检索结果-内蒙古大学图书馆

1—2月龄荷斯坦奶牛不同组织中FMDV受体亚基αv、β3、β6 mRNA转录水平的相对定量研究

中国农业科学 2010年第3期43卷 605-611页

作者：独军政常惠芸薛霜高闪电丛国正邵军军林彤包慧芳才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/国家口蹄疫参考实验室

【目的】建立检测牛口蹄疫病毒(FMDV)受体亚基αv、β3、β6 mRNA相对转录水平的实时定量PCR方法,分析受体αvβ3和αvβ6在不同器官组织中的转录水平。【方法】在对牛FMDV受体基因克隆和测序的基础上,设计实时定量PCR引物,以GAPDH为内... 详细信息

【目的】建立检测牛口蹄疫病毒(FMDV)受体亚基αv、β3、β6 mRNA相对转录水平的实时定量PCR方法,分析受体αvβ3和αvβ6在不同器官组织中的转录水平。【方法】在对牛FMDV受体基因克隆和测序的基础上,设计实时定量PCR引物,以GAPDH为内参基因,采用△△Ct相对定量PCR方法检测分析FMDV受体亚基αv、β3、β6 mRNA在1—2月龄荷斯坦奶牛体内不同器官组织中的转录表达谱。【结果】αvβ3在荷斯坦奶牛24种组织中均有不同程度的转录表达;αvβ6在甲状腺、硬腭、鼻内皮、喉头、肺、食管、肾、后蹄冠状带等组织表达量较高,在唇、舌皮、软腭、气管、心脏、瘤胃、直肠、前蹄冠状带等组织转录表达量适中,在唾液腺、下颌淋巴结、肝、脾、肌肉等组织未检测到表达;αvβ6在牛体内的表达分布与FMDV组织嗜性基本一致,αvβ6受体可能是决定FMDV组织嗜性的主要功能受体,αvβ3的组织分布似乎与FMDV组织嗜性无关,但不能排除αvβ3在病毒感染过程中的作用。【结论】建立了检测FMDV受体亚基mRNA在不同器官组织中表达水平的相对实时定量PCR方法。

关键词： FMDV受体 mRNA转录水平 SYBR Green I 荷斯坦奶牛

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山羊痘病毒温度敏感株基因组DNA复制非必需区的筛选

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中国兽医科学 2007年第9期37卷 737-741页

作者：施程洪张强吴国华颜新敏鞠厚斌李健朱海霞朱彩珠谢芳韩若婵才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

提取山羊痘病毒温度敏感株基因组DNA，用HindⅢ酶切，随机克隆到pUC18质粒中，限制性内切酶片段电泳分析和序列测定结果表明，克隆到4个不同大小的HindⅢ片段pUA、pUB、pUC和pUD。随后，将它们和羊痘病毒Pellor（AY077835）株进行了同... 详细信息

提取山羊痘病毒温度敏感株基因组DNA，用HindⅢ酶切，随机克隆到pUC18质粒中，限制性内切酶片段电泳分析和序列测定结果表明，克隆到4个不同大小的HindⅢ片段pUA、pUB、pUC和pUD。随后，将它们和羊痘病毒Pellor（AY077835）株进行了同源性比较，发现核苷酸同源性为90。0％～94．5％，氨基酸同源性为83．0％～91．4％。选取克隆或亚克隆后的单一酶切位点，插入P11P7.5-LacZ报告基因，构建了pUAl、pUBl、pUCl和pUDl共4个重组载体质粒。通过脂质体分别转染山羊痘病毒感染的BHK-21细胞，在X-gal存在条件下经蓝白斑筛选重组病毒，获得1株重组病毒，证明筛选出了1个复制非必需区片段。

关键词：山羊痘病毒非必需区基因克隆序列分析转染

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双重PCR快速鉴别羊痘病毒和羊口疮病毒

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中国人兽共患病学报 2008年第10期24卷 945-948页

作者：颜新敏张强吴国华李健朱海霞朱彩珠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

根据羊痘病毒的P32基因和羊口疮病毒H2L基因序列设计合成两对引物,建立了一种快速鉴别诊断羊痘病毒和羊口疮病毒的双重PCR方法。该方法可对羊痘病毒和羊口疮病毒分别扩增出969bp和507bp的特异性片段,对痘苗病毒等其它病原和健康羊皮肤... 详细信息

根据羊痘病毒的P32基因和羊口疮病毒H2L基因序列设计合成两对引物,建立了一种快速鉴别诊断羊痘病毒和羊口疮病毒的双重PCR方法。该方法可对羊痘病毒和羊口疮病毒分别扩增出969bp和507bp的特异性片段,对痘苗病毒等其它病原和健康羊皮肤组织不能扩增出任何片段。敏感性试验表明该方法可分别扩增出101.66TCID50山羊痘病毒和102.33TCID50羊口疮病毒。对从甘肃境内采集的11份临床病料进行检测,其中8份可扩增出969bp的羊痘病毒特异性片段,3份可扩增出507bp的羊口疮病毒特异性片段,与病毒分离鉴定结果一致。

