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第二届中国生物产业大会

作者：高闪电常惠芸独军政丛国正邵军军林彤中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州 730046

转录介导的扩增技术(TMA)是一种利用RNA聚合酶和逆转录酶在约42℃等温反应条件下来扩增RNA或DNA的系统,其原理是带有T7 RNA聚合酶识别的启动子序列的启动子引物与模板退火经反转录形成RNA-DNA杂交分子,被反转录酶的RNase H活性水解形成... 详细信息

转录介导的扩增技术(TMA)是一种利用RNA聚合酶和逆转录酶在约42℃等温反应条件下来扩增RNA或DNA的系统,其原理是带有T7 RNA聚合酶识别的启动子序列的启动子引物与模板退火经反转录形成RNA-DNA杂交分子,被反转录酶的RNase H活性水解形成单链DNA,然后与引物2退火,通过反转录合成双链DNA,在T7 RNA聚合酶的作用下转录,由一分子DNA模板可得到100～1000拷贝转录本,在15～30min内可将靶序列扩增1010左右.TINA是比较敏感的核酸扩增技术，其检测比较简便，适合高通量筛选，在人类白细胞抗原等位基因分型、细菌和病毒的快速检测中发挥了重要作用。本文就转录介导的扩增技术在诊断中的应用进行论述.

关键词：转录介导扩增技术 RNA聚合酶逆转录酶快速检测

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AsiaⅠ/JQ株空衣壳疫苗对AsiaⅠ型FMDV两株不同毒株免疫效果的测定

AsiaⅠ/JQ株空衣壳疫苗对AsiaⅠ型FMDV两株不同毒株免疫效果的测定

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首届中国兽药大会暨中国畜牧兽医学会动物药品学分会2008年学术年会

作者：李志勇殷相平易咏竹张志芳柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室，兰州 730046 中国农业科学院生物技术研究所，北京 100081

本文利用家蚕杆状病毒表达系统表达了与FMDV空衣壳形成相关的P1-2A, 3C基因，并将获得的空衣壳抗原制备成空衣壳疫苗。在此基础上，按照OIE指定的半量保护率(PD50)测定方法进行疫苗的免疫效力实验，为空衣壳疫苗的最终应用提供依据。

关键词： FMDV空衣壳家蚕杆状病毒载体表达系统疫苗免疫免疫效力实验

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提高核酸疫苗免疫效果的策略

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动物医学进展 2008年第12期29卷 100-105页

作者：张继乐张杰刘永生高云英孙德惠陈豪泰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 西北农林科技大学动物医学院陕西杨陵712100

核酸疫苗因能诱导机体产生保护性免疫,且具有安全、热稳定性、价廉等优点而受到高度重视,如何提高核酸疫苗的免疫效果一直是核酸疫苗研究的热点和难点问题。文章主要从优化方法着手,就核酸疫苗研制中质粒载体的构建、抗原加工分子的联... 详细信息

核酸疫苗因能诱导机体产生保护性免疫,且具有安全、热稳定性、价廉等优点而受到高度重视,如何提高核酸疫苗的免疫效果一直是核酸疫苗研究的热点和难点问题。文章主要从优化方法着手,就核酸疫苗研制中质粒载体的构建、抗原加工分子的联合应用、接种途径和剂量以及核酸疫苗在禽病上的应用做一综述。

关键词：核酸疫苗质粒构建接种途径家禽

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连环恒温扩增技术及其在临床诊断中的应用

连环恒温扩增技术及其在临床诊断中的应用

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第二届中国生物产业大会

作者：高闪电常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室子兰州 730046

连环恒温扩增技术(LAMP)利用针对靶基因的6个区域设计4条特异引物：正向内侧引物(FIP)、正向外侧引物(F3)、反向内侧引物(BIP)、反向外侧引物(B3),利用一种链置换活性DNA聚合酶、底物(dNTP)及反应缓冲液,在恒温65℃左右保温几十min,即... 详细信息

连环恒温扩增技术(LAMP)利用针对靶基因的6个区域设计4条特异引物：正向内侧引物(FIP)、正向外侧引物(F3)、反向内侧引物(BIP)、反向外侧引物(B3),利用一种链置换活性DNA聚合酶、底物(dNTP)及反应缓冲液,在恒温65℃左右保温几十min,即可完成核酸扩增反应.如果再设计两条环状引物Loop F和Loop B,可加速扩增反应.该方法既可对DNA进行扩增,也可对RNA进行扩增.作为一种简便、快速、高的特异的基因扩增法，LAMP法在食品卫生质量检验、动物胚胎早期鉴定、临床疾病诊断等领域展现了广阔的应用前景.本文就连环恒温扩增技术在临床诊断中的应用进行论述.

