI-2及其与生物被膜形成的关系

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畜牧与兽医 2010年第3期42卷 99-101页

作者：马艳平陈豪泰张杰刘永生中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046

密度感应(quorum sensing,QS)是广泛存在于革兰阴性菌和革兰阳性菌的一种密度依赖的基因表达调控机制。自体诱导物(AI-2)通过信号分子的浓度变化直接或间接调控细菌目的基因的表达,细菌毒力因子的调控、生物膜结构的稳定、细菌的抗药性... 详细信息

密度感应(quorum sensing,QS)是广泛存在于革兰阴性菌和革兰阳性菌的一种密度依赖的基因表达调控机制。自体诱导物(AI-2)通过信号分子的浓度变化直接或间接调控细菌目的基因的表达,细菌毒力因子的调控、生物膜结构的稳定、细菌的抗药性、生物发光效应等都受其影响,本文主要阐述了AI-2的作用机理及其与生物被膜形成的关系。

关键词：密度感应信号AI-2 作用机理生物被膜形成

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牛朊蛋白在COS-7细胞中的表达

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江苏农业学报 2010年第4期26卷 755-759页

作者：丁耀忠张杰刘永生陈豪泰马丽娜马艳平杨生海王猛刘文倩殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046

为研究重组蛋白pCI-PrP27-30在COS-7细胞中的表达,用pCI-PrP27-30重组表达载体转染COS-7细胞后,经不同浓度的G418筛选后获得稳定的细胞系,然后用间接免疫荧光、间接ELISA和Western blot技术检测目的蛋白的表达。结果表明目的蛋白在COS-... 详细信息

为研究重组蛋白pCI-PrP27-30在COS-7细胞中的表达,用pCI-PrP27-30重组表达载体转染COS-7细胞后,经不同浓度的G418筛选后获得稳定的细胞系,然后用间接免疫荧光、间接ELISA和Western blot技术检测目的蛋白的表达。结果表明目的蛋白在COS-7细胞中成功表达。

关键词：牛朊蛋白 COS-7细胞间接免疫荧光检测技术

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细胞传感器检测技术研究进展

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安徽农业科学 2010年第33期38卷 18673-18674,18677页

作者：杨双马军武中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046

细胞传感器以细胞作为敏感元件来研究信号识别、传导和指示的过程,可以用于细胞的信息功能及目的物质的检测,具有快速、敏感和特异的特点,已被广泛用于食品安全、农药残留、环境污染、病原微生物及生物安全检测等方面。笔者主要介绍了... 详细信息

细胞传感器以细胞作为敏感元件来研究信号识别、传导和指示的过程,可以用于细胞的信息功能及目的物质的检测,具有快速、敏感和特异的特点,已被广泛用于食品安全、农药残留、环境污染、病原微生物及生物安全检测等方面。笔者主要介绍了细胞传感器在病原体和毒素检测中的最新研究进展,分别叙述了现有的各类细胞传感器的元件构成和作用原理,并展望了细胞传感器未来研究和应用方面的发展方向。

关键词：细胞传感器病原体毒素细胞受体细胞病变

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口蹄疫新型疫苗的研究进展

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江苏农业科学 2010年第3期38卷 277-279页

作者：刘文倩刘永生张杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046

口蹄疫是偶蹄动物的一种急性、热性传染病,曾多次在世界上发生过大流行,研制和生产口蹄疫疫苗是防治口蹄疫发生与流行暴发的有效措施之一。随着分子生物学、遗传学及免疫学等学科的迅猛发展,口蹄疫新型疫苗的研究也取得了较快的进展,各... 详细信息

口蹄疫是偶蹄动物的一种急性、热性传染病,曾多次在世界上发生过大流行,研制和生产口蹄疫疫苗是防治口蹄疫发生与流行暴发的有效措施之一。随着分子生物学、遗传学及免疫学等学科的迅猛发展,口蹄疫新型疫苗的研究也取得了较快的进展,各种基因工程疫苗如核酸疫苗、可饲疫苗、病毒载体疫苗、基因工程亚单位疫苗和抗原表位疫苗等不断涌现,为口蹄疫新型疫苗的研究与利用带来了新的希望。

关键词：口蹄疫新型疫苗研究进展

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猪圆环病毒2型cap基因与猪γ-干扰素基因双表达载体的构建及稳定表达

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畜牧与兽医 2010年第12期42卷 67-72页

作者：娄忠子杨彬兰喜李学瑞李志勇殷相平李宝玉柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所传染病室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046

通过PCR方法分别从含有猪圆环病毒2型(PCV-2)核衣壳蛋白(Cap)基因和猪,γ-干扰素(PoIFN-γ)基因的重组克隆载体pMD18-PCV-2Cap和pMD18-PoIFN-γ中扩增出Cap和PoIFN-γ的基因,将两基因亚克隆到真核表达载体pBudCE4.1中,构建重组真核双表... 详细信息

