检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2013年第7期43卷 701-706页

作者：李慧霞朱学亮刘振勇窦永喜李辉骆学农才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

为建立一种方便、灵敏、有效的检测羊痘野毒感染的iELISA方法,以山羊痘病毒基因组DNA为模板,PCR扩增获得ORF95和ORF103基因的完整ORF,连接至克隆载体pMD18-T。测序正确后,将两基因片段分别与表达载体pET-30a(+)连接,构建原核表达载体pET... 详细信息

为建立一种方便、灵敏、有效的检测羊痘野毒感染的iELISA方法,以山羊痘病毒基因组DNA为模板,PCR扩增获得ORF95和ORF103基因的完整ORF,连接至克隆载体pMD18-T。测序正确后,将两基因片段分别与表达载体pET-30a(+)连接,构建原核表达载体pET-95和pET-103,转入BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析后,用纯化的两种重组蛋白进行iELISA方法研究。结果显示,ORF95和ORF103大小分别为483bp和570bp,重组菌经1mmol/L IPTG诱导5h后,分别在30ku和35ku处有高水平的融合表达,且均以包涵体形式存在。两种目的蛋白以10ng+20ng混合作为包被抗原时,该iELISA方法检测羊痘自然感染血清、弱毒疫苗免疫羊血清和阴性血清的D450nm有明显差异,且与口蹄疫病毒、小反刍兽疫病毒、羊口疮病毒无交叉反应。因此,该方法能有效排除羊痘弱毒疫苗免疫造成的干扰,可特异性检测羊痘野毒感染的血清样品。

关键词：山羊痘病毒绵羊痘病毒 ORF95基因 ORF103基因间接酶联免疫吸附试验

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旋毛虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因TsCystatin1的克隆及序列分析

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中国兽医科学 2011年第6期41卷 569-574页

作者：姚菊霞李文卉盖文燕曲自刚谢志宙王艳华张德林付宝权中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

为了研究旋毛虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂的功能,应用电子克隆的方法从GenBank EST数据库获得1个旋毛虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因(TsCystatin1)的部分cDNA序列,据此设计引物,并以旋毛虫新生幼虫总RNA为模板,进行反转录及PCR,克隆到该基因的... 详细信息

为了研究旋毛虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂的功能,应用电子克隆的方法从GenBank EST数据库获得1个旋毛虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因(TsCystatin1)的部分cDNA序列,据此设计引物,并以旋毛虫新生幼虫总RNA为模板,进行反转录及PCR,克隆到该基因的完整开放阅读框序列,利用生物信息学软件对其进行了预测分析。结果表明,TsCystatin1 cDNA序列含有一个由666个核苷酸组成的开放阅读框架,编码由221个氨基酸残基组成的多肽,蛋白分子质量理论值为24.3ku,理论等电点为4.44。TsCystatin1第1～25位氨基酸残基为信号肽序列,具有半胱氨酸蛋白酶抑制剂的保守序列QVVAG,其C末端具有3处N-糖基化位点以及4个链内二硫键所需的半胱氨酸残基。该蛋白的二级结构中α螺旋占18.6%,β折叠占23.5%,其余57.9%为转角。结构域分析表明,该蛋白具有一个半胱氨酸蛋白酶抑制剂样结构域,属于半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族2,与其他线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂的同源性较高。

关键词：旋毛虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂克隆序列分析

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布鲁菌外膜蛋白OMP10表达及其抗原性的研究

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动物医学进展 2009年第12期30卷 25-29页

作者：宫晓炜周继章中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046

设计1对特异性引物对羊布鲁菌16M总DNA进行外膜蛋白omp10的PCR扩增,得到了一个大小为330bp的目的基因片段(去掉17个氨基酸编码的信号肽),测序证实它与国外报道的羊布鲁菌omp10基因完全一致。将其克隆到表达载体PET-30a中,经酶切、PCR扩... 详细信息

