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中国畜牧兽医学会2006学术年会

作者：卢曾军曹轶梅刘在新谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

构建了两株O型口蹄疫病毒(FMDV)基因重组腺病毒,分别带有O/China／99 P1-2A-3C(adv-p12x3c)和P1- 2A-3CD(adv-p12x3cd)基因。用这两株重组腺病毒分别免疫豚鼠,结果adv-p12x3c重组腺病毒可以刺激豚鼠产生保护性的免疫反应,1×108-2&#... 详细信息

构建了两株O型口蹄疫病毒(FMDV)基因重组腺病毒,分别带有O/China／99 P1-2A-3C(adv-p12x3c)和P1- 2A-3CD(adv-p12x3cd)基因。用这两株重组腺病毒分别免疫豚鼠,结果adv-p12x3c重组腺病毒可以刺激豚鼠产生保护性的免疫反应,1×108-2×108pfu的重组腺病毒肌肉注射免疫豚鼠,可以保护豚鼠抵抗10 000豚鼠半数感染量(GID50)的同型口蹄疫强毒的攻击,保护率分别达到5／6(83．3％)和6/6(100％)。而相同免疫剂量的adv-p12x3cd重组腺病毒免疫组仅产生了部分的免疫保护,保护率仅为1/6。Ad5野生型腺病毒和PBS注射对照组均未产生任何的免疫保护效果。用5×108pfu 的adv-p12x3c重组腺病毒肌肉注射免疫猪,并以健康非免疫猪作为对照组。用液相阻断ELISA方法检测FMDV特异性抗体变化,用MTT法检测淋巴细胞的增殖情况。在免疫后第28天,经肌肉接种攻击100个猪半数感染量(PID50)的FMDV猪体适应毒。经过11d的临床观察,结果,非免疫对照组猪于攻毒后24h即开始发病,至72h后对照组所有猪均出现典型的口蹄疫临床症状。而重组腺病毒免疫猪在攻毒后第7天仍表现正常,至第8天时其中的一头猪出现轻微的临床症状,其余的 3头猪至第11天试验结束时仍表现正常,达到3／4保护。重组腺病毒免疫猪后可出现特异性的体液和细胞免疫应答。

关键词：口蹄疫病毒重组腺病毒载体疫苗豚鼠猪

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羊与麝朊蛋白基因的序列差异

羊与麝朊蛋白基因的序列差异

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中国畜牧兽医学会2006学术年会

作者：陈豪泰张杰刘永生吴润中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室甘肃农业大学动物医学院

分别从麝与羊全血中提取基因组总DNA,用所设计引物以聚合酶链式反应扩增出细胞型朊蛋白(PrPc)基因, 并克隆到pMD 18-T载体。序列分析表明所克隆的PrPc基因的片段大小为771 bp,包含了朊蛋白基因的完整编码区序列, 为含单一外显子的完整... 详细信息

分别从麝与羊全血中提取基因组总DNA,用所设计引物以聚合酶链式反应扩增出细胞型朊蛋白(PrPc)基因, 并克隆到pMD 18-T载体。序列分析表明所克隆的PrPc基因的片段大小为771 bp,包含了朊蛋白基因的完整编码区序列, 为含单一外显子的完整开放阅读框。PrPc基因序列相比较,其核苷酸和氨基酸同源性分别在98．0％和98．2％。在整个碱基替换中,多数替换是保守的,为同义突变,仅有5个替换引起氨基酸突变。

关键词：藏绵羊麝朊蛋白基因序列差异

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感染动物口蹄疫病毒3ABC抗体的变化规律

感染动物口蹄疫病毒3ABC抗体的变化规律

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中国畜牧兽医学会2006学术年会

作者：杨苏珍卢曾军曹轶梅李冬贾宁刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃农业大学动物医学院中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室

利用间接ELISA方法(3ABC-I-ELISA),检测了接种口蹄疫病毒(FMDV)牛、羊、猪和同居牛、羊、猪FMDV非结构蛋白3ABC抗体的早期变化。试验结果表明,4头牛在舌面接种感染FMDV 48h后全部发病,第3d 3ABC抗体可疑,第5d 3ABC抗体检测阳性,至第8d 3... 详细信息

