检索结果-内蒙古大学图书馆

口蹄疫病毒3D基因真核表达载体pEGFP-3D的构建及其融合蛋白分子在BHK细胞中的定位

华北农学报 2008年第4期23卷 5-9页

作者：毕研丽沈小燕丛国正刘湘涛常惠芸才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为研究口蹄疫病毒RNA聚合酶3D基因的分子生物学特性及定位,构建了3D基因真核表达载体pEGFP-3D,观察了3D在BHK-21细胞中的瞬时表达情况。从重组质粒pMD18-T-3D扩增到3D基因,与pGEM-T easy载体连接,将鉴定为阳性的重组质粒pGEM-3D与表达载... 详细信息

为研究口蹄疫病毒RNA聚合酶3D基因的分子生物学特性及定位,构建了3D基因真核表达载体pEGFP-3D,观察了3D在BHK-21细胞中的瞬时表达情况。从重组质粒pMD18-T-3D扩增到3D基因,与pGEM-T easy载体连接,将鉴定为阳性的重组质粒pGEM-3D与表达载体pEGFP-N1分别经BamHⅠ/HindⅢ酶切,进行定向亚克隆;重组表达质粒pEGFP-3D经PCR、酶切鉴定,阳性质粒进行测序。利用脂质体介导阳性pEGFP-3D质粒转染BHK-21细胞,免疫组化检测转染细胞中3D基因表达情况和3D基因在细胞中的定位,Western blotting验证pEGFP-3D融合基因的表达。结果表明,成功构建了重组表达质粒pEGFP-3D,并在BHK-21细胞中进行了表达。免疫组化分析表明,3D蛋白主要定位于细胞核;Western blotting证实pEGFP-3D融合蛋白在80 kDa处出现阳性条带,说明表达的外源蛋白具有免疫活性。pEGFP-3D表达载体转染细胞后很快就能通过观察荧光蛋白而检测出基因的瞬时表达情况,为基因转染研究中确定转染效率、3D的表达情况及蛋白定位等提供了直观的靶标,有望应用于FMDV聚合酶分子的生物学特性研究。

关键词：口蹄疫病毒 pEGFP-3D表达载体定位免疫活性

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口蹄疫OA／58病毒株VP2蛋白结构模拟与B细胞抗原表位的分析

引用

华北农学报 2008年第3期23卷 1-4页

作者：周建华丛国正高闪电常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

以口蹄疫病毒株0A／58RNA为模板，反转录并扩增目的eDNA，然后与pMD18-T载体连接并转化JM109菌株，提取的重组质粒用凝胶电泳、PCR和BarnHI，HindIII双酶切法鉴定。运用同源模建得到0A／58VP2蛋白三维空间结构，并结合理化性质、亲水性... 详细信息

以口蹄疫病毒株0A／58RNA为模板，反转录并扩增目的eDNA，然后与pMD18-T载体连接并转化JM109菌株，提取的重组质粒用凝胶电泳、PCR和BarnHI，HindIII双酶切法鉴定。运用同源模建得到0A／58VP2蛋白三维空间结构，并结合理化性质、亲水性、可塑性和免疫原性进行分析，找出OA／58VP2蛋白的B细胞抗原表位。结果表明，0A／58VP2蛋白存在多个潜在的抗原表位，可能的蛋白质抗原表位区域：1～23，40～63，71～78，82～91，102～106，113～119，131～138，148～154，166～177，189～196，212～218。应用同源模建得到的OA／58VP2蛋白三维空间结构来预测其B细胞表位，为进一步研究0A／58vP2蛋白在引起易感宿主体液免疫应答方面提供了一种可视化的技术平台，并且为选择表达其他口蹄疫病毒株的VP2蛋白分子提供有参考价值的信息。

关键词：口蹄疫病毒 VP2蛋白 B细胞抗原表位

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FMDV OA／58病毒株VP3蛋白结构的模拟与分析

引用

华北农学报 2008年第6期23卷 28-31页

以口蹄疫病毒株OA／58 RNA为模板，反转录并扩增目的cDNA，然后与pMD18-T载体连接并转化JM109菌株，提取的重组质粒用凝胶电泳、PCR和BarnHⅠ、HindⅢ双酶切法鉴定。分析表明，口蹄疫病毒VP1、VP2、VP3和VP4在核苷酸水平上的变异率是无... 详细信息

以口蹄疫病毒株OA／58 RNA为模板，反转录并扩增目的cDNA，然后与pMD18-T载体连接并转化JM109菌株，提取的重组质粒用凝胶电泳、PCR和BarnHⅠ、HindⅢ双酶切法鉴定。分析表明，口蹄疫病毒VP1、VP2、VP3和VP4在核苷酸水平上的变异率是无差异的（P〉0．05）；而它们在氨基酸水平上的变异率差异显著（P〈0．05）。该毒株与20株源于GenBank中的VP3氨基酸序列比较发现其保守区主要位于第1～24、26～35、37～43、45～57、61～122、124～173、175～209、211～220位。运用同源模建，OA／58 VP3蛋白三维空间结构可分为A，B，C3个结构区域。保守区氨基酸残基在维持VP3蛋白的空间构象和功能方面具有重要作用。

