检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧与兽医 2016年第4期48卷 94-97页

作者：臧金凤吴锦艳陈妍王光祥尹双辉栾志舫曹小安尚佑军张志东刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 河北农业大学动物医学院河北保定071001

利用PCR技术从布鲁氏菌S2疫苗株中扩增获得外膜蛋白(OMP)31基因,构建了原核表达质粒p GEX-6P-1-OMP31,并转入大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达,应用Western blot方法鉴定表达产物,并以纯化的OMP31重组蛋白为诊断用抗原,通过反应条件优化,初... 详细信息

利用PCR技术从布鲁氏菌S2疫苗株中扩增获得外膜蛋白(OMP)31基因,构建了原核表达质粒p GEX-6P-1-OMP31,并转入大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达,应用Western blot方法鉴定表达产物,并以纯化的OMP31重组蛋白为诊断用抗原,通过反应条件优化,初步建立布鲁氏菌抗体ELISA检测方法。以羊布鲁氏菌病普查检测血清120份为样本,与试管凝集试验进行比较分析。结果:成功构建了p GEX-6P-1-OMP31原核表达载体,并在BL21中得以诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表明,重组蛋白分子质量约为52 ku,优化试验确定抗原的最佳包被浓度为3μg/m L,血清最佳稀释度为1∶20。试管凝集试验血清样本的阳性率为83%,采用OMP31作为包被抗原的阳性检出率为79%,二者的符合率为95%。研究表明,OMP31作为间接ELISA包被抗原用于羊布鲁氏菌病血清学检测具有良好的反应性和特异性。

关键词：布鲁氏菌 OMP31蛋白原核表达间接ELISA

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同源重组介导的重组病毒研究进展

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江苏农业科学 2016年第11期44卷 1-6页

作者：赵银龙李健朱海霞颜新敏赵志荀吴健张强穆晓峰吴国华中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 西北民族大学甘肃兰州730124 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118

病毒同源重组是以同源臂为基础的将目的基因整合到病毒基因组中的技术。将表达盒串联到转移载体,通过同源重组构建重组病毒从而实现病毒基因改造、外源基因表达以及重组活载体疫苗制备等。就重组病毒的优缺点、构建原理及应用进展进行... 详细信息

病毒同源重组是以同源臂为基础的将目的基因整合到病毒基因组中的技术。将表达盒串联到转移载体,通过同源重组构建重组病毒从而实现病毒基因改造、外源基因表达以及重组活载体疫苗制备等。就重组病毒的优缺点、构建原理及应用进展进行了概述,对重组病毒构建的难点进行了分析,全面系统地阐述了重组病毒的构建模式,针对基因框(启动子-报告基因-目的基因-调控元件-终止子)给出具体的构建方案,同时对其未来发展前景进行了展望,以期为今后重组病毒的构建提供理论基础。

关键词：同源重组表达盒转移载体重组病毒病毒载体

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家畜布鲁氏菌外膜蛋白OMP25基因的原核表达及其应用

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黑龙江畜牧兽医 2016年第7期 29-32,37页

作者：臧金凤陈妍吴锦艳王光祥尹双辉栾志舫曹小安尚佑军张志东刘湘涛张超中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 河北农业大学动物医学院河北保定071001 石家庄市兽用生物制品供应站石家庄050000

为了获得活性良好的布鲁氏菌基因工程抗原,对Brucella OMP25蛋白进行原核表达及初步应用,试验采用PCR方法从布鲁氏菌病S2疫苗株中扩增获得OMP25基因,构建了原核表达质粒p GEX-6P-1-OMP25,转化入大肠杆菌BL21中,经过IPTG诱导表达,应用Wes... 详细信息

为了获得活性良好的布鲁氏菌基因工程抗原,对Brucella OMP25蛋白进行原核表达及初步应用,试验采用PCR方法从布鲁氏菌病S2疫苗株中扩增获得OMP25基因,构建了原核表达质粒p GEX-6P-1-OMP25,转化入大肠杆菌BL21中,经过IPTG诱导表达,应用Western-blot方法鉴定表达产物,并以纯化的OMP25重组蛋白为诊断用抗原,通过反应条件优化,初步建立Brucella抗体ELISA检测方法。又以羊布鲁氏菌普查检测血清120份为样本,采用试管凝集试验进行了比较分析。结果表明:成功构建了pGEX-6P-1-OMP25原核表达载体,并在BL21中得以诱导表达,经SDSPAGE和Western-blot分析,重组蛋白分子质量约为49 ku,优化试验确定抗原的最佳包被浓度为3.5μg/m L,血清最佳稀释度为1∶20。试管凝集试验血清样本的阳性率为83%,采用OMP25作为包被抗原的阳性检出率为68%,二者的符合率为85%。说明OMP25作为间接ELISA包被抗原用于羊布鲁氏菌血清学检测具有良好的反应性和特异性。

