检索结果-内蒙古大学图书馆

免疫学杂志 2011年第4期27卷 316-318页

作者：吴琼孙英军张艳郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

目的为了探讨质粒DNA体外刺激淋巴细胞的增殖状况,建立了一种方便可靠的评价豚鼠细胞免疫水平的试验方法。方法用羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色豚鼠全血,经植物血凝素(PHA)和质粒DNA刺激培养,利用流式细胞术分析细胞的增殖... 详细信息

目的为了探讨质粒DNA体外刺激淋巴细胞的增殖状况,建立了一种方便可靠的评价豚鼠细胞免疫水平的试验方法。方法用羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色豚鼠全血,经植物血凝素(PHA)和质粒DNA刺激培养,利用流式细胞术分析细胞的增殖状况。结果豚鼠全血经PHA和DNA刺激,淋巴细胞增殖能力不同;未免疫组经DNA和PHA刺激后增殖的差异显著,免疫组差异不显著。DNA质粒在体内外均可作为刺激源刺激淋巴细胞增殖。结论建立了一种基于活细胞染料CFSE染色的豚鼠全血淋巴细胞增殖试验方法,可方便、快速、有效地评价细胞免疫水平。

关键词：豚鼠淋巴细胞细胞免疫 CFSE染色淋巴细胞增殖

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用原位杂交技术对牛组织中FMDV RNA检测和定位

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畜牧兽医学报 2007年第12期38卷 1341-1344页

作者：邵军军常惠芸林彤丛国正独军政谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

采用原位杂交技术对6头试验牛易感染组织中的FMDVRNA进行了检测和定位。结果显示，接毒后7～28d4头牛舌上皮组织、7～21d的喉咽部有强阳性染色；接毒后35d的牛及正常对照牛舌上皮没有阳性染色；接毒牛及对照牛的扁桃体、淋巴结和蹄叉等... 详细信息

采用原位杂交技术对6头试验牛易感染组织中的FMDVRNA进行了检测和定位。结果显示，接毒后7～28d4头牛舌上皮组织、7～21d的喉咽部有强阳性染色；接毒后35d的牛及正常对照牛舌上皮没有阳性染色；接毒牛及对照牛的扁桃体、淋巴结和蹄叉等其他组织中均没有阳性染色，表明牛舌上皮和喉咽部上皮组织中感染了FMDV，本研究为进一步阐明FMDV在宿主体内的持续感染机理提供极有价值的线索。

关键词： FMDV 原位杂交牛

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猪FMDV受体整联蛋白β1亚基LBD多克隆抗体的制备和初步应用

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中国人兽共患病学报 2008年第11期24卷 999-1001,1005页

作者：高闪电常惠芸独军政王景锋宋帅谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

目的表达口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β1亚基配体结合域β1LBD,制备兔抗β1LBD多克隆抗体检测β1p-CHOK1细胞β1亚基的表达。方法利用PCR方法扩增整联蛋白β1LBD基因片段,经BamHⅠ和XhoⅠ进行双酶切后与pGEX-4T-1原核表达载体相连,构建... 详细信息

目的表达口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β1亚基配体结合域β1LBD,制备兔抗β1LBD多克隆抗体检测β1p-CHOK1细胞β1亚基的表达。方法利用PCR方法扩增整联蛋白β1LBD基因片段,经BamHⅠ和XhoⅠ进行双酶切后与pGEX-4T-1原核表达载体相连,构建的pGEX-β1LBD重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达并提取包涵体,纯化目的蛋白。然后用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔制备其多克隆抗体,以ELISA和Western blot方法分别鉴定抗体的效价和特异性,并用制备的抗体以间接免疫荧光抗体法对β1p-CHOK1细胞中β1亚基的表达进行检测。结果SDS-PAGE电泳分析显示阳性菌经诱导后表达一Mr约为42000的GST-β1LBD融合蛋白,与预期结果相符。目的蛋白纯化后,在电泳图片上显示较为清晰的单一条带,用纯化GST-β1LBD免疫新西兰大耳白兔制备的多克隆抗体效价达1∶12800以上,具有较高的特异性,间接免疫荧光显示β1p-CHOK1细胞β1亚基表达于其细胞表面。结论制备了具有高亲和性和特异性的兔抗猪源整联蛋白β1LBD多克隆抗体,为深入研究猪源整联蛋白β1在口蹄疫病毒感染过程中的作用了奠定基础。

关键词：口蹄疫病毒受体整联蛋白β1亚基配体结合域多克隆抗体

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羊传染性脓疱病毒湖北株的鉴定及分子特征分析

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畜牧兽医学报 2010年第9期41卷 1154-1157页

作者：张克山何继军尚佑军郭建宏郑海学田宏靳野刘永杰王光祥刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

为了确诊疑似羊传染性脓疱病例,分析羊传染性脓疱病毒(Orfvirus,ORFV)的分子特征,作者以湖北某羊场疑似传染性脓疱病料为对象,进行了电镜观察、病理切片染色、特异性目的基因扩增和序列测定及遗传进化关系分析。结果在电镜下观察到ORFV... 详细信息