通过PCR方法分别从含有猪圆环病毒2型(PCV-2)核衣壳蛋白(Cap)基因和猪,γ-干扰素(PoIFN-γ)基因的重组克隆载体pMD18-PCV-2Cap和pMD18-PoIFN-γ中扩增出Cap和PoIFN-γ的基因,将两基因亚克隆到真核表达载体pBudCE4.1中,构建重组真核双表达载体pBud-IFNPCV。重组质粒转染BHK-21细胞后进行Zeocin^(TM)抗性筛选建立细胞系,阳性细胞通过间接免疫荧光(IFA)和Western blot检测cap和PoIFN-γ在BHK-21细胞中的表达。结果显示,试验中筛选出1株Zeocin^(TM)抗性阳性BHK-21细胞,cap和PoIFN-γ均在该细胞中获得稳定高效表达,这将为猪圆环病毒病的防治提供新的方法。

关键词：猪圆环病毒病 cap 干扰素基因表达载体的构建 BHK-21细胞重组真核表达载体间接免疫荧光 Cap 双表达载体基因亚克隆核衣壳蛋白质粒转染阳性细胞抗性筛选克隆载体高效表达 PCR方法 Western 细胞系

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猪γ-干扰素的克隆表达及单抗的潜在应用

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生物技术通报 2010年第1期26卷 173-179页

作者：娄忠子兰喜李建强李学瑞李志勇殷相平柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所传染病室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

以刀豆素A(ConA)刺激长白猪外周血单个核细胞(PBMC),提取的总RNA为模板,采用一步法RT-PCR扩增出包含猪γ-干扰素(PoIFN-γ)完整基因的片段。将完整的PoIFN-γ基因亚克隆到pET-32a(+)上,构建pET-IFN-γ融合表达载体,转化入Rosetta(DE3)后... 详细信息

以刀豆素A(ConA)刺激长白猪外周血单个核细胞(PBMC),提取的总RNA为模板,采用一步法RT-PCR扩增出包含猪γ-干扰素(PoIFN-γ)完整基因的片段。将完整的PoIFN-γ基因亚克隆到pET-32a(+)上,构建pET-IFN-γ融合表达载体,转化入Rosetta(DE3)后IPTG诱导表达,得到大小约为36.8kD的目的蛋白。将目的蛋白检测及纯化后免疫后BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,最终筛选出3株能稳定分泌抗猪IFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞。ELISA叠加试验显示,3株单抗针对相同或邻近的PoIFN-γ抗原表位,制备的腹水中单抗间接ELISA效价为1×104。选取单抗IF-2株进行单抗的潜在应用研究,Westernblotting分析结果显示单抗IF-2株能与融合表达蛋白产生特异性反应,与pET-32a(+)标签蛋白无反应;间接免疫荧光检测(IFA)发现,在采用腺病毒表达系统表达PoIFN-γ的HEK-293细胞中散在大量特异性荧光。

关键词：猪γ-干扰素融合表达单克隆抗体潜在应用

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应用三磷酸核苷水解酶基因检测弓形虫方法的建立

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中国兽医科学 2010年第12期40卷 1223-1227页

作者：王萌王艳华蔡志杰付宝权李文卉张德林中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

用Primer Explorer V4软件针对弓形虫三磷酸核苷水解酶(NTPase)基因设计了6条环介导等温扩增(LAMP)特异性引物,建立弓形虫LAMP反应体系,并进行特异性和敏感性试验。结果显示,用该反应体系30 min即可检测出弓形虫NTPase基因,产生瀑布状... 详细信息

用Primer Explorer V4软件针对弓形虫三磷酸核苷水解酶(NTPase)基因设计了6条环介导等温扩增(LAMP)特异性引物,建立弓形虫LAMP反应体系,并进行特异性和敏感性试验。结果显示,用该反应体系30 min即可检测出弓形虫NTPase基因,产生瀑布状的特异性条带,检测极限为20 copies,敏感性比PCR高10倍。与犬新孢子虫、鹦鹉热衣原体、柔嫩艾美耳球虫、吕氏泰勒虫、羊巴贝斯虫未定种和牛巴贝斯虫间无交叉反应,且重复性良好。应用此方法,可以在攻虫后第2天于试验猪血液中检测出弓形虫,比PCR方法提前2 d。表明将弓形虫NTPase基因作为环介导等温扩增检测弓形虫的目的基因,具有特异性强、敏感性高的特点,是快速诊断弓形虫病的一种新方法。

关键词：弓形虫三磷酸核苷水解酶基因环介导等温扩增

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