关键词：双重PCR 鉴别诊断羊痘病毒羊口疮病毒

来源：评论

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山羊痘病毒A6L基因的克隆及序列分析

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中国畜牧兽医 2015年第8期42卷 1973-1978页

作者：赵银龙吴国华朱海霞吴健颜新敏赵志荀李健吴娜穆晓峰张强中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实室验兰州730046

为了分析山羊痘病毒A6蛋白的分子特征,本试验提取了山羊痘病毒古浪分离株的基因组DNA,设计引物进行PCR扩增,克隆A6L基因的DNA序列。将PCR产物连接到pGEM-T Easy载体后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆进行序列测定,利用生物... 详细信息

为了分析山羊痘病毒A6蛋白的分子特征,本试验提取了山羊痘病毒古浪分离株的基因组DNA,设计引物进行PCR扩增,克隆A6L基因的DNA序列。将PCR产物连接到pGEM-T Easy载体后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆进行序列测定,利用生物信息学软件对A6L基因序列进行预测分析。结果显示,A6L基因序列含有1个由1 128个核苷酸组成的开放阅读框,编码375个氨基酸残基组成的多肽,蛋白质分子质量的理论值为43.68ku,理论等电点为7.50。该蛋白的二级结构中,α螺旋占53.30%,β折叠占10.24%,其余39.46%为无规则卷曲。多序列比对分析结果显示,不同羊痘病毒分离株A6L序列高度保守,同源性在97%以上。上述研究结果为进一步研究A6蛋白的生物学功能和羊痘病毒早期蛋白的分子相互作用奠定了基础。

关键词：山羊痘病毒 A6L基因基因克隆序列分析

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口蹄疫表位疫苗的研究进展

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中国人兽共患病学报 2008年第6期24卷 570-573,591页

作者：张中旺张永光中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

口蹄疫（Foot-and—Mouth Disease，FMD）是偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病，被国际兽疫局列为头号A类传染病。该病传播途径多、传播速度快，曾多次在世界发生大流行。

关键词：口蹄疫表位疫苗国际兽疫局传播途径传播速度传染病接触性大流行

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口蹄疫病毒亚洲I型YNBS/58株P12A-3C转基因植物双元表达载体的构建

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中国人兽共患病学报 2006年第11期22卷 1059-1061,1064页

作者：王炜张永光王永录方玉珍潘丽蒋守田刘力宽孙元吕建亮智晓莹黄振华中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

目的双元载体是目前转基因植物工程普遍应用的载体,本文将口蹄疫病毒P12A基因、3C基因串联,构建植物表达载体pBin-438P12A-3C。方法为便于实验操作,本试验采用先将基因片段P12A、3C构建到一个中间质粒pcDNA3.1(+)的策略,构建成pcDNA3.1(... 详细信息

目的双元载体是目前转基因植物工程普遍应用的载体,本文将口蹄疫病毒P12A基因、3C基因串联,构建植物表达载体pBin-438P12A-3C。方法为便于实验操作,本试验采用先将基因片段P12A、3C构建到一个中间质粒pcDNA3.1(+)的策略,构建成pcDNA3.1(+)-P12A-3C。结果通过对构建好的pBin438-P12A-3C(Mini-Ti)重组质粒进行PCR鉴定和序列测定,证明中间表达载体构建成功。结论通过三亲杂交法将重组质粒载体pBin438-P12A-3C导入到农杆菌GV3101,通过抗性筛选、PCR鉴定和序列测定,证明构建成功,与农杆菌中的help-Ti质粒共同组成植物双元表达载体,为以后的植物转化奠定基础。

关键词：口蹄疫病毒转基因植物表达载体农杆菌

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参与小RNA病毒感染和复制的宿主及病毒蛋白功能研究进展

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中国人兽共患病学报 2013年第1期29卷 82-85,90页

作者：魏衍全郭慧琛徐进孙德惠孙世琪中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

阐明宿主和病毒间的相互作用对于理解病毒的复制、致病性和毒力至关重要,本文对小RNA病毒感染和复制过程中参与的宿主蛋白和病毒蛋白的功能最新研究进展做一综述。首先讨论病毒衣壳蛋白和宿主细胞受体间的相互作用,然后详述病毒复制过... 详细信息