关键词：连环恒温扩增技术临床诊断 DNA聚合酶特异引物

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H9N2亚型禽流感病毒NA基因的原核表达及其免疫反应性分析

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甘肃农业大学学报 2008年第3期43卷 29-32页

作者：易华山侯顺利独军政胡永浩包世俊常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

采用PCR方法扩增H9N2亚型禽流感病毒A/Ck/GS/2/99株NA基因(1 400 bp),克隆至pET-28a(+)载体上,构建重组原核表达载体pET-NA,转化***21(DE3)感受态细胞,以终浓度0.8 mmol/L的IPTG诱导表达8 h.表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析表明:... 详细信息

关键词：禽流感血凝素原核表达 H9N2 免疫反应性

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检测猪血清口蹄疫病毒非结构蛋白3AB抗体ELISA方法的建立

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甘肃农业大学学报 2008年第1期43卷 33-37页

作者：祝秀梅卢曾军胡永浩曹轶梅马江涛刘在新甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

用大肠杆菌表达的FMDV NSP 3AB经纯化后作为抗原,建立了3AB间接ELISA方法,该方法可用于判定被检动物是否感染了口蹄疫病毒.重组口蹄疫病毒非结构蛋白3AB作为检测抗原包被酶标板反应孔,以兔抗猪IgG/HRP酶结合物作为第2抗体,建立了抗非结... 详细信息

用大肠杆菌表达的FMDV NSP 3AB经纯化后作为抗原,建立了3AB间接ELISA方法,该方法可用于判定被检动物是否感染了口蹄疫病毒.重组口蹄疫病毒非结构蛋白3AB作为检测抗原包被酶标板反应孔,以兔抗猪IgG/HRP酶结合物作为第2抗体,建立了抗非结构蛋白抗体检测的方法.用该方法检测了大量不同背景的猪血清,并与3ABC-I-ELISA检测结果进行比较.结果表明:3AB-I-ELISA和3ABC-I-ELISA的总符合率为98.9%,而且3AB-I-ELISA的特异性高于3ABC-I-ELISA.

关键词： 3AB-I-ELISA 3ABC-I-ELISA 口蹄疫病毒非结构蛋白3AB

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口蹄疫病毒双效疫苗载体的构建及其体外表达研究

口蹄疫病毒双效疫苗载体的构建及其体外表达研究

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2008年中国微生物学会学术年会

作者：杨彬兰喜殷相平李学瑞李宝玉方玉萍柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃农业大学动物医学院

用RT-PCR法获得了针对口蹄疫病毒(FMDV)基因组5’非编码区内包含病毒复制起始元件的基因片段ASCN及其VP1结构蛋白基因,将其分别克隆至双顺反子表达载体pIRES中,构建成了双表达质粒pASCN-IR-VP1,经酶切、PCR及DNA测序分析表明ASCN及VP1...

用RT-PCR法获得了针对口蹄疫病毒(FMDV)基因组5’非编码区内包含病毒复制起始元件的基因片段ASCN及其VP1结构蛋白基因,将其分别克隆至双顺反子表达载体pIRES中,构建成了双表达质粒pASCN-IR-VP1,经酶切、PCR及DNA测序分析表明ASCN及VP1基因已正确地插入到pIRES中,编码序列及插入方向均正确。用脂质体介导法将双效表达质粒导入BHK-21细胞后,经RT-PCR、实时荧光定量PCR检测表明双效表达质粒中的ASCN在细胞中得到了有效转录,

关键词：

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表达狂犬病毒糖蛋白和核蛋白的重组腺病毒的生物学特性及免疫研究

表达狂犬病毒糖蛋白和核蛋白的重组腺病毒的生物学特性及免疫研究

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首届中国兽药大会暨中国畜牧兽医学会动物药品学分会2008年学术年会

作者：殷相平李志勇李学瑞李宝玉兰喜杨彬柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所，家畜疫病病原生物学国家重点实验室，农业部畜禽病毒学重点开放实验室，农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046甘肃农业大学动物医学院，甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所，家畜疫病病原生物学国家重点实验室，农业部畜禽病毒学重点开放实验室，农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

