检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2010年第11期32卷 889-891页

作者：颜新敏吴国华李健朱海霞朱彩珠张强中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学开放实验室甘肃兰州730046

为研究羊痘病毒结构蛋白的功能,本研究将羊痘病毒的ORF57、ORF95和ORF117分别克隆至pGEX4T-1原核表达载体后转染到大肠杆菌中。重组表达菌经1 mmol/L的IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳,结果显示3个重组蛋白均在原核细胞中获得有效表达。表... 详细信息

为研究羊痘病毒结构蛋白的功能,本研究将羊痘病毒的ORF57、ORF95和ORF117分别克隆至pGEX4T-1原核表达载体后转染到大肠杆菌中。重组表达菌经1 mmol/L的IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳,结果显示3个重组蛋白均在原核细胞中获得有效表达。表达产物经western blot分析,羊痘病毒特异性血清只能识别融合蛋白ORF57和ORF95,不能识别ORF117。本研究为重组诊断抗原的筛选和亚单位疫苗的研制奠定了基础。

关键词： ORF57 ORF95 ORF117 原核表达抗原性分析

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牛流行热病毒糖蛋白G_1抗原表位在毕赤酵母中的表达和抗原性鉴定

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微生物学通报 2007年第5期34卷 843-847页

作者：郑福英蔺国珍邱昌庆原魁章宋军英中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨150001

从包含牛流行热病毒G蛋白基因的质粒pMD-G中克隆G1抗原表位区基因,亚克隆进表达载体pPIC9K,构建重组载体pPIC9K-G1,线性化后电转化毕赤酵母GS115,通过G418压力和PCR法筛选阳性重组酵母进行诱导表达。经SDS-PAGE、脱糖基化分析、Western ... 详细信息

从包含牛流行热病毒G蛋白基因的质粒pMD-G中克隆G1抗原表位区基因,亚克隆进表达载体pPIC9K,构建重组载体pPIC9K-G1,线性化后电转化毕赤酵母GS115,通过G418压力和PCR法筛选阳性重组酵母进行诱导表达。经SDS-PAGE、脱糖基化分析、Western blot、ELISA、兔体免疫实验和特异性分析,表明该基因在GS115中表达并进行了适度的糖基化,表达蛋白有良好的生物学活性和特异性,可作为包被抗原,开发ELISA诊断试剂盒。

关键词：牛流行热病毒 G1抗原表位毕赤酵母表达鉴定

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整联蛋白受体介导的病毒感染作用

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中国人兽共患病学报 2009年第4期25卷 379-382页

作者：赵建勇独军正高闪电林彤邵军军丛国政伏小平常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

整联蛋白是一类由α亚基与β亚基以非共价键结合形成的αβ异源二聚体复合物,是一类重要的具有多种生物学功能的细胞膜黏附因子受体。主要介导细胞粘附和信号传导,并参与细胞的多种生理功能,如细胞的生长、发育、分化、凋亡等。整联蛋... 详细信息

整联蛋白是一类由α亚基与β亚基以非共价键结合形成的αβ异源二聚体复合物,是一类重要的具有多种生物学功能的细胞膜黏附因子受体。主要介导细胞粘附和信号传导,并参与细胞的多种生理功能,如细胞的生长、发育、分化、凋亡等。整联蛋白有多种配体其主要包括:细胞间配体,如细胞间黏附分子;细胞外基质配体,如粘连蛋白;血管细胞黏附配体,如血栓黏附分子-1。整联蛋白能识别多种病毒表面上特定的“精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp,RGD)序列”,在病毒吸附或感染细胞过程中具有重要的作用,其可作为腺病毒属、疱疹病毒属、微小核糖核酸病毒科、汉坦病毒属及呼肠孤病毒科等科属中的多种病毒的受体。[第一段]

关键词：整联蛋白受体介导病毒表面感染作用细胞间黏附分子微小核糖核酸病毒黏附分子-1 呼肠孤病毒科

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转录介导的扩增技术及其在诊断中的应用

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中国生物工程杂志 2010年第4期30卷 120-124页

作者：高闪电常惠芸独军政丛国正邵军军林彤中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

转录介导的扩增技术可以RNA或DNA为模板,利用RNA聚合酶和逆转录酶在约42°C等温反应条件下进行扩增,产物为RNA。该技术在每一循环可产生模板的100～1000个拷贝转录本,15～30min可将模板扩增约1010倍,在人类白细胞抗原等位基因分型... 详细信息

转录介导的扩增技术可以RNA或DNA为模板,利用RNA聚合酶和逆转录酶在约42°C等温反应条件下进行扩增,产物为RNA。该技术在每一循环可产生模板的100～1000个拷贝转录本,15～30min可将模板扩增约1010倍,在人类白细胞抗原等位基因分型、细菌和病毒的快速检测中发挥了重要作用。