阐明宿主和病毒间的相互作用对于理解病毒的复制、致病性和毒力至关重要,本文对小RNA病毒感染和复制过程中参与的宿主蛋白和病毒蛋白的功能最新研究进展做一综述。首先讨论病毒衣壳蛋白和宿主细胞受体间的相互作用,然后详述病毒复制过程中参与的病毒蛋白和宿主细胞蛋白。

关键词：小RNA病毒感染与复制病毒及宿主蛋白

来源：评论

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Asia1型口蹄疫病毒分离株P1基因的原核表达及其多克隆抗体的制备

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中国人兽共患病学报 2009年第10期25卷 973-976页

作者：张中旺张永光王永录潘丽张昱中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

目的原核表达口蹄疫病毒Asia1/HeB株衣壳蛋白前体P1基因并纯化。制备其兔多克隆抗体并进行鉴定。方法从重组克隆载体pGEM-P1中扩增编码P1区结构蛋白的基因片段。并克隆入原核表达载体pET-28a(+)中。原核表达与蛋白纯化后,免疫新西兰兔,... 详细信息

目的原核表达口蹄疫病毒Asia1/HeB株衣壳蛋白前体P1基因并纯化。制备其兔多克隆抗体并进行鉴定。方法从重组克隆载体pGEM-P1中扩增编码P1区结构蛋白的基因片段。并克隆入原核表达载体pET-28a(+)中。原核表达与蛋白纯化后,免疫新西兰兔,制备P1蛋白抗血清。抗体效价及特异性检测分别用间接ELISA和Westernblot法鉴定。结果在大肠杆菌中成功表达了分子量约为80.475kDa的P1蛋白。ELISA法检测抗血清的效价可达到1∶25600,Westernblot分析抗血清可与原核表达的P1蛋白特异性结合。结论在大肠杆菌中成功表达了口蹄疫病毒Asia1/HeB株衣壳蛋白前体,并制备了P1衣壳蛋白前体的抗血清,为进一步研究P1区结构蛋白的结构、功能以及抗原表位的确定奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1 原核表达多克隆抗体

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猪口蹄疫病毒受体β8亚基的基因克隆与分子特征

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畜牧兽医学报 2007年第11期38卷 1267-1272页

作者：独军政高闪电常惠芸丛国正邵军军林彤刘湘涛才学鹏谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

口蹄疫病毒利用整联蛋白作为病毒受体进入宿主细胞。本试验在国际上首次从口蹄疫病毒感染猪的舌皮组织中克隆到了β8亚基基因,并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列进行了比较分析。猪β8亚基基因的编码区含有2 304个核苷酸,编码767个氨... 详细信息

口蹄疫病毒利用整联蛋白作为病毒受体进入宿主细胞。本试验在国际上首次从口蹄疫病毒感染猪的舌皮组织中克隆到了β8亚基基因,并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列进行了比较分析。猪β8亚基基因的编码区含有2 304个核苷酸,编码767个氨基酸,其中信号肽由42个氨基酸组成,胞外域由637个氨基酸组成,含有7个潜在的糖基化位点(NXT/NXS)和49个半胱氨酸残基,跨膜区由30个氨基酸组成,胞浆域由58个氨基酸组成,猪β8基因与牛、人、犬、猕猴、家鼠和挪威大鼠的β8基因核苷酸序列同源性分别为94.3%、91.4%、91.7%、91.4%、83.5%、83.5%,推导的氨基酸序列同源性分别为95.0%、91.8%、92.8%、91.5%、84.0%、84.8%。猪与牛β8亚基同源性最高。猪β8亚基存在复杂多变的二级结构,其中1-42、680-709位氨基酸区段疏水性较强,形成表面蛋白结构的可能性较小,分别是该亚基的信号肽和跨膜区。本试验为进一步深入研究β8亚基在口蹄疫感染过程中所扮演的角色奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒受体猪β8基因分子特征

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生物传感器及其在兽医临床检测中的应用

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中国人兽共患病学报 2009年第2期25卷 183-187页

作者：张昱王永录中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

生物传感器技术是现代科技的前沿技术,是一种集现代生物技术与电子技术为一体的高科技产品,因其具有选择性好、灵敏度高、分析速度快、成本低、能在复杂环境中进行在线连续监测,特别是高度自动化、微型化与集成化等特点,从而获得蓬勃而... 详细信息

生物传感器技术是现代科技的前沿技术,是一种集现代生物技术与电子技术为一体的高科技产品,因其具有选择性好、灵敏度高、分析速度快、成本低、能在复杂环境中进行在线连续监测,特别是高度自动化、微型化与集成化等特点,从而获得蓬勃而迅速的发展,并在国民经济的各个领域如临床检测、生物医学、环境监测、食品、制药等方面得以广泛的应用。生物传感器的研究开发,[第一段]

关键词：生物传感器临床检测兽医现代生物技术环境监测传感器技术高科技产品现代科技

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