利用间接ELISA方法(3ABC-I-ELISA),检测了接种口蹄疫病毒(FMDV)牛、羊、猪和同居牛、羊、猪FMDV非结构蛋白3ABC抗体的早期变化。试验结果表明,4头牛在舌面接种感染FMDV 48h后全部发病,第3d 3ABC抗体可疑,第5d 3ABC抗体检测阳性,至第8d 3ABC抗体全部为阳性;10头同居牛(分别与接种感染猪和羊同居)在同居第7d时未检出 3ABC抗体,在同居15d时,3ABC抗体阳性率仅为30％(3／10表现临床症状)。肌肉接种病毒羊3ABC抗体产生时间与接种病毒牛基本一致。同居羊3ABC抗体产生时间推迟至同居后第8d,至第14d时所有表现临床症状的羊3ABC抗体全部为阳性。肌肉注射感染和同居感染猪,3ABC抗体与临床症状具有很好的对应关系;发病猪最早可于接种病毒后第7d检测到

关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白 3ABC抗体

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实时荧光定量RT-PCR技术及其存在的问题和优化方案

实时荧光定量RT-PCR技术及其存在的问题和优化方案

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中国畜牧兽医学会2006学术年会

作者：许小红刘在新包慧芳王雯慧牛继伟中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃农业大学动物医学院甘肃农业大学动物医学院

实时荧光定量RT-PCR技术是近年来发展的一种新型检测技术。由于它具有特异性强、灵敏度高、高通量、定量准确、速度快、全封闭反应以及自动化程度高等特点,目前已成为分子医学和分子生物学研究的重要工具,并在许多领域得到了广泛的应用... 详细信息

实时荧光定量RT-PCR技术是近年来发展的一种新型检测技术。由于它具有特异性强、灵敏度高、高通量、定量准确、速度快、全封闭反应以及自动化程度高等特点,目前已成为分子医学和分子生物学研究的重要工具,并在许多领域得到了广泛的应用。然而,由于诸多因素的限制,该技术还存在一些潜在的问题需要进一步分析、探讨和完善。本文除了对实时荧光定量RT-PCR技术的原理及其在相关领域的应用等做了介绍外,还着重分析、讨论了该技术目前存在的问题及相关优化方案。

关键词：实时荧光定量RT-PCR 原理存在的问题应用

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人成熟叠朊在大肠埃希菌中高效表达

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动物医学进展 2006年第10期27卷 62-65页

作者：路伟张杰刘永生卫广森沈阳农业大学畜牧兽医学院辽宁沈阳110161 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

以含有人叠朊编码基因Prnd的ORF的质粒HoPrnd-T为模板,PCR扩增出成熟叠朊编码基因片段homDpl,并将其插入原核表达载体pGEX-6P-1的EcoRⅠ和XhoⅠ位点之间,构建出重组表达质粒pGEX-homDpl。将pGEX-homDpl电转化到宿主菌株BL21(DE3)中,以1.... 详细信息

以含有人叠朊编码基因Prnd的ORF的质粒HoPrnd-T为模板,PCR扩增出成熟叠朊编码基因片段homDpl,并将其插入原核表达载体pGEX-6P-1的EcoRⅠ和XhoⅠ位点之间,构建出重组表达质粒pGEX-homDpl。将pGEX-homDpl电转化到宿主菌株BL21(DE3)中,以1.0 mmol/LIPTG诱导表达,SDS-PAGE结果显示人成熟叠朊被大肠埃希菌高效表达。

关键词：成熟叠朊大肠埃希菌表达人

来源：评论

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人朊蛋白基因的克隆与原核表达

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甘肃农业大学学报 2006年第3期41卷 11-15页

作者：姜海霞刘永生杨孝朴陈豪泰朱小玲张杰谢庆阁甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

以人血液中提取的总DNA为模板,克隆朊蛋白(prion protein,PrP)基因Prnp户的开放阅读框(ORF),与pMD -18T载体连接后转入*** JM109,用Blast软件比较重组质粒序列,结果表明获得的人Prnp的ORF与Genbank登录的相应核苷酸序列最高同源性为99．... 详细信息