关键词：转录介导的扩增技术恒温扩增诊断

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硫酸乙酰肝素受体介导的病毒感染作用

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中国人兽共患病学报 2008年第9期24卷 874-877页

作者：赵建勇独军政高闪电丛国正林彤邵军军伏小平常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

病毒受体多为蛋白聚糖、糖脂或脂、糖蛋白且以单个或多个分子的复合体形式才能存在,硫酸乙酰肝素(Heparan sulfate,HS)存在于细胞表面,是病毒特异性结合的主要糖蛋白受体,最初发现以硫酸乙酰肝素为受体的病毒是人类单纯疱疹病毒(HSV-1)... 详细信息

病毒受体多为蛋白聚糖、糖脂或脂、糖蛋白且以单个或多个分子的复合体形式才能存在,硫酸乙酰肝素(Heparan sulfate,HS)存在于细胞表面,是病毒特异性结合的主要糖蛋白受体,最初发现以硫酸乙酰肝素为受体的病毒是人类单纯疱疹病毒(HSV-1)和(HSV-2)。硫酸乙酰肝素可作为多种病毒的受体,其可与病毒的多个吸附位点结合,它作为病毒受体来介导病毒进入细胞特定的部位或促进病毒与其第二受体的吸附。[第一段]

关键词：硫酸乙酰肝素病毒受体受体介导感染作用人类单纯疱疹病毒 sulfate 糖蛋白受体特异性结合

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口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白αvβ6的细胞定位及组织分布

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畜牧兽医学报 2009年第4期40卷 533-537页

作者：赵建勇常惠芸独军政高闪电宋帅伏小平谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

利用pcDNA3.1(+)-β6p真核表达载体稳定转染CHOK1细胞,间接免疫荧光法(IFA)检测整联蛋白αvβ6在转染细胞中的表达分布。以间接免疫组化法(IHA)检测整联蛋白αvβ6在健康猪舌、唇、气管等组织的表达分布。采用抗猪源整联蛋白β6亚基的... 详细信息

利用pcDNA3.1(+)-β6p真核表达载体稳定转染CHOK1细胞,间接免疫荧光法(IFA)检测整联蛋白αvβ6在转染细胞中的表达分布。以间接免疫组化法(IHA)检测整联蛋白αvβ6在健康猪舌、唇、气管等组织的表达分布。采用抗猪源整联蛋白β6亚基的单克隆抗体作为一抗,FITC标记山羊抗小鼠IgG、辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG分别作为二抗。结果表明,pcDNA3.1(+)-β6p真核表达载体稳定转染的CHOK1细胞的细胞膜及细胞质内可见致密的绿色荧光(IFA),猪舌、唇、气管等组织细胞的细胞膜及细胞质内均出现了棕黄色的特异阳性反应物,表明整联蛋白αvβ6受体广泛分布于猪体的器官组织细胞中,为深入研究整联蛋白αvβ6在口蹄疫病毒感染过程中的作用奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒受体整联蛋白细胞定位组织分布

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非洲猪瘟病毒解旋酶D1133L基因序列分析、蛋白结构预测及亚细胞定位

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畜牧兽医学报 2021年第7期52卷 1953-1962页

作者：侯景申超超张大俊杨博史喜绢张婷崔卉梅袁兴国赵登率陈学辉张克山郑海学刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业农村部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

旨在通过预测分析和亚细胞定位研究非洲猪瘟病毒(ASFV)D1133L基因结构、亚细胞定位与功能间的关系。作者使用Mega6.0软件绘制了7株不同基因型的D1133L解旋酶和ASFV编码的其他5个解旋酶基因的系统进化树,使用EXPASY、PRABI和SWISS-MODEL... 详细信息

旨在通过预测分析和亚细胞定位研究非洲猪瘟病毒(ASFV)D1133L基因结构、亚细胞定位与功能间的关系。作者使用Mega6.0软件绘制了7株不同基因型的D1133L解旋酶和ASFV编码的其他5个解旋酶基因的系统进化树,使用EXPASY、PRABI和SWISS-MODEL软件预测了该基因所编码蛋白序列的二、三级结构;根据GenBank公布的ASFV序列(LR743116.1),合成D1133L基因并构建其重组真核表达质粒pCMV-D1133L,蛋白免疫印迹(Western blot,WB)验证该基因表达后,将重组质粒转染至PK-15细胞,应用间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)研究了该蛋白的亚细胞定位。结果表明,通过ASFV解旋酶的基因系统进化树,发现5种解旋酶基因均相对保守。D1133L基因全长3402 bp,表达的蛋白为124.63 ku,G+C含量为6.1%,A+T含量为10.6%;二级结构分析表明α螺旋占48.90%,扩展链占13.50%,无规卷曲为33.27%;三级结构分析表明六自由度结构(six degree of freedom,QMQE)为0.20,覆盖率84%,且预测以α螺旋为主的高级结构;通过LOCSVMPSI分析预测,显示D1133L蛋白定位于细胞核内与细胞质内的概率是相同的。WB结果显示pCMV-D1133L质粒正常表达,IFA试验证明ASFV编码的解旋酶D1133L同时分布于细胞核和细胞质。本研究通过对D1133L基因序列、结构功能预测,并通过IFA验证了D1133L亚细胞分布,为进一步揭示D1133L基因功能奠定了一定基础。

