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禽流感病毒H5N2亚A/Chicken/Gansu/2003株HA+NA基因重组腺病毒的构建

禽流感病毒H5N2亚A/Chicken/Gansu/2003株HA+NA基因重组腺病毒的...

2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：李宝玉殷相平李学瑞兰喜杨斌方玉萍柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开发实验室兰州 730046

目的：基于腺病毒可感染禽类呼吸道和肠道上皮黏膜的特性，本文构建了包含有禽流感病毒H5N2亚型HA和NA基因的重组腺病毒，为进一步研制口服禽流感活载体疫苗奠定基础。方法：通过RT-PCR方法分别扩增出AIV的HA和NA全基因片段，利用... 详细信息

目的：基于腺病毒可感染禽类呼吸道和肠道上皮黏膜的特性，本文构建了包含有禽流感病毒H5N2亚型HA和NA基因的重组腺病毒，为进一步研制口服禽流感活载体疫苗奠定基础。方法：通过RT-PCR方法分别扩增出AIV的HA和NA全基因片段，利用拼接接头将HA和NA定向串联并插入到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV之中，然后在大肠杆菌中实现腺病毒骨架载体pAdEasy-1和重组腺病毒穿梭载体的同源重组，获得插有外源基因的重组腺病毒质粒，进而通过转染HEK293细胞，得到含有目的基因HA和NA的重组腺病毒。结果:在pAdTrack-CMV载体中成功克隆了HA+NA双基因，并与腺病毒骨架载体在大肠杆菌中实现了同源重组;线性化后的重组腺病毒质粒转染HEK293细胞后可观察到典型的细胞病变和绿色荧光蛋白的表达。结论:成功获得了含有HA+NA双基因重的组腺病毒，为口服活载体疫苗的研制提供了依据。

关键词：禽流感病毒重组腺病毒同源重组

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口蹄疫病毒3C蛋白酶的结构及功能研究进展

口蹄疫病毒3C蛋白酶的结构及功能研究进展

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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：杨彬兰喜殷相平李学瑞李宝玉方玉萍柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州 730046

口蹄疫病毒能引起牛、羊等偶蹄动物发生高度接触性的传染病口蹄疫，该病常常影响着全球畜牧业的发展。 FMDV是小RNA病毒科口蹄疫病毒属的成员，口蹄疫病毒为单股正链RNA病毒，病毒基因组全长约8.5kb，基因组分为5'非编码区、3&#... 详细信息

口蹄疫病毒能引起牛、羊等偶蹄动物发生高度接触性的传染病口蹄疫，该病常常影响着全球畜牧业的发展。 FMDV是小RNA病毒科口蹄疫病毒属的成员，口蹄疫病毒为单股正链RNA病毒，病毒基因组全长约8.5kb，基因组分为5'非编码区、3'非编码区和一个开放阅读框(ORF)。基因组的中部是一大的开放阅读框，编码一多聚蛋白，多聚蛋白在翻译的同时，经二级裂解后，形成3种病毒结构蛋白(VP0，VP3，VP1)和8种非结构蛋白(L，2A，2B，2C，3A，3B，3C和3D)。其中3C全长639nt，编码213个氨基酸。3C蛋白酶是小RNA病毒的共同裂解酶，在多聚蛋白成熟过程中起着极为重要的作用，且在抗病毒药物打靶方面具有一定研究价值。因此，对3C蛋白酶的结构及功能研究进展进行综述很有必要。

关键词：蛋白酶口蹄疫病毒多聚蛋白

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奶牛流产衣原体OmpA抗原间接ELISA方法的建立

奶牛流产衣原体OmpA抗原间接ELISA方法的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：邱昌庆宋竹青中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室/农业部公共卫生重点开放实验室

为建立间接ELISA方法以诊断奶牛衣原体病,本研究以表达纯化的奶牛流产衣原体外膜蛋白A(OmpA)为抗原,摸索出最佳反应条件,确定了阴阳性临界值,并通过特异性,敏感性,重复性,稳定性和对比试验,最终确定了奶牛衣原体病间接ELISA检测方法。... 详细信息

为建立间接ELISA方法以诊断奶牛衣原体病,本研究以表达纯化的奶牛流产衣原体外膜蛋白A(OmpA)为抗原,摸索出最佳反应条件,确定了阴阳性临界值,并通过特异性,敏感性,重复性,稳定性和对比试验,最终确定了奶牛衣原体病间接ELISA检测方法。通过对206份田间血清样品的检测表明,该方法与间

关键词：流产衣原体 ELISA

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猪传染性胸膜肺炎疫苗的研究进展

猪传染性胸膜肺炎疫苗的研究进展

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会

作者：贺英赵萍储岳峰高鹏程张建军逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病痛原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

