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禽流感病毒H5N2亚A/Chicken/Gansu/2003株HA+NA基因重组腺病毒的构建

禽流感病毒H5N2亚A/Chicken/Gansu/2003株HA+NA基因重组腺病毒的...

2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：李宝玉殷相平李学瑞兰喜杨斌方玉萍柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开发实验室兰州 730046

目的：基于腺病毒可感染禽类呼吸道和肠道上皮黏膜的特性，本文构建了包含有禽流感病毒H5N2亚型HA和NA基因的重组腺病毒，为进一步研制口服禽流感活载体疫苗奠定基础。方法：通过RT-PCR方法分别扩增出AIV的HA和NA全基因片段，利用... 详细信息

目的：基于腺病毒可感染禽类呼吸道和肠道上皮黏膜的特性，本文构建了包含有禽流感病毒H5N2亚型HA和NA基因的重组腺病毒，为进一步研制口服禽流感活载体疫苗奠定基础。方法：通过RT-PCR方法分别扩增出AIV的HA和NA全基因片段，利用拼接接头将HA和NA定向串联并插入到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV之中，然后在大肠杆菌中实现腺病毒骨架载体pAdEasy-1和重组腺病毒穿梭载体的同源重组，获得插有外源基因的重组腺病毒质粒，进而通过转染HEK293细胞，得到含有目的基因HA和NA的重组腺病毒。结果:在pAdTrack-CMV载体中成功克隆了HA+NA双基因，并与腺病毒骨架载体在大肠杆菌中实现了同源重组;线性化后的重组腺病毒质粒转染HEK293细胞后可观察到典型的细胞病变和绿色荧光蛋白的表达。结论:成功获得了含有HA+NA双基因重的组腺病毒，为口服活载体疫苗的研制提供了依据。

关键词：禽流感病毒重组腺病毒同源重组

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口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白αvβ6的分子特征

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浙江农业科学 2007年第5期48卷 596-600页

作者：高闪电独军政常惠芸从国正邵军军林彤周建华王光华谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

为研究整联蛋白αvβ6在口蹄疫病毒感染中的作用,本实验从FMDV试验感染康复猪的舌皮和肺组织中克隆到了整联蛋白αv和β6亚基的基因并将新基因β6登录到GenBank中,登录号为EF432729。猪整联蛋白β6亚基基因的编码区含有2 367个核苷酸,编... 详细信息

为研究整联蛋白αvβ6在口蹄疫病毒感染中的作用,本实验从FMDV试验感染康复猪的舌皮和肺组织中克隆到了整联蛋白αv和β6亚基的基因并将新基因β6登录到GenBank中,登录号为EF432729。猪整联蛋白β6亚基基因的编码区含有2 367个核苷酸,编码788个氨基酸残基,其信号肽由26个氨基酸组成,胞外域由681个氨基酸组成,跨膜区由29个氨基酸组成,胞浆域由52个氨基酸组成。β6亚基含有9个潜在的糖基化位点,3个氨基葡聚糖结合位点,1个依赖于cGMP的蛋白激酶磷酸化位点,10个蛋白激酶C磷酸化位点,2个表皮生长因子相似结构域和2个半胱氨酸丰富区。生物学软件分析发现β6亚基和αv亚基都有头部、茎部和胞浆域组成,且二亚基形成了比较复杂的三级结构,是其发挥生物学功能的结构基础。本实验为进一步深入研究FMDV嗜性、与宿主细胞的相互作用、病毒的侵入机制等问题奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒受体猪整联蛋白αvβ6 分子特征

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口蹄疫病毒3C蛋白酶的结构及功能研究进展

口蹄疫病毒3C蛋白酶的结构及功能研究进展

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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：杨彬兰喜殷相平李学瑞李宝玉方玉萍柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州 730046

口蹄疫病毒能引起牛、羊等偶蹄动物发生高度接触性的传染病口蹄疫，该病常常影响着全球畜牧业的发展。 FMDV是小RNA病毒科口蹄疫病毒属的成员，口蹄疫病毒为单股正链RNA病毒，病毒基因组全长约8.5kb，基因组分为5'非编码区、3&#... 详细信息

口蹄疫病毒能引起牛、羊等偶蹄动物发生高度接触性的传染病口蹄疫，该病常常影响着全球畜牧业的发展。 FMDV是小RNA病毒科口蹄疫病毒属的成员，口蹄疫病毒为单股正链RNA病毒，病毒基因组全长约8.5kb，基因组分为5'非编码区、3'非编码区和一个开放阅读框(ORF)。基因组的中部是一大的开放阅读框，编码一多聚蛋白，多聚蛋白在翻译的同时，经二级裂解后，形成3种病毒结构蛋白(VP0，VP3，VP1)和8种非结构蛋白(L，2A，2B，2C，3A，3B，3C和3D)。其中3C全长639nt，编码213个氨基酸。3C蛋白酶是小RNA病毒的共同裂解酶，在多聚蛋白成熟过程中起着极为重要的作用，且在抗病毒药物打靶方面具有一定研究价值。因此，对3C蛋白酶的结构及功能研究进展进行综述很有必要。