关键词：非洲猪瘟病毒解旋酶 D1133L基因序列分析结构预测亚细胞定位

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牛FMDV受体整合素β6亚基LBD的多克隆抗体制备及初步应用

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第7期24卷 696-698页

作者：独军政常惠芸高闪电王景锋赵建勇才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

目的:利用大肠杆菌表达牛FMDV受体整合素β6亚基的配体结合域(LBD)片段,纯化重组目的蛋白后制备兔多克隆抗体并对其进行初步应用。方法:以含有牛整合素β6亚基全长cDNA的质粒为模板PCR扩增得到β6LBD基因片段,与原核表达载体pGEX4T-1相... 详细信息

目的:利用大肠杆菌表达牛FMDV受体整合素β6亚基的配体结合域(LBD)片段,纯化重组目的蛋白后制备兔多克隆抗体并对其进行初步应用。方法:以含有牛整合素β6亚基全长cDNA的质粒为模板PCR扩增得到β6LBD基因片段,与原核表达载体pGEX4T-1相连,构建原核表达质粒pGEX/β6LBD,测序确认开放阅读框正确后,转化感受态细胞BL21(DE3),以IPTG诱导表达重组牛β6LBD融合蛋白。SDS-PAGE和Westernblot鉴定后提取包涵体,电泳分离纯化重组融合蛋白,免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,以ELISA、琼脂扩散实验、免疫组化鉴定该抗体的效价和特异性。结果:重组牛β6LBD融合蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,重组蛋白主要以包涵体形式表达,相对分子质量(Mr)约为45000。制备的兔多克隆抗体效价达1∶12800以上,该抗体可与牛舌上皮细胞中的抗原分子结合,具有很好的特异性。结论:实现了牛FMDV受体整合素β6亚基LBD的原核表达和抗体制备,为研究受体β6亚基在牛体内的分布及其在FMDV感染过程中的作用机制提供了工具。

关键词：牛FMDV受体 β6LBD 多克隆抗体免疫组化

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蛋白质芯片技术及其在病毒学研究中的应用

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中国农学通报 2010年第16期26卷 44-47页

作者：刘新生王永录中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

蛋白芯片技术作为蛋白组学研究中的一种新的技术,日益受到人们的关注。目前这一技术已经应用于病毒学研究的各个领域。随着该技术的不断完善,它将在病毒学研究中发挥越来越重要的作用。综述了蛋白芯片技术的原理、特点、种类及其检测方... 详细信息

蛋白芯片技术作为蛋白组学研究中的一种新的技术,日益受到人们的关注。目前这一技术已经应用于病毒学研究的各个领域。随着该技术的不断完善,它将在病毒学研究中发挥越来越重要的作用。综述了蛋白芯片技术的原理、特点、种类及其检测方法,并对该技术在病毒学研究中的应用及前景进行了阐述。

关键词：蛋白质芯片病毒学应用

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口蹄疫病毒OT株的全基因组序列测定及比较分析

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畜牧兽医学报 2012年第1期43卷 90-97页

作者：吕占禄王光祥尚佑军刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒病重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

参考GenBank上已发表的口蹄疫病毒(FMDV)全长基因组序列,设计了覆盖基因组全长的数对引物,通过RT-PCR方法对口蹄疫病毒OT株进行分段克隆及序列测定。结果表明不含poly(C)序列的OT株基因组全序列长8 142nt,开放读码框(ORF)长6 969nt、编... 详细信息

参考GenBank上已发表的口蹄疫病毒(FMDV)全长基因组序列,设计了覆盖基因组全长的数对引物,通过RT-PCR方法对口蹄疫病毒OT株进行分段克隆及序列测定。结果表明不含poly(C)序列的OT株基因组全序列长8 142nt,开放读码框(ORF)长6 969nt、编码2 322aa,5′UTR长1 004nt,3′UTR长93nt,3′UTR之后为23nt的poly(A)尾巴。应用分子生物学软件将OT株与FMDV其它参考毒株进行序列比对,并对其基因特征进行分析。结果显示,OT株的假结节(Pseudoknots)从第415—499位连续缺失85nt,但是其3A基因却未发生碱基的缺失。其VP1基因的核苷酸同源性与O/Akesu58、OMⅢ两株最高,但OT株在进化时间上要比O/Akesu58、OMIII早很多,其毒株起源和遗传衍化关系还需要进一步的关注。

关键词：口蹄疫病毒全基因组编码区分子生物学特性序列比对

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