检索结果-内蒙古大学图书馆

华北农学报 2009年第6期24卷 50-53页

作者：颜新敏张强吴国华李健朱海霞中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学开放实验室甘肃兰州730046

为探讨鉴别山羊痘病毒和绵羊痘病毒的分子生物学方法,对实验室分离保存的3株山羊痘病毒和2株绵羊痘病毒进行p32基因和GpCR基因扩增、克隆及序列分析。将获得的p32基因序列与GenBank上登陆的羊痘病毒p32基因进行HinfⅠ酶切位点分析表明,... 详细信息

为探讨鉴别山羊痘病毒和绵羊痘病毒的分子生物学方法,对实验室分离保存的3株山羊痘病毒和2株绵羊痘病毒进行p32基因和GpCR基因扩增、克隆及序列分析。将获得的p32基因序列与GenBank上登陆的羊痘病毒p32基因进行HinfⅠ酶切位点分析表明,所有绵羊痘病毒p32基因在391 bp和691 bp处存在2处酶切位点,而山羊痘病毒仅在688 bp处存在1个酶切位点。将获得的GpCR基因序列与GenBank上登录的31条相应序列进行系统进化树分析发现,根据GpCR基因序列信息可将绵羊痘病毒和山羊痘病毒分成两个独立的进化分枝。这些结果表明,利用p32基因的HinfⅠ酶切位点信息和对GpCR基因进行分子进化分析可鉴别山羊痘病毒和绵羊痘病毒,p32基因和GpCR基因可作为鉴别绵羊痘病毒和山羊痘病毒的特异性标记基因。

关键词： p32基因 GpCR基因山羊痘病毒绵羊痘病毒鉴别

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整联蛋白受体介导的病毒感染作用

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中国人兽共患病学报 2009年第4期25卷 379-382页

作者：赵建勇独军正高闪电林彤邵军军丛国政伏小平常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

整联蛋白是一类由α亚基与β亚基以非共价键结合形成的αβ异源二聚体复合物,是一类重要的具有多种生物学功能的细胞膜黏附因子受体。主要介导细胞粘附和信号传导,并参与细胞的多种生理功能,如细胞的生长、发育、分化、凋亡等。整联蛋... 详细信息

整联蛋白是一类由α亚基与β亚基以非共价键结合形成的αβ异源二聚体复合物,是一类重要的具有多种生物学功能的细胞膜黏附因子受体。主要介导细胞粘附和信号传导,并参与细胞的多种生理功能,如细胞的生长、发育、分化、凋亡等。整联蛋白有多种配体其主要包括:细胞间配体,如细胞间黏附分子;细胞外基质配体,如粘连蛋白;血管细胞黏附配体,如血栓黏附分子-1。整联蛋白能识别多种病毒表面上特定的“精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp,RGD)序列”,在病毒吸附或感染细胞过程中具有重要的作用,其可作为腺病毒属、疱疹病毒属、微小核糖核酸病毒科、汉坦病毒属及呼肠孤病毒科等科属中的多种病毒的受体。[第一段]

关键词：整联蛋白受体介导病毒表面感染作用细胞间黏附分子微小核糖核酸病毒黏附分子-1 呼肠孤病毒科

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口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白αvβ6的细胞定位及组织分布

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畜牧兽医学报 2009年第4期40卷 533-537页

作者：赵建勇常惠芸独军政高闪电宋帅伏小平谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

利用pcDNA3.1(+)-β6p真核表达载体稳定转染CHOK1细胞,间接免疫荧光法(IFA)检测整联蛋白αvβ6在转染细胞中的表达分布。以间接免疫组化法(IHA)检测整联蛋白αvβ6在健康猪舌、唇、气管等组织的表达分布。采用抗猪源整联蛋白β6亚基的... 详细信息

利用pcDNA3.1(+)-β6p真核表达载体稳定转染CHOK1细胞,间接免疫荧光法(IFA)检测整联蛋白αvβ6在转染细胞中的表达分布。以间接免疫组化法(IHA)检测整联蛋白αvβ6在健康猪舌、唇、气管等组织的表达分布。采用抗猪源整联蛋白β6亚基的单克隆抗体作为一抗,FITC标记山羊抗小鼠IgG、辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG分别作为二抗。结果表明,pcDNA3.1(+)-β6p真核表达载体稳定转染的CHOK1细胞的细胞膜及细胞质内可见致密的绿色荧光(IFA),猪舌、唇、气管等组织细胞的细胞膜及细胞质内均出现了棕黄色的特异阳性反应物,表明整联蛋白αvβ6受体广泛分布于猪体的器官组织细胞中,为深入研究整联蛋白αvβ6在口蹄疫病毒感染过程中的作用奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒受体整联蛋白细胞定位组织分布

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慢病毒载体及慢病毒介导的RNA干扰

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黑龙江畜牧兽医 2009年第2期 24-25页

作者：冯小明张杰刘永生陈豪泰马丽娜孙德惠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

慢病毒载体是高效的基因转导工具，能将外源基因序列稳定导入分裂期细胞和非分裂期细胞。将慢病毒载体与RNA干扰结合能在哺乳动物的各类细胞中特异性抑制同源基因的表达，它将是基因功能研究和基因治疗的有力手段。应用慢病毒载体进行... 详细信息