关键词：口蹄疫病毒 VP3蛋白同源模建

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O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2008年第8期30卷 627-630页

作者：林密马军武祁淑芸冯霞张峰殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

本研究建立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法,确立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法检测O型口蹄疫血清阴阳性判定标准:抗体效价大于或等于1∶32时判为O型口蹄疫抗体阳性;1∶16～1∶32时判为O型口蹄疫抗体可疑。检测13... 详细信息

本研究建立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法,确立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法检测O型口蹄疫血清阴阳性判定标准:抗体效价大于或等于1∶32时判为O型口蹄疫抗体阳性;1∶16～1∶32时判为O型口蹄疫抗体可疑。检测131份阴性血清、口蹄疫亚洲1型阳性血清和A型阳性血清,固相竞争ELISA方法和液相阻断ELISA方法的特异性分别是95.5%,84.7%。固相竞争ELISA方法检测口蹄疫亚洲1型、口蹄疫A型阳性血清时,无交叉反应,O型口蹄疫病毒感染牛、免疫牛和感染猪血清的阳性检出率均为100%,免疫猪检出率为86.7%。

关键词：口蹄疫固相竞争ELISA 抗体效价血清

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FMDV整联蛋白受体β1亚基的克隆及其配体黏附区多抗的制备

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生物工程学报 2008年第5期24卷 874-880页

作者：杜平尚佑军马军武贺延玉孙晓林刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室兰州730046 甘肃农业大学研究测试中心兰州730070 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

采用RT-PCR技术从牛气管组织扩增出2400bp的β1基因,回收纯化连入PGEM-T载体,测序。用Expasy软件对β1基因的抗原性进行分析,选取胞外区334-861bp的配体结合区与6×His融合,在大肠杆菌中大规模诱导表达,并经Ni2＋亲和柱层析纯化。通... 详细信息

采用RT-PCR技术从牛气管组织扩增出2400bp的β1基因,回收纯化连入PGEM-T载体,测序。用Expasy软件对β1基因的抗原性进行分析,选取胞外区334-861bp的配体结合区与6×His融合,在大肠杆菌中大规模诱导表达,并经Ni2＋亲和柱层析纯化。通过SDS-PAGE鉴定后,应用纯化蛋白免疫新西兰家兔,获得效价在1：12800以上的多抗,Western blotting鉴定表明此抗体可特异性的与表达的融合蛋白作用。

关键词：口蹄疫病毒整联蛋白 β1亚基配体结合区多克隆抗体

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口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体的制备

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中国兽医科学 2008年第12期38卷 1065-1069页

作者：赵建勇独军政高闪电林彤邵军军丛国正伏小平常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

以纯化的口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域重组蛋白为抗原,免疫雌性BALB/c小鼠,经3次免疫后取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,制备口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体(McAb);采用有限稀释法和间接ELIS... 详细信息

以纯化的口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域重组蛋白为抗原,免疫雌性BALB/c小鼠,经3次免疫后取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,制备口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体(McAb);采用有限稀释法和间接ELISA克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株,并用SDS-PAGE、间接ELISA以及间接免疫荧光法对制备的McAb的特异性进行鉴定。结果显示,成功获得5株能稳定传代并分泌抗β6亚基配体结合域的杂交瘤细胞株,分别命名为C4C7、E7C7、B8C9、C2D8和B7B6,其分泌的McAb为IgG2b(C2D8)和IgG2a(C4C7、E7C7、B8C9、B7B6)亚类。制备的口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域McAb可为深入研究整联蛋白αvβ6在口蹄疫病毒感染过程中的作用奠定基础。

关键词：口蹄疫病毒受体整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体

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常用消毒剂对口蹄疫病毒的灭活试验

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中国消毒学杂志 2008年第2期25卷 120-122页

作者：颜新敏张强朱海霞李建吴国华中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学开放实验室兰州730046

目的研究几种常用消毒剂对口蹄疫病毒灭活效果。方法采用悬液乳鼠皮下接种培养法进行了实验室和现场灭活病毒效果检测。结果以含有效碘100 mg/L的碘酸和50 mg/L的聚维酮碘对悬液内口蹄疫病毒可达到完全灭活。以含有效氯750 mg/L的三氯... 详细信息

