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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：殷相平李志勇李宝玉李学瑞杨彬兰喜柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州 730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州 730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州 730046

对狂犬病毒致病性有关的分子生物学进行阐明，特别是对狂犬病毒转录、基因表达和复制方面的准确调控进行详细的阐述，为进一步从分子水平上理解狂犬病毒的复制策略，为合理的研制狂犬病基因工程疫苗或病毒载体提供理论支持。

关键词：狂犬病毒干扰素细胞凋亡病毒复制

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狂犬病病毒分子生物学研究进展

狂犬病病毒分子生物学研究进展

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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：殷相平李志勇李学瑞李宝玉杨彬兰喜柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州 730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州 730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州 730046

从病毒基因组及其编码的蛋白、致病机理等方面系统综述了狂犬病病毒分子生物学方面的研究进展，为该病的早期诊断、有效预防和控制提供理论基础。

关键词：狂犬病病毒基因组蛋白致病机理分子生物学

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山羊痘病毒通用转移载体的构建及鉴定

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中国兽药杂志 2007年第2期41卷 1-4,9页

作者：鞠厚斌张强郑海学施程洪韩若婵谢芳吴国华颜新敏李健朱海霞朱彩珠卫广森沈阳农业大学畜牧兽医学院辽宁沈阳110161 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

转移载体的构建是重组羊痘病毒构建的重要环节,在分析羊痘病毒基因组的基础上,以TK基因为插入靶序列,经PCR、酶切鉴定,获得了带有EcoRⅠ、BamHⅠ酶切位点的TK基因片段。将此片段与经相同酶切的pUC119载体连接,构建转移载体pUC119-TK,并... 详细信息

转移载体的构建是重组羊痘病毒构建的重要环节,在分析羊痘病毒基因组的基础上,以TK基因为插入靶序列,经PCR、酶切鉴定,获得了带有EcoRⅠ、BamHⅠ酶切位点的TK基因片段。将此片段与经相同酶切的pUC119载体连接,构建转移载体pUC119-TK,并且以此为基础构建表达绿色荧光蛋白山羊痘病毒转移载体pTK-P7.5-GFP。将pTK-P7.5-GFP转染羊痘病毒感染的BHK21细胞,48 h后报告基因得到表达,这为羊痘病毒载体系统的进一步开发奠定了基础。

关键词：羊痘病毒 TK基因转移载体构建鉴定

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山羊痘病毒结构蛋白P32基因的表达

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甘肃农业大学学报 2007年第5期42卷 5-8页

作者：张强马维民吴国华颜新敏李健朱海霞朱彩珠吴润刘湘涛才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

将山羊痘病毒结构蛋白P32基因从重组质粒pMD-P32中亚克隆至pGEX-4T-1原核表达载体上,用构建的重组表达质粒pGEX-P32转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,1 mmol/L IPTG诱导表达,细菌裂解物经SDS-PAGE检测到分子量约为58 ku的目的蛋白,与预... 详细信息

将山羊痘病毒结构蛋白P32基因从重组质粒pMD-P32中亚克隆至pGEX-4T-1原核表达载体上,用构建的重组表达质粒pGEX-P32转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,1 mmol/L IPTG诱导表达,细菌裂解物经SDS-PAGE检测到分子量约为58 ku的目的蛋白,与预期的产物大小一致.Western-blotting表明该重组蛋白可被山羊痘阳性血清所识别.

关键词：羊痘病毒 P32基因原核表达

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狂犬病病毒CVS株G基因和IFN-α基因的克隆及双基因真核表达载体的构建

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动物医学进展 2007年第9期28卷 11-14页

作者：李江涛殷相平柳纪省李宝玉李学瑞杨彬兰喜胡永浩中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

从狂犬病病毒CVS毒株致死的小鼠脑组织中提取总RNA,通过RT-PCR获得G基因;以pMD18-T-α质粒为模板,PCR扩增得到IFN-α基因。两个基因和pIRES真核表达载体分别双酶切,连接构建p IRES-G/IFN-α,经PCR、双酶切鉴定和测序证明载体构建成功。... 详细信息

从狂犬病病毒CVS毒株致死的小鼠脑组织中提取总RNA,通过RT-PCR获得G基因;以pMD18-T-α质粒为模板,PCR扩增得到IFN-α基因。两个基因和pIRES真核表达载体分别双酶切,连接构建p IRES-G/IFN-α,经PCR、双酶切鉴定和测序证明载体构建成功。测得的G基因序列长1 575 bp,与CVS株G基因氨基酸同源性为98.5%;IFN-α序列长为570 bp,与GenBank中登录号为NM 001017411的IFN-α基因氨基酸同源性为91.6%。

关键词：狂犬病痛毒CVS毒株 G基因 α干扰素 pIRES载体

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O型口蹄疫单克隆抗体6H4株金标试纸条的制备

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甘肃农业大学学报 2007年第3期42卷 20-23页

作者：林彤常惠芸吴海波邵军军独军政丛国政李克生杜惠芬中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃省医学科学院医学生物技术中心甘肃兰州730050

以制备的O型口蹄疫单克隆抗体为基础,结合免疫金技术,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,对6H4单克隆抗体进行标记,制备了该单克隆抗体的金标试纸条.研究结果表明,6H4单克隆抗体在pH 8.64下的稳定点为12 mg/L,可制备成金标记抗体及其... 详细信息

以制备的O型口蹄疫单克隆抗体为基础,结合免疫金技术,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,对6H4单克隆抗体进行标记,制备了该单克隆抗体的金标试纸条.研究结果表明,6H4单克隆抗体在pH 8.64下的稳定点为12 mg/L,可制备成金标记抗体及其反应膜.

