检索结果-内蒙古大学图书馆

中国畜牧兽医学会生物制品学分会、中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会暨第三届中国兽药大会

作者：祁光宇智晓莹任维维黄银军牟克斌刘学荣王宇蒋韬中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室，兰州 730046 中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州 730046 中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州 730046 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室，兰州 730046

：建立一种快速、简便的检测O型口蹄疫病毒(FMDV)的胶体金免疫层析法(GICA)。方法：采用柠檬酸三钠-鞣酸还原法制备胶体金颗粒，标记纯化的标准株O型口蹄疫抗体。将纯化的口蹄疫流行株O/China99抗体和羊抗豚鼠抗体分别包被在硝酸纤维素...

：建立一种快速、简便的检测O型口蹄疫病毒(FMDV)的胶体金免疫层析法(GICA)。方法：采用柠檬酸三钠-鞣酸还原法制备胶体金颗粒，标记纯化的标准株O型口蹄疫抗体。将纯化的口蹄疫流行株O/China99抗体和羊抗豚鼠抗体分别包被在硝酸纤维素膜上，作为检测带与质控带。经试验条件优化，组装成胶体金快速诊断试纸条。结果：本试验研制的口蹄疫O型试剂金具有良好的灵敏度，O型可检测到的3.9×10 4LD50的病毒量。同时对阳性及阴性样品进行3次重复检测结果完全相同，说明其具有较好的重复性；特异性试验证实该方法在检测口蹄疫临床症状相似病原，如猪水疱病抗原(SVD)、水泡性口炎(VS)、水泡性疹(VES)等病毒时无交叉反应；试剂金对53份阳性参考样本及78份阴性参考样本做了符合率试验，阳性样品和阴性样本的符合率分别为92.45％和100％，样品检出率为96.95％。试剂盒在4℃下可保存6个月。结论：建立的检测O型口蹄疫病毒(FMDV)胶体金免疫层析法是一种快速、灵敏、特异的FMD O型抗原检测方法，对基层现场具有广泛应用价值．

关键词：

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两种方法制备胶体金及其免疫标记的比较研究

两种方法制备胶体金及其免疫标记的比较研究

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中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会（第三届中国兽药大会学术论坛）

作者：祁光宇智晓莹任维维黄银军牟克斌刘学荣王宇蒋韬中农威特生物科技股份有限公司中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室

目的:寻找一种适合口蹄疫AsiaⅠ抗体标记的胶体金。方法:采用柠檬酸三钠和柠檬酸三钠-鞣酸法分别还原成氯金酸溶液,制备纳米胶体金,并分别对制得的胶体金粒子大小、粒径分布情况、稳定性及微观形貌进行了分析,同时进行口蹄疫抗体标记.结... 详细信息

目的:寻找一种适合口蹄疫AsiaⅠ抗体标记的胶体金。方法:采用柠檬酸三钠和柠檬酸三钠-鞣酸法分别还原成氯金酸溶液,制备纳米胶体金,并分别对制得的胶体金粒子大小、粒径分布情况、稳定性及微观形貌进行了分析,同时进行口蹄疫抗体标记.结果:柠檬酸三钠-鞣酸法制备胶体金较稳定,标记的试纸条灵敏度要高于柠檬酸三钠法。结论:采用柠檬酸三钠-鞣酸法制备纳米胶体金适合口蹄疫AsiaⅠ抗体的标记。

关键词：柠檬酸三钠柠檬酸三钠-鞣酸法胶体金免疫层析蛋白标记

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蛋白质芯片技术在动物源性食品检测中的应用研究进展

蛋白质芯片技术在动物源性食品检测中的应用研究进展

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中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会（第三届中国兽药大会学术论坛）

作者：祁光宇黄银军牟克斌刘学荣王宇任维维蒋韬中农威特生物科技股份有限公司中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室