关键词：布鲁氏菌 OMP25蛋白克隆原核表达间接ELISA

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蛋白质互作研究技术

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动物医学进展 2016年第2期37卷 109-115页

作者：吴健朱海霞赵志荀颜新敏赵银龙吴娜李健张志东张强李影吴国华中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 西北民族大学生命科学技术学院甘肃兰州730124

蛋白质在生物体的机制中是必不可少的,担任着生物系统内启动以及执行的任务。生物体的每一个生物过程,从遗传物质复制到细胞衰老与死亡,依赖于几种甚至几百种蛋白质之间的功能协调。蛋白质的功能,结构的改变会破坏这种平衡,导致疾病的发... 详细信息

蛋白质在生物体的机制中是必不可少的,担任着生物系统内启动以及执行的任务。生物体的每一个生物过程,从遗传物质复制到细胞衰老与死亡,依赖于几种甚至几百种蛋白质之间的功能协调。蛋白质的功能,结构的改变会破坏这种平衡,导致疾病的发生,通常这种情况是由于蛋白间的相互作用引起的。目前有很多蛋白质的结构功能是未知的,所以蛋白质组学发展的也尤为迅速。论文主要综述了双向电泳、噬菌体展示技术、GST pull-down、酵母双杂交、串联亲和纯化、双分子荧光互补技术、蛋白质芯片、Far Western blot、免疫共沉淀9个蛋白质组学相关研究技术,并简单介绍了近几年这些技术在生物学中的应用。

关键词：蛋白质相互作用蛋白互作抑制剂生物信息学

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山羊痘病毒A11R基因的克隆及生物信息学分析

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江苏农业学报 2016年第1期32卷 158-163页

作者：吴健朱海霞赵志荀颜新敏赵银龙吴娜李健张志东张强李影吴国华中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 西北民族大学生命科学技术学院甘肃兰州730124

为了分析绵羊痘病毒A11R蛋白质的分子特征,提取了山羊痘病毒古浪分离株(GL)的基因组DNA,设计引物进行PCR扩增,将PCR产物连接到p GEM-T Easy载体后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆进行序列测定,利用生物信息学软件对A11R基... 详细信息

为了分析绵羊痘病毒A11R蛋白质的分子特征,提取了山羊痘病毒古浪分离株(GL)的基因组DNA,设计引物进行PCR扩增,将PCR产物连接到p GEM-T Easy载体后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆进行序列测定,利用生物信息学软件对A11R基因序列进行预测分析。结果显示,A11R基因序列由954个核苷酸组成的开放阅读框,编码317个氨基酸残基组成的多肽,蛋白质分子质量的理论值为36 091.7,理论等电点为5.14。A11R蛋白质的二级结构中,α螺旋占29.02%,β折叠占10.41%,其余60.57%为无规则卷曲。多序列比对分析显示,不同羊痘病毒分离株A11R序列高度保守,同源性在98%以上。进化树分析结果显示,GL株与NK株、TU株以及SA株在一个分支,说明它们之间具有较近的亲缘关系,上述研究结果为进一步研究A11R蛋白质的生物学功能和羊痘病毒早期蛋白质分子间相互作用奠定了基础。

关键词：羊痘病毒 A11R 基因克隆生物信息学

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绵羊痘病毒古浪县分离株H7R基因的克隆及其原核表达

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中国畜牧杂志 2016年第15期52卷 70-73页

作者：吴健朱海霞赵银龙吴国华赵志荀颜新敏张强李影吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 西北民族大学生命科学技术学院甘肃兰州730124

根据已发表的山羊痘福州株全基因组,以其H7R基因进行引物设计,从古浪株中提取绵羊痘全基因组首次克隆H7R基因。将目的片段插入p MD19-simple载体后使用Bam HI+Not I双酶切构建p ET-28a-H7R原核表达载体,经测序验证构建载体正确。将重组... 详细信息

根据已发表的山羊痘福州株全基因组,以其H7R基因进行引物设计,从古浪株中提取绵羊痘全基因组首次克隆H7R基因。将目的片段插入p MD19-simple载体后使用Bam HI+Not I双酶切构建p ET-28a-H7R原核表达载体,经测序验证构建载体正确。将重组质粒转化到Rosetta感受态通过IPTG诱导,SDS-PAGE检测,结果表明:在17 ku处出现明显条带,经过几次条件优化,H7R在大肠杆菌中主要以包涵体的形式表达。这为后续研究羊痘病毒的入侵及新型疫苗的研究奠定了基础。

关键词：羊痘病毒 H7R 基因克隆原核表达

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口蹄疫病毒感染宿主外周血单个核细胞的转录组学研究

口蹄疫病毒感染宿主外周血单个核细胞的转录组学研究

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中国畜牧兽医学会生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十二次学术研讨会

作者：赵付荣常惠芸解银丽刘泽众邵军军李扬帆张永光中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室

口蹄疫(Foot-and-mouth diseaseFMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,能够感染家畜和野生偶蹄动物,包括牛、猪、羊、骆驼和鹿等。它是危害畜牧业健康发展的"头号杀手&qu... 详细信息