以人血液中提取的总DNA为模板,克隆朊蛋白(prion protein,PrP)基因Prnp户的开放阅读框(ORF),与pMD -18T载体连接后转入*** JM109,用Blast软件比较重组质粒序列,结果表明获得的人Prnp的ORF与Genbank登录的相应核苷酸序列最高同源性为99．6％,推导的氨基酸序列同源性为99．8％,将编码人成熟PrP的基因定向克隆到 pET-30a(+)表达载体,将重组质粒pET-homPrP转化*** BL21(DE3),在37℃下用1．0 mmol／L IPTG诱导,重组融合蛋白获得高效表达,SDS-PAGE显示表达产物以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的20％～25％．用Ni-NTA 树脂亲和层析纯化了表达产物．Western-blotting分析表明,融合蛋白被抗PrP的单克隆抗体特异识别．因此,在大肠杆菌中表达的人成熟PrP融合蛋白可以作为制备PrP抗体的免疫原．

关键词：人朊蛋白基因克隆原核表达

来源：评论

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口蹄疫病毒3ABC绿色荧光蛋白载体构建及表达

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动物医学进展 2006年第4期27卷 72-74,106页

作者：孙德惠独军政常惠芸才学鹏甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

将O型口蹄疫病毒Akesu/58株适应细胞培养。用RT-PCR技术从适应细胞株中克隆了3ABC基因,将其克隆入pGEM-T载体,测序鉴定。然后将目的基因与线性化的绿色荧光蛋白(PEGFPN1)载体连接筛选阳性质粒命名为PEGFPN1-3ABC。将阳性质粒转入JM109... 详细信息

将O型口蹄疫病毒Akesu/58株适应细胞培养。用RT-PCR技术从适应细胞株中克隆了3ABC基因,将其克隆入pGEM-T载体,测序鉴定。然后将目的基因与线性化的绿色荧光蛋白(PEGFPN1)载体连接筛选阳性质粒命名为PEGFPN1-3ABC。将阳性质粒转入JM109大肠埃希菌增殖。提取PEGFPN1-3ABC质粒转染入BHK细胞,在荧光显微镜下直接观察表达结果。

关键词：绿色荧光蛋白口蹄疫病毒 3ABC基因表达

来源：评论

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牛、羊、猪人工感染口蹄疫病毒3ABC抗体的变化

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甘肃农业大学学报 2006年第5期41卷 22-26页

作者：杨苏珍卢曾军曹轶梅李冬刘在新贾宁甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所国家家畜疫病病原生物学重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

利用口蹄疫病毒(FMDV)3ABC抗体间接ELISA方法(3ABC-I-ELISA),检测了接种病毒牛、羊、猪和同居牛、羊、猪FMDV非结构蛋白3ABC抗体的变化.实验表明,4头牛在舌面接种感染FMDV 48 h后全数发病,第3天即出现可疑的3ABC抗体,第5天检测到阳性的3... 详细信息

利用口蹄疫病毒(FMDV)3ABC抗体间接ELISA方法(3ABC-I-ELISA),检测了接种病毒牛、羊、猪和同居牛、羊、猪FMDV非结构蛋白3ABC抗体的变化.实验表明,4头牛在舌面接种感染FMDV 48 h后全数发病,第3天即出现可疑的3ABC抗体,第5天检测到阳性的3ABC抗体,至第8天3ABC抗体全部为阳性;10头同居牛(分别与接种感染猪和羊同居)在同居第7天时未检出3ABC抗体,在同居第15天时,3ABC抗体阳性率仅为30%;肌肉接种病毒羊3ABC抗体产生时间与接种病毒牛一致.同居羊在同居后第8天开始产生3ABC抗体,至第15天时所有表现出临床症状的羊3ABC抗体全部为阳性.猪无论是肌肉注射感染还是同居感染,其3ABC抗体与临床症状均具有很好的对应关系;发病猪最早可于接种病毒后第7天检测到可疑的3ABC抗体,至第15天均为阳性.牛、羊和猪均存在隐性感染的情况,即未出现临床症状,但3ABC抗体为阳性.

关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白 3ABC抗体人工感染牛羊猪

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