近年来,蛋白质芯片因其具有平行性、高通量、灵敏度高、样品用量少及检测速度快等优点而引起人们的高度关注。本文对蛋白质芯片技术及在动物源性食品检测中应用研究进展进行了简要综述,并分析了蛋白质芯片检测技术中存在的问题及应用前景。

关键词：蛋白质芯片高通量动物源性食品应用研究进展

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微生物添加剂的研究进展

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中国饲料添加剂 2010年第5期 12-14页

作者：祁光宇王宇李娟中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州730046 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室／农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 山东省化工研究院济南250014

微生物添加剂作为无毒、无污染生物制品类饲料添加剂，在调节动物机体微生态平衡、预防疾病、提高饲料转化率、促进动物健康和保护生态环境等方面有着其它抗生素类添加剂不可替代的作用，而且随着对其作用机理研究的深入，应用效果的进... 详细信息

微生物添加剂作为无毒、无污染生物制品类饲料添加剂，在调节动物机体微生态平衡、预防疾病、提高饲料转化率、促进动物健康和保护生态环境等方面有着其它抗生素类添加剂不可替代的作用，而且随着对其作用机理研究的深入，应用效果的进一步凸显，应用也越来越广泛。本文对微生物添加剂的概念、种类、国内外研究和应用概况及应用前景进行了综述。

关键词：微生物添加剂概念种类应用前景

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抗病毒药物在口蹄疫防控中的研究进展

抗病毒药物在口蹄疫防控中的研究进展

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第四届南京农业大学畜牧兽医学术年会

作者：赵志荀吴国华颜新敏高凤山李健朱海霞张强中国农业科学院兰州兽医研究所家畜病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室，甘肃兰州 730046 甘肃农业大学动物医学院，甘肃兰州 730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室，甘肃兰州 730046 大连大学生物工程学院，辽宁大连 116622

近年来，口蹄疫对一些国家的畜牧业以及人类正常生活造成了严重影响。疫苗在口蹄疫的防控中发挥了重要作用。一些特异性或者非特异性抗口蹄疫病毒药物具有快速干预病程的作用，因此，这些药物与疫苗配合应用能够在疫苗免疫初期发挥早期... 详细信息

近年来，口蹄疫对一些国家的畜牧业以及人类正常生活造成了严重影响。疫苗在口蹄疫的防控中发挥了重要作用。一些特异性或者非特异性抗口蹄疫病毒药物具有快速干预病程的作用，因此，这些药物与疫苗配合应用能够在疫苗免疫初期发挥早期抗病毒的作用，弥补疫苗抗体产生前免疫保护力不足。本文主要论述了抗病毒药物在口蹄疫防控中的应用。

关键词：口蹄疫病毒抗病毒治疗疫苗免疫窗口期

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Asia1型口蹄疫病毒胶体金免疫层析检测方法的建立

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生物工程学报 2009年第5期25卷 767-772页

作者：林彤邵军军丛国正独军政高闪电常惠芸谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室兰州730046

为建立一种快速、简便、灵敏检测Asia1型口蹄疫病毒的胶体金免疫层析方法(GICA)。本研究采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗Asia1型口蹄疫病毒的单克隆抗体,将该标记物与羊抗豚鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜(Nitrocellulos... 详细信息

为建立一种快速、简便、灵敏检测Asia1型口蹄疫病毒的胶体金免疫层析方法(GICA)。本研究采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗Asia1型口蹄疫病毒的单克隆抗体,将该标记物与羊抗豚鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜(Nitrocellulose membrane)上,作为检测带和质控带。经条件优化,组装成检测Asia1型口蹄疫的诊断试纸条。用该试纸条分别对A、O、C和Asia1型口蹄疫病毒抗原以及猪水泡病病毒抗原等87份样品进行了检测,发现该试纸条不与口蹄疫病毒A、O、C型以及猪水泡病病毒抗原发生反应,特异性良好。用该试纸条对口蹄疫细胞毒(TCID50为6.25)的10倍系列稀释液进行了检测,最低可以检测到大约10?4。该试纸条与其他传统诊断方法的符合率为98.8%。初步实验确定该试纸条在4oC下可保存3个月、37oC和室温下大概可保存1周左右。该试纸条是一种快速、灵敏、特异的FMD抗原检测方法,对现场检测具有一定实用价值。