为了确诊疑似羊传染性脓疱病例,分析羊传染性脓疱病毒(Orfvirus,ORFV)的分子特征,作者以湖北某羊场疑似传染性脓疱病料为对象,进行了电镜观察、病理切片染色、特异性目的基因扩增和序列测定及遗传进化关系分析。结果在电镜下观察到ORFV样粒子,切片HE染色可见有炎性细胞浸润,自病料中扩增出特异性目的ORFVB2L基因片段(GenBank序列号GU320351)。结果表明该病例为黑山羊传染性脓疱病毒引起,序列遗传进化分析表明该病毒和2007年分离于中国台湾的毒株(DQ904351)遗传关系最近,和印度2004到2005年分离于绵羊(DQ263306、DQ263305)、山羊(DQ263304、DQ263303)的ORFV同属于一个进化分支。本研究为ORFV分子流行病学研究积累了资料。

关键词：羊传染性脓疱病毒鉴定分子特征分析

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Asia 1型FMDV感染BHK-21细胞差异蛋白质点2-DE分析

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畜牧兽医学报 2011年第1期42卷 145-149页

作者：刘永杰张克山尚佑军郭建宏郑海学田宏卢国栋刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

为研究Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)感染BHK-21细胞后蛋白质组的变化及差异,将FMDV接种于培养的单层BHK-21细胞,同时设未接毒的BHK-21细胞作对照组。待细胞病变后分别提取2组细胞总蛋白借助2-DE技术及PDQuest8.0软件进行细胞蛋白质组二维... 详细信息

为研究Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)感染BHK-21细胞后蛋白质组的变化及差异,将FMDV接种于培养的单层BHK-21细胞,同时设未接毒的BHK-21细胞作对照组。待细胞病变后分别提取2组细胞总蛋白借助2-DE技术及PDQuest8.0软件进行细胞蛋白质组二维电泳图谱差异性分析。结果显示感染组有1 457个可见蛋白质点,而对照组可见的蛋白质点为1 427个。感染组蛋白点的表达量与对照组相比,二者具有统计学差异(P<0.05)的蛋白质点472个,其中表达上调251个点,表达下调221个点,新合成蛋白点30个。结果表明FMDV感染BHK-21细胞后引起了细胞蛋白质组表达模式的改变,这种变化是病毒与细胞相互作用的结果。本研究首次利用蛋白质组学技术研究Asia 1型FMDV感染BHK-21细胞后蛋白质组学差异,有助于深入研究Asia 1型FMDV和BHK-21细胞相互作用的分子机制。

关键词： Asia1型FMDV BHK-21细胞感染差异蛋白质组

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羊痘病毒G蛋白偶联趋化因子受体基因序列分析及其在鉴别病毒种属上的作用

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中国预防兽医学报 2010年第2期32卷 154-156页

作者：颜新敏张强吴国华李健朱海霞中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学开放实验室甘肃兰州730046

为明确G蛋白偶联趋化因子受体(GpCR)基因在羊痘病毒种属鉴别中的作用,本实验对3株绵羊痘病毒(SPV)和2株山羊痘病毒(GPV)弱毒疫苗株的GpCR进行了克隆测序,并与GenBank中登录的21个羊痘病毒属成员相关序列进行了比对。核酸同源性分析表明... 详细信息

为明确G蛋白偶联趋化因子受体(GpCR)基因在羊痘病毒种属鉴别中的作用,本实验对3株绵羊痘病毒(SPV)和2株山羊痘病毒(GPV)弱毒疫苗株的GpCR进行了克隆测序,并与GenBank中登录的21个羊痘病毒属成员相关序列进行了比对。核酸同源性分析表明SPV不同毒株之间同源性达到99.5%～99.8%;GPV之间同源性达到98.8%～99.8%;GenBank上公布的疙瘩皮肤病病毒(LSDV)之间同源性达到100%。而GPV、SPV和皮肤疙瘩病毒两两比对的同源性仅达到94.2%～95.9%。对GpCR的系统进化树分析可以看出GPV、SPV和LSDV分别位于不同的进化分枝上,而GPV与LSDV具有更近的亲缘关系。GpCR基因在鉴别GPV属和流行病学分析中具有重要价值。

关键词：羊痘病毒 G蛋白偶联趋化因子受体序列分析种属鉴别

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整联蛋白与口蹄疫病毒感染

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微生物学通报 2007年第5期34卷 960-964页

作者：独军政常惠芸高闪电才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

整联蛋白是一类分布广泛的细胞表面受体家族,它不仅在细胞的生长、移行、增殖和分化等许多方面发挥重要生物学功能,而且在多种病理过程中发挥重要作用。许多病毒都能利用整联蛋白分子作为病毒受体或共受体进入宿主细胞。本文主要就整联... 详细信息

整联蛋白是一类分布广泛的细胞表面受体家族,它不仅在细胞的生长、移行、增殖和分化等许多方面发挥重要生物学功能,而且在多种病理过程中发挥重要作用。许多病毒都能利用整联蛋白分子作为病毒受体或共受体进入宿主细胞。本文主要就整联蛋白的特征及其在口蹄疫病毒感染宿主细胞过程中的作用机制进行综述。