口蹄疫(Foot-and-mouth diseaseFMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,能够感染家畜和野生偶蹄动物,包括牛、猪、羊、骆驼和鹿等。它是危害畜牧业健康发展的"头号杀手",也是影响动物及动物产品国际贸易最重要的疾病。到目前为止,我国针对口蹄疫采

关键词：口蹄疫病毒组学研究外周血单个核细胞

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嵌合O/GSLX/CHN/2010株S片段的基因工程口蹄疫病毒的生物学特性

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微生物学通报 2015年第12期42卷 2396-2406页

作者：姜韶东李平花孙普马雪青白兴文包慧芳卢曾军曹轶梅付元芳李冬陈应理刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室OIE/国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

【目的】研究嵌合口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)O/GSLX/CHN/2010株S片段的基因工程病毒的生物学特性。【方法】运用反向遗传操作技术,将FMDV O/GSLX/CHN/2010的S片段嵌合进2株同谱系FMDV的感染性克隆骨架,拯救得到两... 详细信息

【目的】研究嵌合口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)O/GSLX/CHN/2010株S片段的基因工程病毒的生物学特性。【方法】运用反向遗传操作技术,将FMDV O/GSLX/CHN/2010的S片段嵌合进2株同谱系FMDV的感染性克隆骨架,拯救得到两株基因工程嵌合病毒r GDexc、r GZexc;进而从病毒复制和病毒对乳鼠的致病力方面,对嵌合病毒、亲本基因工程病毒以及FMDV O/GSLX/CHN/2010株进行了评价。【结果】FMDV O/GSLX/CHN/2010株复制较慢,对乳鼠致病力较差。嵌合病毒和亲本基因工程病毒的复制能力、对乳鼠的致病力明显高于FMDV O/GSLX/CHN/2010株。【结论】研究表明FMDV O/GSLX/CHN/2010的S片段不能独自决定该病毒较差的复制能力和较弱的乳鼠致病力。这一发现为进一步研究O/GSLX/CHN/2010的致弱机制以及S片段对病毒生物学特性的影响奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒感染性克隆 S片段病毒生物学特性

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山羊痘病毒A6L基因的克隆及序列分析

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中国畜牧兽医 2015年第8期42卷 1973-1978页

作者：赵银龙吴国华朱海霞吴健颜新敏赵志荀李健吴娜穆晓峰张强中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实室验兰州730046

为了分析山羊痘病毒A6蛋白的分子特征,本试验提取了山羊痘病毒古浪分离株的基因组DNA,设计引物进行PCR扩增,克隆A6L基因的DNA序列。将PCR产物连接到pGEM-T Easy载体后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆进行序列测定,利用生物... 详细信息

为了分析山羊痘病毒A6蛋白的分子特征,本试验提取了山羊痘病毒古浪分离株的基因组DNA,设计引物进行PCR扩增,克隆A6L基因的DNA序列。将PCR产物连接到pGEM-T Easy载体后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆进行序列测定,利用生物信息学软件对A6L基因序列进行预测分析。结果显示,A6L基因序列含有1个由1 128个核苷酸组成的开放阅读框,编码375个氨基酸残基组成的多肽,蛋白质分子质量的理论值为43.68ku,理论等电点为7.50。该蛋白的二级结构中,α螺旋占53.30%,β折叠占10.24%,其余39.46%为无规则卷曲。多序列比对分析结果显示,不同羊痘病毒分离株A6L序列高度保守,同源性在97%以上。上述研究结果为进一步研究A6蛋白的生物学功能和羊痘病毒早期蛋白的分子相互作用奠定了基础。

关键词：山羊痘病毒 A6L基因基因克隆序列分析

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我国一些地区羊衣原体血清流行病学调查分析

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中国人兽共患病学报 2015年第5期31卷 472-474页

作者：成伟伟彭靖雯张克山刘永杰孔汉金尚佑军刘湘涛刘磊中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

羊衣原体是由专性细胞内寄生的流产嗜衣原体引起的一种人兽共患传染病,危害严重。为了解近年我国一些地区羊衣原体的流行情况,特以间接血凝试验(IHA)对采自全国8个省(区)的羊血清样本进行检测,阳性率达46.09%(342/742)。其中湖北省、安... 详细信息

羊衣原体是由专性细胞内寄生的流产嗜衣原体引起的一种人兽共患传染病,危害严重。为了解近年我国一些地区羊衣原体的流行情况,特以间接血凝试验(IHA)对采自全国8个省(区)的羊血清样本进行检测,阳性率达46.09%(342/742)。其中湖北省、安徽省、山东省、新疆省、吉林省、四川省、宁夏省和甘肃省分别为60%(12/20)、42.86%(51/119)、52.75%(48/91)、40.13%(122/304)、51.91%(68/131)、30.56%(11/36)、67.74%(21/31)和90%(9/10),显示羊衣原体在我国流行严重。与以往资料相比较,感染率在全国呈逐年增加趋势。绵羊、山羊的抗体阳性率分别为47.27%(268/576)和42.28%(74/175),表明前者感染率要高于后者。

关键词：羊衣原体间接血凝试验血清学调查分析

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