关键词： Asia1型FMDV 单克隆抗体胶体金免疫层析法

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口蹄疫病毒泛亚型O／CHINA／99株全长cDNA分子克隆构建和感染性鉴定

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病毒学报 2009年第1期25卷 58-62页

作者：吕建亮张永光王永录潘丽刘力宽方玉珍蒋守田张维德中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

设计并合成了O型口蹄疫泛亚型代表毒株O/CHINA/99基因组9条引物,利用RT-PCR扩增各基因片段,酶切后连到pOK-12载体上,经酶切、PCR和序列测定表明,O/CHINA/99全基因组由8 200个核苷酸组成,构建的感染性cDNA与原毒株的序列同源性为99.1%;利... 详细信息

设计并合成了O型口蹄疫泛亚型代表毒株O/CHINA/99基因组9条引物,利用RT-PCR扩增各基因片段,酶切后连到pOK-12载体上,经酶切、PCR和序列测定表明,O/CHINA/99全基因组由8 200个核苷酸组成,构建的感染性cDNA与原毒株的序列同源性为99.1%;利用T7 RNA聚合酶系统进行体外转录,转录产物RNA用脂质体转入BHK-21细胞传代培养,可观察到典型的FMDV致细胞病变效应;拯救病毒接种2日龄乳鼠后,可出现典型的临床症状,并于16～48h内死亡。以上结果表明,O/CHINA/99株全长cDNA分子克隆构建成功,并从构建的全长cDNA拯救出了口蹄疫病毒。

关键词：口蹄疫病毒全长cDNA 反向遗传学

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通过耐酸性改造在昆虫细胞中组装FMDV空衣壳结构

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中国农业科学 2009年第3期42卷 1069-1077页

作者：曹轶梅卢曾军孙甲川孙普郭建宏刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点实验室

【目的】口蹄疫病毒(FMDV)对酸很敏感,当pH值低于7时,二十面体对称的衣壳结构就会裂解成12S的五聚体。而昆虫细胞培养基的正常pH值在6.3左右,很难应用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中组装天然的FMDV空衣壳结构。本研究旨在通过耐酸性改造... 详细信息

【目的】口蹄疫病毒(FMDV)对酸很敏感,当pH值低于7时,二十面体对称的衣壳结构就会裂解成12S的五聚体。而昆虫细胞培养基的正常pH值在6.3左右,很难应用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中组装天然的FMDV空衣壳结构。本研究旨在通过耐酸性改造,应用杆状病毒表达载体在昆虫细胞中组装产生AsiaⅠ型FMDV空衣壳结构。【方法】应用定点突变技术改变VP3上的H140和H143为亮氨酸,以提高空衣壳对酸的耐受性。将改造和未改造的P12A基因和3C基因插入带双启动子的杆状病毒转移载体pFastBacTM Dual中,通过在大肠杆菌内转座重组,获得重组杆粒,转染Sf9细胞,获得两株表达FMDV全衣壳蛋白的重组杆状病毒BacmP12A3C和BacP12A3C。重组杆状病毒经增殖后感染High FiveTM细胞,进行目的蛋白的表达。【结果】通过Western blotting检测表明目的基因均获得表达,且衣壳蛋白被3C蛋白酶成功地加工裂解。双抗体夹心ELISA和免疫荧光检测结果表明表达蛋白主要集中在细胞膜上,且具有很好的抗原性。通过电镜观察到P12A基因改造的重组杆状病毒在昆虫细胞内产生了直径为25～30nm的空衣壳结构,而P12A基因未改造的重组杆状病毒观察到很多直径小得多的结构。【结论】本研究首次用电子显微镜在昆虫细胞中观察到FMDV完整的空衣壳结构,为基因工程亚单位疫苗和新型诊断试剂的研发奠定了基础。