关键词：蛋白酶口蹄疫病毒多聚蛋白

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基因芯片技术及口蹄疫病毒基因芯片研究进展

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动物医学进展 2007年第B08期28卷 37-40页

作者：王建东郭建宏杨春生刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室宁夏动物防疫站宁夏银川750001

口蹄疫的暴发与流行给世界各国的畜牧生产、社会经济和国际贸易构成严重威胁并造成巨大的经济损失,经典的血清学和PCR检测方法越来越不适应进出口动物检疫的快速、准确、高通量的要求。建立一种快速的诊断方法,使其在很短时间能够区别... 详细信息

口蹄疫的暴发与流行给世界各国的畜牧生产、社会经济和国际贸易构成严重威胁并造成巨大的经济损失,经典的血清学和PCR检测方法越来越不适应进出口动物检疫的快速、准确、高通量的要求。建立一种快速的诊断方法,使其在很短时间能够区别各血清型口蹄疫和其他水泡性疾病是非常必要的。口蹄疫病毒基因芯片包括155个寡核苷酸探针,总长35bp～45bp,设计在VP3-VP1-2A区,既有共有的病毒型别,也包含特异的血清型别。这项技术的优点是能在单一的芯片上检测多元病原体。

关键词：口蹄疫病毒基因芯片检测

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猪源冠状病毒ORF3和ORF7的克隆及特性分析

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甘肃农业大学学报 2007年第6期42卷 1-7页

作者：李建强柳纪省程杰兰喜胡永浩吴润殷相平李宝玉中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

参照GenBank中Purdue株全序列对TGEV(猪传染性胃肠炎病毒)TS株的ORF3和ORF7各设计1对特异性引物,经RT-PCR扩增分别获得了1 487 bp和516 bp大小的两个片段,与预期结果大小相符.TS株与CHV株、Puedue株、BW021898B株和KT2株的ORF3a核苷酸... 详细信息

参照GenBank中Purdue株全序列对TGEV(猪传染性胃肠炎病毒)TS株的ORF3和ORF7各设计1对特异性引物,经RT-PCR扩增分别获得了1 487 bp和516 bp大小的两个片段,与预期结果大小相符.TS株与CHV株、Puedue株、BW021898B株和KT2株的ORF3a核苷酸序列同源性分别为99.1%、93.0%、95.9%、94.4%,相应的氨基酸同源性分别为97.3%、87.8%、93.2%、91.8%,TS株与CHV株、Puedue株、BW021898B株和KT2株的ORF3b核苷酸序列同源性分别为99.5%、98.5%、97.0%、97.8%,相应氨基酸的同源性分别为98.4%、96.3%、94.3%、95.8%,而TS株与PRCVIA1894株的ORF3b核苷酸和氨基酸同源性分别为96.6%和93.9%.TS株ORF7没有发生缺失且和其他毒株有很高的同源性.结果表明:TGEV非结构蛋白高变区在ORF3a第192个碱基至终止密码子之间,TGEV和PRCV在编码ORF3b氨基酸的数量和RNA酶结合位点上有一定的差异.

关键词：猪源冠状病毒传染性胃肠炎病毒 ORF3 ORF7 克隆

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FMDV Asia/JQ株P1-2A、3C基因的表达及其产物免疫原性分析

FMDV Asia/JQ株P1-2A、3C基因的表达及其产物免疫原性分析

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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：李志勇易咏竹殷相平张志芳柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州 730046 中国农业科学院生物技术研究所北京 100081

将口蹄疫病毒(FMDV)Asia/JQ株P1-2A、3C基因克隆到家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中，构建重组家蚕杆状病毒转移质粒pVL-P12A3C。pVL-P12A3C与线性化的亲本病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕细胞，经空斑筛选后成功获得了携带有目的基因的重... 详细信息

将口蹄疫病毒(FMDV)Asia/JQ株P1-2A、3C基因克隆到家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中，构建重组家蚕杆状病毒转移质粒pVL-P12A3C。pVL-P12A3C与线性化的亲本病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕细胞，经空斑筛选后成功获得了携带有目的基因的重组病毒Bm(P12A3c)。通过免疫荧光技术及双抗体夹心ELISA法证明重组病毒能够正确表达插入的外源基因。将获得的重组病毒Bm-ORF感染家蚕5龄起幼虫，通过双抗体夹心ELISA法和电镜观察证明目的基因在蚕体中获得较高水平表达并组装成空衣壳。用蚕表达产物作抗原制备疫苗免疫牛，免疫动物均产生了特异性抗体。免疫后28天进行病毒攻击保护试验，获得了4/5的完全保护。

关键词：家蚕杆状病毒载体疫苗口蹄疫病毒免疫荧光重组病毒

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AsiaⅠ型口蹄疫病毒全长开放阅读框的表达及其产物免疫原性分析

AsiaⅠ型口蹄疫病毒全长开放阅读框的表达及其产物免疫原性分析

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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