目的研究几种常用消毒剂对口蹄疫病毒灭活效果。方法采用悬液乳鼠皮下接种培养法进行了实验室和现场灭活病毒效果检测。结果以含有效碘100 mg/L的碘酸和50 mg/L的聚维酮碘对悬液内口蹄疫病毒可达到完全灭活。以含有效氯750 mg/L的三氯异氰脲酸和250 mg/L的复方二氯异氰脲酸能完全灭活悬液内口蹄疫病毒。以含有效氯溴750 mg/L的溴氯海因,可有效灭活口蹄疫病毒。以含过硫酸钾125 mg/L和过硫酸氢钾250mg/L也可完全灭活口蹄疫病毒。结论本试验所用的含碘消毒剂、含氯消毒剂以及两种过硫酸盐类消毒剂对口蹄疫病毒都有较好的杀灭效果,说明该病毒对常用消毒剂比较敏感。

关键词：口蹄疫病毒含碘消毒剂含氯消毒剂过硫酸盐灭活效果

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细胞型朊蛋白(PrP^c)研究进展

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中国人兽共患病学报 2008年第1期24卷 83-86页

作者：张杰路伟刘永生中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜龠病毒学重点开放实验室兰州730046

众所周知的疯牛病是海绵状脑病的一种,海绵状脑病还包括动物的羊痒病、鹿慢性消耗性疾病等等及人的克雅氏症、GSS综合征和库鲁症等。大量的研究表明,海绵状脑病是由哺乳动物体内一种正常存在的蛋白质——朊蛋白构象发生转变后导致的。... 详细信息

众所周知的疯牛病是海绵状脑病的一种,海绵状脑病还包括动物的羊痒病、鹿慢性消耗性疾病等等及人的克雅氏症、GSS综合征和库鲁症等。大量的研究表明,海绵状脑病是由哺乳动物体内一种正常存在的蛋白质——朊蛋白构象发生转变后导致的。关于海绵状脑病和朊蛋白的研究可谓如火如荼,每年都有大量报道。本文就海绵状脑病的特征,尤其是近年来细胞型朊蛋白(PrP^c)的研究进展作一简要综述。[第一段]

关键词：细胞型朊蛋白海绵状脑病慢性消耗性疾病 GSS综合征动物体内克雅氏症蛋白构象疯牛病

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应用活体骨髓瘤细胞制备单克隆抗体

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中国生物工程杂志 2008年第11期28卷 63-66页

作者：李永亮田美娜卢曾军杨苏珍刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所、家畜疫病病原生物学国家重点实验室、农业部畜禽病毒学重点实验室、国家口蹄疫参考实验室兰州730046 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室郑州450002

目的:用活体骨髓瘤细胞SP2/0做融合提高融合率制备单克隆抗体,并与常规方法比较效果。方法:将SP2/0细胞打到8周龄的SPF级BALB/c小鼠皮下,待实体瘤生长到直径达2～3cm时无菌解剖取实体瘤,分离出骨髓瘤细胞进行融合。同时用培养基培养SP2/... 详细信息

目的:用活体骨髓瘤细胞SP2/0做融合提高融合率制备单克隆抗体,并与常规方法比较效果。方法:将SP2/0细胞打到8周龄的SPF级BALB/c小鼠皮下,待实体瘤生长到直径达2～3cm时无菌解剖取实体瘤,分离出骨髓瘤细胞进行融合。同时用培养基培养SP2/0细胞进行融合做比较,分两组进行。比较两种方法的融合率以及两种方法制备出来的单克隆抗体的相对亲和力。结果:做了6次融合,实体瘤融合组融合率为70.4%,常规法融合组44.6%,两种方法制备单抗的相对亲和力均达到1∶100000以上。结论:利用活体实体瘤细胞进行融合能明显提高细胞融合率。

关键词：单克隆抗体(MAb)SP2/0细胞活体骨髓瘤细胞融合

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细胞内模式识别受体研究进展

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免疫学杂志 2008年第3期24卷 359-362页

作者：闫鸿斌高闪电贾万忠才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

天然免疫系统要依赖模式识别受体识别入侵的外源病原微生物,然后将其清除。哺乳动物主要具有两类微生物识别系统,一类是膜结合受体,如Toll样受体,可识别胞外微生物,然后活化细胞内信号来激发机体的免疫反应;另一类是细胞内的模式识别受... 详细信息

天然免疫系统要依赖模式识别受体识别入侵的外源病原微生物,然后将其清除。哺乳动物主要具有两类微生物识别系统,一类是膜结合受体,如Toll样受体,可识别胞外微生物,然后活化细胞内信号来激发机体的免疫反应;另一类是细胞内的模式识别受体,包括NOD样受体和具有螺旋酶结构域的抗病毒蛋白RIG-1和MDA5。这些胞浆分子可识别病原微生物、非微生物以及一些危险信号,在机体的健康与疾病中发挥着十分重要的作用。本文就细胞内天然免疫受体的种类和功能作一综述。

关键词：天然免疫胞内模式识别受体 NOD样受体 RIG-1 MDA5

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