设计1对特异性引物对羊布鲁菌16M总DNA进行外膜蛋白omp10的PCR扩增,得到了一个大小为330bp的目的基因片段(去掉17个氨基酸编码的信号肽),测序证实它与国外报道的羊布鲁菌omp10基因完全一致。将其克隆到表达载体PET-30a中,经酶切、PCR扩增和测序分析,表明重组表达载体构建成功。将此重组质粒转化入大肠埃希菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,该基因以包涵体的形式在大肠埃希菌中表达,经过包涵体的变性、复性和亲和层析纯化,成功获得大小为14.2ku的融合蛋白,与理论推测的蛋白分子质量一致;Westernblot和间接ELISA试验证明,纯化之后的OMP10重组蛋白可以被布鲁菌阳性血清识别。

关键词：布鲁菌 0MPIO重组蛋白抗原性

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产气荚膜梭菌青海分离株α毒素基因克隆与表达

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浙江农业学报 2010年第2期22卷 145-149页

作者：王光华周继章蔺国珍郑福英曹小安邱昌庆中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

用PCR技术,从一株田间分离的产气荚膜梭菌基因组中扩增出了1194bp的α毒素基因,经限制性核酸内切酶EcoRⅠ和NcoⅠ双酶切处理后将其连接在经同样内切酶处理的载体pET-28a(+)中的相应位点上,最后转化至受体菌BL21(DE3)中。经PCR、双酶切... 详细信息

用PCR技术,从一株田间分离的产气荚膜梭菌基因组中扩增出了1194bp的α毒素基因,经限制性核酸内切酶EcoRⅠ和NcoⅠ双酶切处理后将其连接在经同样内切酶处理的载体pET-28a(+)中的相应位点上,最后转化至受体菌BL21(DE3)中。经PCR、双酶切和核苷酸序列分析,证明重组质粒pET-28a-CPA含有产气荚膜梭菌α毒素基因,再将其转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,目的基因获得了良好表达。以羊抗α毒素多克隆血清进行Western blot分析,抗血清可与该融合蛋白发生特异性反应,表明目的蛋白具有较好的免疫原性。

关键词：产气荚膜梭菌 α毒素基因基因克隆核苷酸序列

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猪繁殖与呼吸综合症诊断技术的研究进展

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中国农学通报 2010年第9期26卷 13-17页

作者：徐娜李宝玉柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所传染病室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

猪繁殖与呼吸综合征是目前养猪业中一种严重的病毒性传染病,分布广泛且对养猪业造成巨大损失。就该病的临床症状,病理变化,血清学,分子生物学等诊断与检测方法的研究进展进行综述。

关键词：猪生殖和呼吸系统综合征病毒临床诊断病理组织学检查病毒分离血清学诊断分子生物学诊断

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β-防御素研究进展

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安徽农业科学 2009年第8期37卷 3561-3563页

作者：王猛马艳平刘永生张杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046

β-防御素在黏膜上皮细胞广泛表达,在先天免疫系统中扮演重要角色。因具有独特的抗菌机制和广谱抗细菌、抗真菌、抗病毒活性。极难产生抗药性而日益受到人们的关注。就β-防御素的分子特征、生物学活性、抗菌机理、基因重组表达,目前科... 详细信息

β-防御素在黏膜上皮细胞广泛表达,在先天免疫系统中扮演重要角色。因具有独特的抗菌机制和广谱抗细菌、抗真菌、抗病毒活性。极难产生抗药性而日益受到人们的关注。就β-防御素的分子特征、生物学活性、抗菌机理、基因重组表达,目前科研中存在的问题及其应用前景做了综述,为临床医学提供参考。

关键词： β-防御素生物学活性抗菌机理重组表达应用

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腺病毒在动物口蹄疫防治中的研究进展

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江苏农业科学 2010年第2期38卷 240-241页

作者：王猛刘永生张杰中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046

由于腺病毒载体转导目的基因具有高效率、低致病性、高滴度以及在体内不整合到动物宿主细胞染色体等优点,已被认为是最有效的转基因载体之一,成为重组疫苗和基因治疗研究的热点。本文就腺病毒载体的生物学特性、研究进展及在口蹄疫防治... 详细信息

