检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术通讯 2008年第6期19卷 916-918页

作者：赵建勇高闪电独军政常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

整联蛋白是细胞表面的主要膜受体,具有介导细胞与细胞基质间的黏附及病毒吸附细胞等功能。αⅠ结构域型整联蛋白和非αⅠ结构域型整联蛋白与配体结合的方式各异。对整联蛋白-配体复合物分子结构的研究表明,整联蛋白利用其配体结合位点的... 详细信息

整联蛋白是细胞表面的主要膜受体,具有介导细胞与细胞基质间的黏附及病毒吸附细胞等功能。αⅠ结构域型整联蛋白和非αⅠ结构域型整联蛋白与配体结合的方式各异。对整联蛋白-配体复合物分子结构的研究表明,整联蛋白利用其配体结合位点的αMIDAS(依赖金属离子的吸附位点)、βMIDAS与各种类型配体结合。

关键词：整联蛋白受体配体依赖金属离子的吸附位点

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连环恒温扩增技术研究进展

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实用诊断与治疗杂志 2008年第6期22卷 448-450页

作者：毕研丽沈小燕才学鹏丛国正中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州市730046

连环恒温扩增技术是针对靶基因的6个区域设计4种特异引物,利用一种链置换DNA聚合酶在恒温65℃左右保温几十分钟而完成的核酸扩增反应,通过检测反应过程中获得的副产品焦磷酸镁所形成白色沉淀的混浊度来判定扩增结果。由于其具有快速、... 详细信息

连环恒温扩增技术是针对靶基因的6个区域设计4种特异引物,利用一种链置换DNA聚合酶在恒温65℃左右保温几十分钟而完成的核酸扩增反应,通过检测反应过程中获得的副产品焦磷酸镁所形成白色沉淀的混浊度来判定扩增结果。由于其具有快速、简便、特异性好、成本低等优点,已经广泛应用于临床诊断、食品卫生检疫及基因芯片的开发;在细菌和病毒的检测方面对临床医学有重要意义。本文就连环恒温扩增的技术原理及其应用作一综述。

关键词：连环恒温扩增技术临床诊断

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猪口蹄疫病毒受体整合素β8亚基配体结合域的原核表达和多克隆抗体制备

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甘肃农业大学学报 2008年第3期43卷 8-12页

作者：独军政高闪电常惠芸赵建勇丛国正邵军军林彤才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

病毒受体是决定病毒宿主特异性和组织嗜性的重要因素.利用原核细胞表达了猪口蹄疫病毒受体整合素β8亚基的配体结合域(LBD)片段,分离纯化目的蛋白后免疫兔,制备兔多克隆抗体.以含有猪β8亚基全长cD-NA的质粒为模板,经PCR扩增得到位于β... 详细信息

病毒受体是决定病毒宿主特异性和组织嗜性的重要因素.利用原核细胞表达了猪口蹄疫病毒受体整合素β8亚基的配体结合域(LBD)片段,分离纯化目的蛋白后免疫兔,制备兔多克隆抗体.以含有猪β8亚基全长cD-NA的质粒为模板,经PCR扩增得到位于β8成熟肽氨基端的LBD基因片段,与带有GST标签的原核表达载体pGEX 4T-1相连,构建原核表达质粒pGEX/β8LBD,测序确认读码框正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3),以IPTG诱导表达重组β8LBD融合蛋白.通过SDS-PAGE和Western blot鉴定后提取包涵体,以电泳分离纯化的重组融合蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,鉴定血清效价和特异性.结果显示,实现了重组猪β8LBD融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达,SDS-PAGE显示分子量约为46 000,主要以包涵体形式存在于菌体中.制备的兔多克隆抗体效价达1∶12 800以上,该血清可与目的蛋白发生特异性反应.这将为进一步研究猪整合素β8亚基在宿主体内的分布及其在口蹄疫病毒致病过程中的作用奠定基础.

关键词：猪口蹄疫病毒受体 β8亚基配体结合域原核表达多克隆抗体

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环介导等温基因扩增技术及其在病毒检测中的应用

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生物技术通讯 2008年第2期19卷 290-292页

作者：周广青常惠芸邵军军中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

环介导等温扩增是一门新兴的分子生物学检测技术,因其具有特异性高、敏感性高、简单、快捷及不需要昂贵的仪器设备等特点,受到了生物医学研究者的高度关注。目前,该方法已经被广泛应用于各种病原微生物检测。简要综述了环介导等温扩增... 详细信息

环介导等温扩增是一门新兴的分子生物学检测技术,因其具有特异性高、敏感性高、简单、快捷及不需要昂贵的仪器设备等特点,受到了生物医学研究者的高度关注。目前,该方法已经被广泛应用于各种病原微生物检测。简要综述了环介导等温扩增技术的原理、特点,及其在病毒检测中的应用。