关键词： FMDV 耐酸性改造昆虫细胞组装空衣壳结构

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AsiaⅠ型FMDV全衣壳蛋白基因在昆虫细胞中的表达与免疫活性分析

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畜牧兽医学报 2009年第1期40卷 83-88页

作者：曹轶梅孙甲川卢曾军孙普郭建宏刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室兰州730046

将AsiaⅠ型FMDV全衣壳蛋白P12A基因插入到带有蜂毒溶血肽信号序列的杆状病毒转移载体pMel-Bac中,构建重组转移载体pMel-P12A。然后将含有目的基因的转移载体与线性化的杆状病毒DNA共转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒。以感染复数(MOI)10的... 详细信息

将AsiaⅠ型FMDV全衣壳蛋白P12A基因插入到带有蜂毒溶血肽信号序列的杆状病毒转移载体pMel-Bac中,构建重组转移载体pMel-P12A。然后将含有目的基因的转移载体与线性化的杆状病毒DNA共转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒。以感染复数(MOI)10的重组病毒感染Sf9细胞,72 h后收获细胞,经Western blotting、间接免疫荧光检测,结果表明P12A基因在昆虫细胞中获得表达,相对分子质量约82 ku,与预测蛋白大小一致,且能被FMDV阳性血清所识别。免疫荧光检测表明表达蛋白主要集中在细胞膜部分。夹心ELISA检测结果表明一部分表达蛋白分泌至培养基中,而有一部分蛋白仍在细胞中未能分泌。表达蛋白加入等量佐剂乳化后免疫豚鼠,间接ELISA检测结果表明豚鼠免疫后15 d即产生了特异性FMDV抗体。本研究为空衣壳的体外组装及基因工程亚单位疫苗的研究进行了有益的探索。

关键词： FMDV 衣壳蛋白基因P12A 杆状病毒 Sf9细胞表达

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细胞内转录拯救Asia1型口蹄疫病毒

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中国农业科学 2009年第2期42卷 688-693页

作者：李平花白兴文卢曾军孙普郭建宏李冬曹伟军陈应理刘湘涛殷宏刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点实验室/国家口蹄疫参考实验室

【目的】建立口蹄疫病毒(FMDV)感染性分子克隆的体内拯救技术平台,为深入研究该病毒基因组的结构与功能奠定基础。【方法】将置于T7启动子下的FMDVAsia1/JS/China/2005株全长cDNA的真核重组质粒pFMDV-A经NotI线化后和表达T7RNA聚合酶的... 详细信息

【目的】建立口蹄疫病毒(FMDV)感染性分子克隆的体内拯救技术平台,为深入研究该病毒基因组的结构与功能奠定基础。【方法】将置于T7启动子下的FMDVAsia1/JS/China/2005株全长cDNA的真核重组质粒pFMDV-A经NotI线化后和表达T7RNA聚合酶的真核质粒pcDNAT7P共转染BHK-21细胞,进行病毒体内拯救的研究。【结果】转染细胞盲传第3代48h后出现致细胞病变(CPE),第4代10h出现典型的CPE。RT-PCR、间接免疫荧光、电镜等均检测到了拯救的FMDV,而且存在分子标签,表明构建的FMDV全长cDNA分子克隆在BHK-21细胞内成功包装出FMDV。拯救毒与亲本毒对乳鼠的致病力(LD50)差异不显著,具有相似的生物学特征。共转染试验重复多次,均拯救到FMDV病毒。【结论】成功建立了基于质粒为基础的FMDV的体内拯救方法。

关键词：口蹄疫病毒感染性分子克隆病毒拯救 T7RNA聚合酶

来源：评论

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