由于腺病毒载体转导目的基因具有高效率、低致病性、高滴度以及在体内不整合到动物宿主细胞染色体等优点,已被认为是最有效的转基因载体之一,成为重组疫苗和基因治疗研究的热点。本文就腺病毒载体的生物学特性、研究进展及在口蹄疫防治中发挥的重要作用进行综述。

关键词：腺病毒载体重组疫苗 shRNA 干扰素口蹄疫

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副鸡嗜血杆菌的分离鉴定

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西南农业学报 2009年第3期22卷 834-837页

作者：马艳平张杰陈豪泰马丽娜丁耀忠杨生海刘永生中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046

副鸡嗜血杆菌(Haemophilus paragallinarum,HPG)是鸡传染性鼻炎的病原菌。近年来,北京、陕西、四川等地证明了该病的发生。为了了解该病在山东省的流行状况,从山东德州地区5个鸡场的20只疑似鸡传染性鼻炎鸡体内共分离到6株细菌,经细菌... 详细信息

副鸡嗜血杆菌(Haemophilus paragallinarum,HPG)是鸡传染性鼻炎的病原菌。近年来,北京、陕西、四川等地证明了该病的发生。为了了解该病在山东省的流行状况,从山东德州地区5个鸡场的20只疑似鸡传染性鼻炎鸡体内共分离到6株细菌,经细菌分离培养、生化试验、鸡胚接种试验和16s rDNA基因序列分析等方法鉴定为副鸡嗜血杆菌。并经玻片凝集试验、Dot-ELISA、血凝试验分型研究,证实6株分离菌株均为副猪嗜血杆菌A型。从而为以后鸡传染性鼻炎的免疫治疗提供理论依据。

关键词：副鸡嗜血杆菌分离鉴定 16s rDNA 鸡胚接种试验血清分型

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细菌密度感应信号AI-2及其与生物被膜形成的关系

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畜牧与兽医 2010年第3期42卷 99-101页

作者：马艳平陈豪泰张杰刘永生中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046

密度感应(quorum sensing,QS)是广泛存在于革兰阴性菌和革兰阳性菌的一种密度依赖的基因表达调控机制。自体诱导物(AI-2)通过信号分子的浓度变化直接或间接调控细菌目的基因的表达,细菌毒力因子的调控、生物膜结构的稳定、细菌的抗药性... 详细信息

密度感应(quorum sensing,QS)是广泛存在于革兰阴性菌和革兰阳性菌的一种密度依赖的基因表达调控机制。自体诱导物(AI-2)通过信号分子的浓度变化直接或间接调控细菌目的基因的表达,细菌毒力因子的调控、生物膜结构的稳定、细菌的抗药性、生物发光效应等都受其影响,本文主要阐述了AI-2的作用机理及其与生物被膜形成的关系。

关键词：密度感应信号AI-2 作用机理生物被膜形成

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牛朊蛋白在COS-7细胞中的表达

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江苏农业学报 2010年第4期26卷 755-759页

作者：丁耀忠张杰刘永生陈豪泰马丽娜马艳平杨生海王猛刘文倩殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046

为研究重组蛋白pCI-PrP27-30在COS-7细胞中的表达,用pCI-PrP27-30重组表达载体转染COS-7细胞后,经不同浓度的G418筛选后获得稳定的细胞系,然后用间接免疫荧光、间接ELISA和Western blot技术检测目的蛋白的表达。结果表明目的蛋白在COS-... 详细信息

为研究重组蛋白pCI-PrP27-30在COS-7细胞中的表达,用pCI-PrP27-30重组表达载体转染COS-7细胞后,经不同浓度的G418筛选后获得稳定的细胞系,然后用间接免疫荧光、间接ELISA和Western blot技术检测目的蛋白的表达。结果表明目的蛋白在COS-7细胞中成功表达。

关键词：牛朊蛋白 COS-7细胞间接免疫荧光检测技术

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