关键词：环介导等温扩增技术病毒检测

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整联蛋白结构及其功能研究进展

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生物技术通讯 2008年第1期19卷 101-104页

作者：高闪电独军政周建华常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

整联蛋白是广泛存在于真核细胞表面的完整的膜受体家族,包括由至少18种不同的α亚基及8种β亚基形成的20多种αβ异二聚体。整联蛋白配体主要有胶原蛋白、纤维结合蛋白、层粘连蛋白、玻连蛋白、血小板凝血酶敏感蛋白、胞间黏附分子、细... 详细信息

整联蛋白是广泛存在于真核细胞表面的完整的膜受体家族,包括由至少18种不同的α亚基及8种β亚基形成的20多种αβ异二聚体。整联蛋白配体主要有胶原蛋白、纤维结合蛋白、层粘连蛋白、玻连蛋白、血小板凝血酶敏感蛋白、胞间黏附分子、细胞反受体、补体蛋白,以及多种细菌和病毒蛋白,在介导血管内皮细胞和肿瘤细胞的黏附、淋巴细胞运输、肿瘤生长及感染等都有重要的作用。

关键词：整联蛋白受体配体结构与功能

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口蹄疫病毒反向遗传操作和病毒空衣壳组装

口蹄疫病毒反向遗传操作和病毒空衣壳组装

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：刘在新李平花曹轶梅卢曾军白兴文孙普郭建宏刘湘涛殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/国家口蹄疫参考实验室/农业部畜禽病毒学重点实验室

构建的口蹄疫病毒(FMDV)基因组全长cDNA克隆,置于T7启动子下游,与表达T7RNA聚合酶的真核质粒共转染BHK-21细胞,能顺利稳定的拯救获得病毒。拯救的病毒和野生型口蹄疫病毒一样,对酸敏感,当pH值低于7.0时,完整的衣壳结构就会裂解成12S的... 详细信息

构建的口蹄疫病毒(FMDV)基因组全长cDNA克隆,置于T7启动子下游,与表达T7RNA聚合酶的真核质粒共转染BHK-21细胞,能顺利稳定的拯救获得病毒。拯救的病毒和野生型口蹄疫病毒一样,对酸敏感,当pH值低于7.0时,完整的衣壳结构就会裂解成12S的五聚体。昆虫细胞的正常pH值偏酸,低于7.0,很难利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中组装口蹄疫病毒空衣壳结构。采用定点突变改变了Asia1型口蹄疫病毒结构蛋白的2个氨基酸。将改造和未改造的P12A基因和3C基因分组插入带双启动子的杆状病毒转移载体中,经重组获得了两株携带目的基因的重组杆状病毒。重组杆状病毒感染High FiveTM细胞,表达了目的蛋白。电镜观察到改造的P12A基因重组杆状病毒产生了直径为25nm～30nm的类似口蹄疫病毒粒子的空衣壳结构,而未改造的P12A基因重组杆状病毒未能观察到同等大小的衣壳结构。本研究建立了稳定的口蹄疫病毒反向遗传操作技术平台,首次在昆虫细胞中组装成了FMDV完整的空衣壳结构。

关键词：口蹄疫病毒病毒拯救定点突变昆虫细胞空衣壳结构

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口蹄疫病毒受体骆驼β1亚基基因的克隆和分子特征

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浙江农业科学 2008年第1期49卷 112-116页

作者：高闪电独军政常惠芸周建华谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

首次从FMDV试验感染康复骆驼的舌皮和肺组织中克隆到了整联蛋白β1亚基的基因并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列以及蛋白结构进行了分析。骆驼整联蛋白β1亚基基因的编码区含有2 397个核苷酸,编码798个氨基酸残基,含有12个潜在的糖基... 详细信息

首次从FMDV试验感染康复骆驼的舌皮和肺组织中克隆到了整联蛋白β1亚基的基因并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列以及蛋白结构进行了分析。骆驼整联蛋白β1亚基基因的编码区含有2 397个核苷酸,编码798个氨基酸残基,含有12个潜在的糖基化位点(NXTX/NXSX)、2个表皮生长因子相似结构域和3个半胱氨酸丰富区。其信号肽由20个氨基酸组成,胞外域由708个氨基酸组成,跨膜区由29个氨基酸组成,胞浆域由41个氨基酸组成。骆驼β1基因与牛、猩猩、猫、犬、人、小鼠、鸡和猪的β1基因的核苷酸序列一致性分别为94.8%、94.8%、96.1%、94.7%、94.9%、89.9%、80.2%、95.7%,推导的氨基酸序列一致性分别为98.7%、94.8%、98.4%、97.5%、95.1%、94.1%、85.5%、98.9%。通过生物学软件分析发现β1亚基1-20位、729-757位氨基酸区段疏水性较强,分别是该亚基的信号肽和跨膜区。实验为进一步深入研究FMDV嗜性、与宿主细胞的相互作用、病毒的侵入机制等问题奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒受体骆驼整联蛋白β1基因分子特征