关键词：整联蛋白口蹄疫病毒细胞受体

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猪口蹄疫病毒受体通用亚基αv的基因克隆及序列分析

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生物工程学报 2007年第6期23卷 1086-1090页

作者：独军政高闪电常惠芸丛国正邵军军林彤才学鹏谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

病毒受体是病毒宿主范围和组织嗜性的决定因素。研究发现,至少有四种整联蛋白αvβ1、αvβ3、αvβ6、αvβ8是口蹄疫病毒(FMDV)的受体,其中αv是4种受体的通用亚基。首次从口蹄疫病毒实验感染猪的肺组织中克隆到了通用亚基αv基因并... 详细信息

病毒受体是病毒宿主范围和组织嗜性的决定因素。研究发现,至少有四种整联蛋白αvβ1、αvβ3、αvβ6、αvβ8是口蹄疫病毒(FMDV)的受体,其中αv是4种受体的通用亚基。首次从口蹄疫病毒实验感染猪的肺组织中克隆到了通用亚基αv基因并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列进行了比较分析。猪αv亚基基因的编码区含有3141个核苷酸,编码1046个氨基酸,其N-端30个氨基酸为信号肽,其后的胞外域、跨膜区、胞浆域分别由955、29、32个氨基酸组成;胞外域含有11个潜在的糖基化位点(NXT/NXS)、2个Ca2+结合位点(DX[D/N]XDGXXD)、18个半胱氨酸残基。猪αv基因与牛、人、猕猴、家鼠、鸡、犬的αv基因的核苷酸序列同源性分别为93.3%、91.5%、91.4%、85.6%、73.2%、89.9%,推导的氨基酸序列同源性分别为96.3%、94.6%、94.1%、90.8%、81.6%、93.8%,猪与牛αv亚基同源性最高,表明受体αv亚基可能与口蹄疫病毒的宿主范围有关。

关键词：口蹄疫病毒病毒受体猪αv基因序列分析

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亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒全长可读框的表达及其产物免疫原性分析

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科学通报 2007年第16期52卷 1903-1907页

作者：李志勇易咏竹殷相平张志芳柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 中国农业科学院生物技术研究所北京100081

将亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)全长约为6.9kb的可读框(ORF)克隆到家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中,构建重组家蚕杆状病毒转移质粒***-ORF与线性化的亲本病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕细胞,经空斑筛选后成功... 详细信息

将亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)全长约为6.9kb的可读框(ORF)克隆到家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中,构建重组家蚕杆状病毒转移质粒***-ORF与线性化的亲本病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕细胞,经空斑筛选后成功获得携带有FMDV全长ORF的重组病毒Bm-ORF.免疫荧光技术证明,重组病毒能够正确表达插入的外源基因.将获得的重组病毒Bm-ORF感染家蚕5龄起幼虫,双抗体夹心ELISA法和电子显微镜观察证明,目的基因在蚕体中获得较高水平表达并组装成空衣壳.用蚕表达产物作抗原制备疫苗免疫牛,免疫动物均产生了特异性抗体.免疫后21d进行病毒攻击保护实验,获得了2/4的完全保护.

关键词： FMDV ORF 家蚕杆状病毒载体免疫原性疫苗

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两种用于鉴别山羊痘病毒和绵羊痘病毒方法的应用与比较研究

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华北农学报 2009年第6期24卷 50-53页

作者：颜新敏张强吴国华李健朱海霞中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学开放实验室甘肃兰州730046

为探讨鉴别山羊痘病毒和绵羊痘病毒的分子生物学方法,对实验室分离保存的3株山羊痘病毒和2株绵羊痘病毒进行p32基因和GpCR基因扩增、克隆及序列分析。将获得的p32基因序列与GenBank上登陆的羊痘病毒p32基因进行HinfⅠ酶切位点分析表明,... 详细信息

为探讨鉴别山羊痘病毒和绵羊痘病毒的分子生物学方法,对实验室分离保存的3株山羊痘病毒和2株绵羊痘病毒进行p32基因和GpCR基因扩增、克隆及序列分析。将获得的p32基因序列与GenBank上登陆的羊痘病毒p32基因进行HinfⅠ酶切位点分析表明,所有绵羊痘病毒p32基因在391 bp和691 bp处存在2处酶切位点,而山羊痘病毒仅在688 bp处存在1个酶切位点。将获得的GpCR基因序列与GenBank上登录的31条相应序列进行系统进化树分析发现,根据GpCR基因序列信息可将绵羊痘病毒和山羊痘病毒分成两个独立的进化分枝。这些结果表明,利用p32基因的HinfⅠ酶切位点信息和对GpCR基因进行分子进化分析可鉴别山羊痘病毒和绵羊痘病毒,p32基因和GpCR基因可作为鉴别绵羊痘病毒和山羊痘病毒的特异性标记基因。

关键词： p32基因 GpCR基因山羊痘病毒绵羊痘病毒鉴别

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