猪传染性胸膜肺炎是猪高度接触性呼吸道疾病,直接造成养猪业的较大经济损失,故掌握猪传染性胸膜肺疫苗的研究进展为进一步有效预防和控制猪传染性胸膜肺炎疾病奠定基础。所以本文就其疫苗的研究进展作了综述。

关键词：猪传染性胸膜肺炎疫苗

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A型口蹄疫病毒空衣壳抗原的表达及其产物免疫原性分析

A型口蹄疫病毒空衣壳抗原的表达及其产物免疫原性分析

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中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会（第三届中国兽药大会学术论坛）

作者：李志勇易咏竹殷相平张韵刘明张志芳柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室中国农业科学院生物技术研究所

将口蹄疫病毒A/WH株P1-2A、3C基因克隆到家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中,构建重组家蚕杆状病毒转移质粒pVL-P12A3C。pVL-P12A3C-与线性化的亲本病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕细胞,经空斑筛选后成功获得了携带有目的基因的重组病毒rBm（P... 详细信息

将口蹄疫病毒A/WH株P1-2A、3C基因克隆到家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中,构建重组家蚕杆状病毒转移质粒pVL-P12A3C。pVL-P12A3C-与线性化的亲本病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕细胞,经空斑筛选后成功获得了携带有目的基因的重组病毒rBm（P12A3C）。将获得的重组病毒rBm（P12A3C）感染家蚕蚕蛹,通过双抗体夹心ELISA法证明目的基因在蚕体中获得极高水平表达。用蚕表达产物作抗原制备成疫苗免疫牛,免疫动物均产生了特异性抗体。免疫后21天用同源强毒攻击,其PD值达到4.33PD/头份。

关键词： FMDV 家蚕杆状病毒载体疫苗

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Asia I/JQ株空衣壳疫苗对AsiaⅠ型FMDV两株不同毒株免疫效果的测定

Asia I/JQ株空衣壳疫苗对AsiaⅠ型FMDV两株不同毒株免疫效果的测定

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首届中国兽药大会——兽医生物制品学、兽医微生物学学术论坛

作者：李志勇殷相平易咏竹张志芳柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室中国农业科学院生物技术研究所

将口蹄疫病毒AsiaⅠ/JQ株P1-2A、3C基因克隆到家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中,构建重组家蚕杆状病毒转移质粒pVL-P12A3C。pVL-P12A3C与线性化的亲本病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕细胞,经空斑筛选后成功获得了携带有目的基因的重组病毒rB... 详细信息

将口蹄疫病毒AsiaⅠ/JQ株P1-2A、3C基因克隆到家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中,构建重组家蚕杆状病毒转移质粒pVL-P12A3C。pVL-P12A3C与线性化的亲本病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕细胞,经空斑筛选后成功获得了携带有目的基因的重组病毒rBm（P12A3C）。将获得的重组病毒rBm（P12A3C）感染家蚕蚕蛹,通过双抗体夹心ELISA法证明目的基因在蚕体中获得极高水平表达。用蚕表达产物作抗原制备成疫苗免疫牛,免疫动物均产生了特异性抗体。免疫后21天分别用AsiaⅠ/AKT/03和AsiaⅠ/JSL/06攻击,其PD50值达到6.54 PD/头份、5.20 PD/头份。

关键词： FMDV 家蚕杆状病毒载体疫苗

来源：评论

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口蹄疫病毒双效疫苗载体的构建及其体外表达研究

口蹄疫病毒双效疫苗载体的构建及其体外表达研究

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首届中国兽药大会暨中国畜牧兽医学会动物药品学分会2008年学术年会

作者：杨彬兰喜殷相平李学瑞李宝玉方玉萍柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室／农业部畜禽病毒学重点开放实验室，甘肃兰州 730046

用RT-PCR法获得了针对口蹄疫病毒(FMDV)基因组5'非编码区内包含病毒复制起始元件的基因片段ASCN及其结构蛋白VP1基因，将其分别克隆至双顺反子表达载体pIRES中，构建成了双表达质粒pASCN-IR-VP1经酶切、PCR及DNA测序分析表明ASCN及... 详细信息