关键词：口蹄疫单克隆抗体金标试纸条

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猪源冠状病毒TGEV中国分离株纤突蛋白生物信息学分析

猪源冠状病毒TGEV中国分离株纤突蛋白生物信息学分析

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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：李建强柳纪省兰喜程杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州 730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州 730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州 730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州 730070

以猪源冠状病毒TGEV纤突蛋白基因序列为基础，利用生物软件对TGEV中国分离株纤突蛋白进行N-糖基化位点、跨膜螺旋、进化树、二级结构及抗原位点的预测和分析。结果显示所有TGEV毒株可分为3个基因型，4株中国分离株分别归属于以上3个基... 详细信息

以猪源冠状病毒TGEV纤突蛋白基因序列为基础，利用生物软件对TGEV中国分离株纤突蛋白进行N-糖基化位点、跨膜螺旋、进化树、二级结构及抗原位点的预测和分析。结果显示所有TGEV毒株可分为3个基因型，4株中国分离株分别归属于以上3个基因型，属于Ⅰ型的中国株TSX在跨膜螺旋的氨基酸及二级结构上与其他中国株有明显的差异，而同属于Ⅲ型中国毒株SC-Y和TH-98在跨膜螺旋的氨基酸及二级结构上非常接近，而所有中国分离株抗原表位没有明显差别，表明TGEV在中国没有显著的变异。

关键词：猪源冠状病毒猪传染性胃肠炎纤突蛋白基因序列生物信息学

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口蹄疫病毒重组蛋白表达及其亚单位疫苗研究进展

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生物技术通报 2007年第4期23卷 1-4页

作者：王光华独军政薛慧文常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃农业大学动物医学院兰州730070 甘肃农业大学动物医学院

口蹄疫(FMD)是偶蹄动物的一种急性、热性传染病,曾多次在世界上发生过大流行,研制和生产新型口蹄疫疫苗是防制该病爆发的有效措施之一。目前,基因工程疫苗成为该领域的研究热点。就口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白和非结构蛋白在大肠杆菌、昆... 详细信息

口蹄疫(FMD)是偶蹄动物的一种急性、热性传染病,曾多次在世界上发生过大流行,研制和生产新型口蹄疫疫苗是防制该病爆发的有效措施之一。目前,基因工程疫苗成为该领域的研究热点。就口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白和非结构蛋白在大肠杆菌、昆虫细胞、酵母菌、哺乳动物细胞和转基因植物等系统中的表达现状及其基因工程亚单位疫苗研究进展进行综述。

关键词：口蹄疫结构蛋白表达亚单位疫苗

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H9N2亚型禽流感病毒非结构蛋白基因的克隆及原核表达

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实用诊断与治疗杂志 2007年第12期21卷 885-887,I0011页

作者：易华山侯顺利独军政胡永浩常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州市730046 甘肃农业大学动物医学院兰州军区疾病预防控制中心

目的:为防控禽流感在家禽和水禽中的流行,从而控制对人的感染,探讨一种能区别自然感染鸡和疫苗免疫鸡的鉴别诊断方法。方法:采用RT-PCR方法扩增禽流感病毒H9N2的NS1基因(660bp);并将该片段克隆至pET-28(a)质粒中,构建重组表达载体pET-N... 详细信息

目的:为防控禽流感在家禽和水禽中的流行,从而控制对人的感染,探讨一种能区别自然感染鸡和疫苗免疫鸡的鉴别诊断方法。方法:采用RT-PCR方法扩增禽流感病毒H9N2的NS1基因(660bp);并将该片段克隆至pET-28(a)质粒中,构建重组表达载体pET-NS1,转化*** BL21(DE3)感受态细胞,以终浓度0.7mmol/L的IPTG诱导表达6h,并应用Western-blot方法分析表达产物的反应原性。结果:pET-NS1载体能高效表达NS1蛋白,相对分子质量约25000,纯化产物能与该亚型的AIV活病毒感染鸡血清发生特异性反应而与灭活病毒免疫鸡血清不发生反应。结论:NS1基因在大肠埃希氏菌中的表达产物可用来鉴别禽流感免疫鸡群和感染鸡群。

关键词：禽流感非结构蛋白表达 H9N2

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A型口蹄疫病毒P1基因与GFP基因的重组逆转录病毒载体构建

A型口蹄疫病毒P1基因与GFP基因的重组逆转录病毒载体构建

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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：刘艳红安芳兰刘俊林李炯刘相涛尚佑军中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重开放实验室(甘肃兰州 730046) 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重开放实验室 (甘肃兰州 730046) 甘肃农业大学动物科学技术学院(甘肃兰州 730070) 甘肃农业大学动物科学技术学院 (甘肃兰州 730070)

根据逆转录病毒表达载体pBABA-puro的特点及多克隆酶切位点要求设计引物，以A型FMDV XJ-99的Pl2X基因和GFP基因的阳性克隆质粒为模板，用PCR方法扩增各基因片段。酶切后分步定向亚克隆至逆转录病毒表达载体pBABE-puro上。经PCR、酶切及... 详细信息

根据逆转录病毒表达载体pBABA-puro的特点及多克隆酶切位点要求设计引物，以A型FMDV XJ-99的Pl2X基因和GFP基因的阳性克隆质粒为模板，用PCR方法扩增各基因片段。酶切后分步定向亚克隆至逆转录病毒表达载体pBABE-puro上。经PCR、酶切及测序鉴定表明，获得了含CFP的A型FMDV衣壳蛋基因的重组逆转录病毒表达载体，对今后用逆转录病毒载体包装系统进行FMDV的目的基因转移和表达研究，更快速筛选单克隆阳性靶细胞奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒衣壳蛋白基因重组逆转录病毒表达载体

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