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口蹄疫病毒双效疫苗载体的构建及其体外表达研究

口蹄疫病毒双效疫苗载体的构建及其体外表达研究

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第二届全国人畜共患病学术研讨会

作者：杨彬兰喜殷相平李学瑞李宝玉方玉萍柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

用RT-PCR法获得了针对口蹄疫病毒（FMDV）基因组5′非编码区内包含病毒复制起始元件的基因片段ASCN及其VP1结构蛋白基因,将其分别克隆至双顺反子表达载体pIPES中,构建成了双表达质粒pASCN-IR-VP1,经酶切、PCR及DNA测序分析表明ASCN及VP... 详细信息

用RT-PCR法获得了针对口蹄疫病毒（FMDV）基因组5′非编码区内包含病毒复制起始元件的基因片段ASCN及其VP1结构蛋白基因,将其分别克隆至双顺反子表达载体pIPES中,构建成了双表达质粒pASCN-IR-VP1,经酶切、PCR及DNA测序分析表明ASCN及VP1基因已正确地插入到pIPES中,编码序列及插入方向均正确。用脂质体介导法将双效表达质粒导入BHK-21细胞后,经RT-PCR、实时荧光定量PCR检测表明双效表达质粒中的ASCN在细胞中得到了有效转录,mRNA的表达量达到了1.27×10～6个拷贝/μL;经夹心ELISA及间接免疫荧光标记等试验表明VP1结构蛋白基因在BHK-21细胞中得到了表达,具有良好的生物学活性。双效质粒pASCN-IR-VP1转染IBRS-2细胞24h后,按100TCID/0.1mL的量接FMDV OMⅢ毒,结果该质粒能够明显地抑制FMDV的复制,使病变时间推迟约16～18h,接毒48h时的抑制率达到60%以上,蚀斑减少试验也证实了该双效质粒的病毒抑制作用。研究结果表明成功构建了FMDV双效表达载体,为进一步研究双效疫苗免疫效力提供了前期基础。

关键词：口蹄疫病毒反义RNA pIRES 双效疫苗

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脉冲放电杀菌技术在动物疫苗制备中的展望

脉冲放电杀菌技术在动物疫苗制备中的展望

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会

作者：周继章中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

灭活疫苗在预防动物传染病中起着巨大的作用,但是灭活疫苗所使用的灭活剂容易在动物源性食品中残留,容易污染环境,不利于健康。高压脉冲电场能使病原体快速死亡,并且不污染环境。若将高压脉冲电场用于动物传染病疫苗的灭活,将会对疫苗... 详细信息

灭活疫苗在预防动物传染病中起着巨大的作用,但是灭活疫苗所使用的灭活剂容易在动物源性食品中残留,容易污染环境,不利于健康。高压脉冲电场能使病原体快速死亡,并且不污染环境。若将高压脉冲电场用于动物传染病疫苗的灭活,将会对疫苗的灭活带来革新,有望为人类提供绿色动物源性食品,保护人类健康。

关键词：脉冲电场病原体灭活

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口蹄疫灭活疫苗研究进展

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动物医学进展 2008年第12期29卷 43-47页

作者：张淑刚张永光中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

灭活疫苗仍然是当前口蹄疫免疫控制的主要疫苗,研制口蹄疫灭活疫苗具有重要的现实意义,其研制方法在不断丰富和完善。文章详细描述了口蹄疫灭活疫苗研制的重要步骤及其进展,包括毒株筛选,病毒生产、灭活、抗原浓缩、纯化和配苗及疫苗的... 详细信息

灭活疫苗仍然是当前口蹄疫免疫控制的主要疫苗,研制口蹄疫灭活疫苗具有重要的现实意义,其研制方法在不断丰富和完善。文章详细描述了口蹄疫灭活疫苗研制的重要步骤及其进展,包括毒株筛选,病毒生产、灭活、抗原浓缩、纯化和配苗及疫苗的质量控制。制苗毒株的选择是研制疫苗的首要问题,直接关系到疫苗的免疫效果;病毒灭活和随后的安全试验是在制备灭活FMD疫苗中最关键的步骤;抗原浓缩纯化和配苗是保证疫苗良好免疫效果的必需。最后阐述了口蹄疫灭活疫苗在口蹄疫防控中的作用。

关键词：口蹄疫灭活疫苗研制质量控制作用

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