用RT-PCR法获得了针对口蹄疫病毒(FMDV)基因组5'非编码区内包含病毒复制起始元件的基因片段ASCN及其结构蛋白VP1基因，将其分别克隆至双顺反子表达载体pIRES中，构建成了双表达质粒pASCN-IR-VP1经酶切、PCR及DNA测序分析表明ASCN及VP1基因已正确地插入到pIRES中，编码序列及插入方向均正确。用脂质体介导法将双效表达质粒导入BHK-21细胞后，经RT-PCR、实时荧光定量PCR检测表明双效表达质粒中的ASCN在细胞中得到了有效转录，mRNA的表达量达到了1.27x106个拷贝/μL。;经夹心ELISA及间接免疫荧光标记等试验表明VP1结构蛋白基因在BHK-21细胞中得到了表达，具有良好的生物学活性。双效质粒pASCN-IR-VPI转染IBRS-2细胞24h后，按100TCID50/0.1mL的量接FMDVOMⅢ毒，结果该质粒能够明显地抑制FMDV的复制，使病变时间推迟约16～18h，接毒48h时的抑制率达到60％以上，蚀斑减少试验也证实了该双效质粒的病毒抑制作用。研究结果表明成功构建了FMDV双效表达载体，为进一步研究双效疫苗免疫效力提供了前期基础。

关键词：口蹄疫病毒反义RNA pIRES 双效疫苗载体疫苗免疫效力实时荧光定量PCR检测

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PolyI:C和R848对口蹄疫疫苗免疫效力的增强作用研究

PolyI:C和R848对口蹄疫疫苗免疫效力的增强作用研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：李冬白兴文谢宝霞刘在新周春雪陈应理孙普卢曾军曹轶梅付元芳包慧芳李平花中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

将2种Toll样受体激动剂PolyI:C和R848,与口蹄疫灭活抗原混合后,再与矿物油佐剂乳化,并免疫猪,经猪的口蹄疫免疫攻毒试验,PD50明显提高,说明这2种激动剂可增强口蹄疫疫苗的免疫效力.

关键词：猪传染病口蹄疫疫苗 Toll样受体激动剂免疫效力

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基因芯片技术及口蹄疫病毒基因芯片研究进展

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动物医学进展 2007年第B08期28卷 37-40页

作者：王建东郭建宏杨春生刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室宁夏动物防疫站宁夏银川750001

口蹄疫的暴发与流行给世界各国的畜牧生产、社会经济和国际贸易构成严重威胁并造成巨大的经济损失,经典的血清学和PCR检测方法越来越不适应进出口动物检疫的快速、准确、高通量的要求。建立一种快速的诊断方法,使其在很短时间能够区别... 详细信息

口蹄疫的暴发与流行给世界各国的畜牧生产、社会经济和国际贸易构成严重威胁并造成巨大的经济损失,经典的血清学和PCR检测方法越来越不适应进出口动物检疫的快速、准确、高通量的要求。建立一种快速的诊断方法,使其在很短时间能够区别各血清型口蹄疫和其他水泡性疾病是非常必要的。口蹄疫病毒基因芯片包括155个寡核苷酸探针,总长35bp～45bp,设计在VP3-VP1-2A区,既有共有的病毒型别,也包含特异的血清型别。这项技术的优点是能在单一的芯片上检测多元病原体。

关键词：口蹄疫病毒基因芯片检测

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口蹄疫分子标记疫苗研究报告

口蹄疫分子标记疫苗研究报告

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：刘在新陈应理谢宝霞曹轶梅王永录罗建勋刘湘涛张永光谢庆阁卢曾军李平花白兴文殷宏李冬孙普包慧芳付元芳中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

口蹄疫是严重危害中国畜牧业发展的重大动物疫病,疫苗免疫和精准区分免疫和自然感染动物,筛查并淘汰染毒家畜,是预防和控制口蹄疫的关键措施,也是中国口蹄疫防控的主要策略.针对目前广泛使用的传统口蹄疫灭活疫苗,因纯化不完全,免疫后,... 详细信息

口蹄疫是严重危害中国畜牧业发展的重大动物疫病,疫苗免疫和精准区分免疫和自然感染动物,筛查并淘汰染毒家畜,是预防和控制口蹄疫的关键措施,也是中国口蹄疫防控的主要策略.针对目前广泛使用的传统口蹄疫灭活疫苗,因纯化不完全,免疫后,以检测病毒非结构蛋白抗体为金标准的鉴别技术,难以精准区别免疫和感染动物,既使使用先进的纯化技术,也不能完全清除与灭活病毒大小相同的非结构蛋白复合物,多次免疫后,仍能检测到病毒非结构蛋白抗体,给精准区别免疫动物和感染动物带来了困难,严重阻碍口蹄疫流行病学监测和疫源净化,已成为全球口蹄疫控制计划实施的技术障碍,引起了世界动物卫生组织和口蹄疫控制机构的关注.鉴于此,能精准区别免疫动物和感染动物的标记疫苗成为了研究热点.采用反向遗传学技术,构建带有口蹄疫病毒非结构蛋白优势表位缺失的标记病毒,是研制口蹄疫标记疫苗的最优途径.

关键词：口蹄疫疫苗研制分子标记表位缺失反向遗传学

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