将含有狂犬病毒G+N的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/G+N与腺病毒骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌细胞内同源重组，获得带有目的基因的重组腺病毒载体pAd/G+N。将重组腺病毒载体经PacI酶切后转染HEK-293细胞获得带有目的基因的重组腺病毒。重组... 详细信息

将含有狂犬病毒G+N的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/G+N与腺病毒骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌细胞内同源重组，获得带有目的基因的重组腺病毒载体pAd/G+N。将重组腺病毒载体经PacI酶切后转染HEK-293细胞获得带有目的基因的重组腺病毒。重组腺病毒在HEK-293细胞中连续传代15代次，病毒在细胞的病变时间缩短在20h以内。经测定，重组腺病毒对HEK-293细胞的TCID50达10-7.50/ml。用RT-PCR对重组腺病毒进行检测，可以检测到狂犬病毒糖蛋白和核蛋白基因片段。重组腺病毒经口服免疫小白鼠，21天后用狂犬病毒CVS毒株进行脑内攻击，观察10天，免疫保护率达60％。

关键词：狂犬病毒 CVS毒株重组腺病毒生物学特性免疫保护糖蛋白核蛋白

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表达狂犬病毒糖蛋白和核蛋白的重组腺病毒的生物学特性及免疫研究

表达狂犬病毒糖蛋白和核蛋白的重组腺病毒的生物学特性及免疫研究

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首届中国兽药大会——兽医生物制品学、兽医微生物学学术论坛

作者：殷相平李志勇李学瑞李宝玉兰喜杨彬柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃农业大学动物医学院

将含有狂犬病毒G+N的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/G+N与腺病毒骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌细胞内同源重组,获得带有目的基因的重组腺病毒载体pAd/G+N。将重组腺病毒载体经PacⅠ酶切后转染HEK-293细胞获得带有目的基因的重组腺病毒。重组... 详细信息

将含有狂犬病毒G+N的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/G+N与腺病毒骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌细胞内同源重组,获得带有目的基因的重组腺病毒载体pAd/G+N。将重组腺病毒载体经PacⅠ酶切后转染HEK-293细胞获得带有目的基因的重组腺病毒。重组腺病毒在HEK-293细胞中连续传代15代次,病毒在细胞的病变时间缩短在20h以内。经测定,重组腺病毒对HEK-293细胞的TCID达10/ml。用RT-PCR对重组腺病毒进行检测,可以检测到狂犬病毒糖蛋白和核蛋白基因片段。重组腺病毒经口服免疫小白鼠,21天后用狂犬病毒CVS毒株进行脑内攻击,观察10天,免疫保护率达60%。

关键词：狂犬病毒重组腺病毒生物学特性免疫

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鸡源鹦鹉热衣原体MOMP基因重组腺病毒的稳定性及SPF雏鸡免疫试验

鸡源鹦鹉热衣原体MOMP基因重组腺病毒的稳定性及SPF雏鸡免疫试验

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中国畜牧兽医学会2008年学术年会暨第一届中国兽医临床大会

作者：周继章邱昌庆张小英蔺国珍曹小安张琳程淑敏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开发实验室，甘肃兰州 730046 兰州市动物检疫站，甘肃兰州 730050

禽衣原体病是由嗜性鹦鹉热衣原体感染禽类而引起的一种疾病。鹦鹉热衣原体感染大部分宠物鸟、家禽(包括火鸡、鸭、鹅、鸡以及相关的家养品种)和野鸟。在家禽中，大爆发也经常发生在火鸡场和鸭场，并且导致人的感染。目前国内外尚无商业... 详细信息

禽衣原体病是由嗜性鹦鹉热衣原体感染禽类而引起的一种疾病。鹦鹉热衣原体感染大部分宠物鸟、家禽(包括火鸡、鸭、鹅、鸡以及相关的家养品种)和野鸟。在家禽中，大爆发也经常发生在火鸡场和鸭场，并且导致人的感染。目前国内外尚无商业化疫苗预防禽衣原体病，而化药防治本病存在成本高、食品安全隐患等系列问题。因此，为了控制本病，保护人类健康，促进养禽业的发展，研究和开发高效、低廉的疫苗势在必行。本研究是将重组腺病毒质粒在HEK293细胞中连续传代21代，并用PCR法检测目的基因;结果表明重组腺病毒质粒在HEK293细胞中连续传代后，仍然用PCR检测能检测出目的基因，并且目的基因的氨基酸序列没有发生改变，说明目的基因能够在重组腺病毒活载体体中稳定传代。

关键词：鹦鹉热衣原体感染重组腺病毒稳定性免疫试验家禽禽衣原体病

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