将Asia Ⅰ型口蹄疫病毒(FMDV)全长6.9Kb的ORF克隆到家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中，构建重组家蚕杆状病毒转移质粒pVL-ORF。pVL-ORF与线性化的亲本病毒Bm-BaePAK6 DNA共转染家蚕细胞，经空斑筛选后成功获得携带有FMDV全长ORF的重组病Bm... 详细信息

将Asia Ⅰ型口蹄疫病毒(FMDV)全长6.9Kb的ORF克隆到家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中，构建重组家蚕杆状病毒转移质粒pVL-ORF。pVL-ORF与线性化的亲本病毒Bm-BaePAK6 DNA共转染家蚕细胞，经空斑筛选后成功获得携带有FMDV全长ORF的重组病Bm-ORF。通过免疫荧光技术证明重组病毒能够正确表达插入的外源基因。将获得的重组病毒Bm-ORF感染家蚕5龄起幼虫，通过双抗体夹心ELISA法和电镜观察证明目的基因在蚕体中获得较高水平表达并组装成空衣壳。用蚕表达产物作抗原制备疫苗免疫牛，免疫动物均产生了特异性抗体。免疫后21天进行病毒攻击保护试验，获得了2/4的完全保护。

关键词：家蚕杆状病毒载体免疫原性疫苗口蹄疫病毒

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口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因重组杆状病毒的构建与表达

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甘肃农业大学学报 2007年第4期42卷 5-10页

作者：马江涛卢曾军曹轶梅郭慧琛郭建宏祝秀梅刘在新杨孝朴甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州7300761 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

通过设计特异引物,扩增获得口蹄疫病毒3ABC编码区的目的基因片段,将其用SalI和NcoI双酶切后,与经同样处理的带有一段信号肽序列的穿梭质粒pMelBac-B连接,经筛选、鉴定及DNA序列分析后,获得重组质粒pMel-3ABC.将重组质粒与线性化的杆状... 详细信息

通过设计特异引物,扩增获得口蹄疫病毒3ABC编码区的目的基因片段,将其用SalI和NcoI双酶切后,与经同样处理的带有一段信号肽序列的穿梭质粒pMelBac-B连接,经筛选、鉴定及DNA序列分析后,获得重组质粒pMel-3ABC.将重组质粒与线性化的杆状病毒骨架Bac-N-Blue共转染Sf9昆虫细胞,通过噬斑筛选和PCR鉴定,获得了含有目的基因的重组杆状病毒.用重组病毒感染Sf9昆虫细胞,通过间接ELISA方法,检测细胞培养基上清液中表达的口蹄疫病毒抗原.结果表明,口蹄疫病毒基因片段3ABC正确克隆到杆状病毒载体上,重组病毒可在昆虫细胞中表达目的蛋白.

关键词：口蹄疫病毒 3ABC基因杆状病毒 Sf9细胞

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反义核酸技术及其在口蹄疫中的应用

反义核酸技术及其在口蹄疫中的应用

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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：韩晓荣柳纪省杨彬中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州 730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州 730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州 730046

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。虽然传统疫苗已被广泛应用，但是免疫效果均不理想。随着分子生物学的迅速发展，反义核酸技术已成为基因治疗的一种重要方法，在口蹄疫的防治中有良好的前景。

关键词：反义核酸口蹄疫疫苗

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三株猪2型圆环病毒甘肃分离株的全基因组序列分析

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甘肃农业大学学报 2007年第3期42卷 1-6页

作者：马友记柳纪省李志勇殷相平杨彬李发弟张利中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物科学技术学院甘肃兰州730070

根据GenBank中发表的猪2型圆环病毒（PCV2）全基因组序列,设计合成了2对引物,采用PCR方法对来自甘肃不同猪场的3份病料中的PCV2进行基因的扩增、克隆和测序,得到全基因组长度为1 768 bp的PCV2Ww株（登录号DQ322701）以及全基因组长度为1... 详细信息

根据GenBank中发表的猪2型圆环病毒（PCV2）全基因组序列,设计合成了2对引物,采用PCR方法对来自甘肃不同猪场的3份病料中的PCV2进行基因的扩增、克隆和测序,得到全基因组长度为1 768 bp的PCV2Ww株（登录号DQ322701）以及全基因组长度为1 767 bp的PCV2 LZ株和TS株（登录号DQ363860和DQ355153）.应用DNAstar软件序列分析可得,3个分离株全基因组与国内外参考毒株核苷酸序列同源性在94.8%~99.4%,3个分离株之间的核苷酸序列同源性为96.4%~99.4%;PCV2分离株与PCV1分离株核苷酸序列同源性为69.0%~70.0%;ORF1和ORF2所编码的氨基酸序列与国内外PCV2毒株比较,同源性也很高,分别为99.0%~99.4%和92.7%~98.7%.进化树分析表明,PCV2分离毒株在进化上存在地域上的相关性.

关键词：猪2型圆环病毒基因组 ORF1 ORF2 序列分析

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