慢病毒载体是高效的基因转导工具，能将外源基因序列稳定导入分裂期细胞和非分裂期细胞。将慢病毒载体与RNA干扰结合能在哺乳动物的各类细胞中特异性抑制同源基因的表达，它将是基因功能研究和基因治疗的有力手段。应用慢病毒载体进行转基因动物的制备，转基因的效率将得到显著提高。慢病毒介导的RNA干扰具有高效、稳定、特异性强的特点，它能在哺乳动物的各类细胞、多种疾病的离体细胞中实现稳定的RNA干扰。该技术被广泛用于基因功能的研究，在疾病的基因治疗上也具有良好的前景。

关键词：慢病毒载体 RNA干扰

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副猪嗜血杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立与应用

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中国兽医科学 2009年第7期39卷 597-601页

作者：冯小明储岳峰贺英高鹏程赵萍郭晗樊祜卿逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

采用超声裂解的副猪嗜血杆菌菌体上清作为包被抗原,建立了检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法。通过对试验条件进行筛选优化,确定了最佳反应条件:抗原包被浓度80μg/mL,37℃作用2 h后4℃过夜包被,待检血清的稀释度为1∶320,抗原抗体... 详细信息

采用超声裂解的副猪嗜血杆菌菌体上清作为包被抗原,建立了检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法。通过对试验条件进行筛选优化,确定了最佳反应条件:抗原包被浓度80μg/mL,37℃作用2 h后4℃过夜包被,待检血清的稀释度为1∶320,抗原抗体反应时间为1 h,酶标二抗稀释度为1∶15000,作用时间为1 h,底物显色时间为15 min。待检血清S/N值≥2.5时判为阳性,S/N值<2.5时判为阴性。特异性、重复性和敏感性试验以及对200份送检血清的检测结果表明,建立的间接ELISA方法的特异性和重复性良好,敏感性比间接血凝试验高,可用于副猪嗜血杆菌的检疫和流行病学调查。

关键词：副猪嗜血杆菌抗体间接酶联免疫吸附试验

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O型口蹄疫病毒各编码基因及其产物变异率的分析

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华北农学报 2009年第1期24卷 60-63页

作者：周建华丛国正常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

将从Genbank中提出的20株O型FMDV的全基因组分割成12个编码区域,即Lab、VP4、VP2、VP3、VP1、2A、2B、2C、3A、3B、3C和3D。通过方差分析,12个编码序列的相对变异率之间无差异(P>0.05);而这12种编码序列所对应的氨基酸相对突变率之... 详细信息

将从Genbank中提出的20株O型FMDV的全基因组分割成12个编码区域,即Lab、VP4、VP2、VP3、VP1、2A、2B、2C、3A、3B、3C和3D。通过方差分析,12个编码序列的相对变异率之间无差异(P>0.05);而这12种编码序列所对应的氨基酸相对突变率之间差异显著(P<0.01)。利用Duncan法对这12种氨基酸序列相对突变率进行多重比较,发现3A蛋白的氨基酸相对突变率比其余11种蛋白的差异都显著(P<0.05);VP2、Lpro的氨基酸相对突变率与VP4、2A、2C、3Cpro、3Dpol之间存在差异(P<0.05);而VP4、2A、2C、3Cpro、3Dpol之间无差异。结果显示,O型FMDV自身RNA的转录和机体对FMDV施加的免疫压力不是造成FMDV变异的主要原因,而各种病毒产物的功能选择压力才是FMDV分子进化的主要原因。

关键词：口蹄疫病毒相对变异率方差分析 Duncan法

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猪源口蹄疫病毒China99/S株基因组全长cDNA的构建及其感染性鉴定

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畜牧兽医学报 2009年第2期40卷 213-220页

作者：常艳燕郑海学靳野王光祥尚佑军刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046 广东省农业科学院兽医研究所广州510640

提取猪源FMDV China99/S组织样品总RNA,利用设计的引物对,分段进行扩增,获得覆盖全基因组的4个重叠片段(A、B、C和E),然后用BsmBⅠ/XmaⅠ、XmaⅠ/BamHⅠ、BamHⅠ/NotⅠ、HpaⅠ/KpnⅠ分别双酶切A、B、E、C,并纯化回收,依次定向克隆到带... 详细信息

提取猪源FMDV China99/S组织样品总RNA,利用设计的引物对,分段进行扩增,获得覆盖全基因组的4个重叠片段(A、B、C和E),然后用BsmBⅠ/XmaⅠ、XmaⅠ/BamHⅠ、BamHⅠ/NotⅠ、HpaⅠ/KpnⅠ分别双酶切A、B、E、C,并纯化回收,依次定向克隆到带有聚合酶Ⅰ的pPⅠcDNA3.1(+)转录载体内,最终得到重组质粒pPⅠ-FMDVcDNA3.1(+);然后对该质粒进行序列测定。结果表明,China99/S株基因组全基因组序列长8 116 nt(含Poly(C)和Poly(A)片段),其中5′NCR长1 064 nt,蛋白编码区核苷酸序列为6 318 nt,编码1个由2 106个氨基酸组成的聚合蛋白,3′NCR长93 nt,其后是含有38个A碱基的Poly(A)尾。其中5′NCR引入含41个C的Poly(C)片段。将pPⅠFMDVcDNA3.1(+)用脂质体转染法导入BHK-21细胞,传代培养,可以观察到典型的FMDV致细胞病变效应。利用CPE、电镜、动物试验、RT-PCR和序列测定进行检测,结果表明,从该系统中成功拯救出具有感染性的猪源FMDV China99/S株重组病毒。

关键词：口蹄疫病毒全长cDNA克隆 Poly(C) 反向遗传学

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一种高效、稳定的可溶性原核表达载体的构建及应用

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华北农学报 2009年第6期24卷 46-49页

作者：高闪电常惠芸独军政丛国正邵军军林彤中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

以O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因重组克隆载体pGEM-OVP1为模板,设计表达引物,经PCR扩增获得上游带有PelB信号肽编码序列的VP1 C端编码区,将其克隆至该表达载体pET-30a(+)中,构建了可溶性原核表达载体pET-30a-PelB-VP1C。将VP1全长编码... 详细信息

以O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因重组克隆载体pGEM-OVP1为模板,设计表达引物,经PCR扩增获得上游带有PelB信号肽编码序列的VP1 C端编码区,将其克隆至该表达载体pET-30a(+)中,构建了可溶性原核表达载体pET-30a-PelB-VP1C。将VP1全长编码区替换VP1C,获得重组原核表达载体pET-30a-PelB-VP1。将两种重组质粒分别转化大肠杆菌工程菌株BL21-(DE3)-plysS,经IPTG诱导表达,实现了VP1全长及其C端的可溶性表达,以金属离子螯合层析法分别对表达的VP1及其C端融合蛋白进行纯化,SDS-PAGE显示纯化的目的蛋白分别在32 ku和20 ku处有单一目的条带,具有较高的纯度。Western blot分析,VP1蛋白及其C端均可与牛O型口蹄疫病毒阳性血清反应。对重组菌株的连续传代实验证实了该可溶性表达载体的遗传稳定性,显示了该可溶性原核表达载体在蛋白可溶性表达中的应用价值。

关键词：口蹄疫病毒原核表达可溶性信号肽

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口蹄疫新型疫苗研究进展

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微生物学通报 2009年第11期36卷 1750-1757页

作者：曹轶梅卢曾军田飞鹏刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

口蹄疫(FMD)是一种严重威胁畜牧业发展的重要传染病,目前世界上许多国家和地区都有该病的流行与发生。其控制措施主要是疫苗免疫,虽然传统疫苗在该病的防控中起了重要的作用,但也存在着诸多的缺点。因此研制新型的FMD疫苗是今后的发展... 详细信息

口蹄疫(FMD)是一种严重威胁畜牧业发展的重要传染病,目前世界上许多国家和地区都有该病的流行与发生。其控制措施主要是疫苗免疫,虽然传统疫苗在该病的防控中起了重要的作用,但也存在着诸多的缺点。因此研制新型的FMD疫苗是今后的发展方向。本文结合实验室在FMD新型疫苗研究方面所开展的探索性研究工作,综述了国内外在FMD基因工程弱毒苗或灭活苗、蛋白质和合成肽疫苗、空衣壳疫苗、细胞因子增强型疫苗等研究领域所取得的进展。

关键词：口蹄疫传统疫苗新型疫苗

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应用双重PCR方法检测羊支原体肺炎病原

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畜牧与兽医 2009年第12期41卷 23-26页

作者：储岳峰高鹏程赵萍贺英郭晗逯忠新赵海燕中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

通过对丝状支原体山羊亚种(*** ***,Mmc)特异性引物MmcF/MmcR和绵羊肺炎支原体(***,Mo)特异性引物LmF/LmR退火温度、引物浓度比例等条件的选择,建立了一个可以同时检测Mmc和Mo的双重PCR方法。该方法可同时扩增出Mmc 195 bp和Mo 361 bp... 详细信息

通过对丝状支原体山羊亚种(*** ***,Mmc)特异性引物MmcF/MmcR和绵羊肺炎支原体(***,Mo)特异性引物LmF/LmR退火温度、引物浓度比例等条件的选择,建立了一个可以同时检测Mmc和Mo的双重PCR方法。该方法可同时扩增出Mmc 195 bp和Mo 361 bp目的片段,但对其他病原菌不能扩增出任何条带,具有良好的特异性。敏感性试验表明,该方法能够分别检测出0.1ng的Mmc DNA和0.01 ng的Mo DNA,或同时检测出1ng Mmc和1ng Mo混合的DNA。用该双重PCR方法可对实验室保存的4株绵羊肺炎支原体和2株丝状支原体山羊亚种进行准确鉴定,并可从临床病料中检测出相应支原体,表明建立的双重PCR方法可用于Mmc和Mo的快速鉴定、实验室诊断和病原学调查。

关键词：丝状支原体山羊亚种绵羊肺炎支原体双重PCR 检测

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