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第二届中国生物产业大会

作者：高闪电常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室子兰州 730046

连环恒温扩增技术(LAMP)利用针对靶基因的6个区域设计4条特异引物：正向内侧引物(FIP)、正向外侧引物(F3)、反向内侧引物(BIP)、反向外侧引物(B3),利用一种链置换活性DNA聚合酶、底物(dNTP)及反应缓冲液,在恒温65℃左右保温几十min,即... 详细信息

连环恒温扩增技术(LAMP)利用针对靶基因的6个区域设计4条特异引物：正向内侧引物(FIP)、正向外侧引物(F3)、反向内侧引物(BIP)、反向外侧引物(B3),利用一种链置换活性DNA聚合酶、底物(dNTP)及反应缓冲液,在恒温65℃左右保温几十min,即可完成核酸扩增反应.如果再设计两条环状引物Loop F和Loop B,可加速扩增反应.该方法既可对DNA进行扩增,也可对RNA进行扩增.作为一种简便、快速、高的特异的基因扩增法，LAMP法在食品卫生质量检验、动物胚胎早期鉴定、临床疾病诊断等领域展现了广阔的应用前景.本文就连环恒温扩增技术在临床诊断中的应用进行论述.

关键词：连环恒温扩增技术临床诊断 DNA聚合酶特异引物

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猪戊型肝炎病毒分子生物学与流行病学研究进展

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中国动物传染病学报 2010年第5期18卷 67-73页

作者：郝宝成兰喜刑小勇项海涛胡永浩柳纪省梁剑平中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所新兽药工程重点实验室兰州730050 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)是20世纪80年代发现的又一新型肝炎病毒,近年来对戊型肝炎病毒病原学、流行病学、实验室诊断、基因结构等方面研究取得了重大进展,本文就HEV的形态、基因分型、分子生物学特性、戊型肝炎(Hepatitis ... 详细信息

戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)是20世纪80年代发现的又一新型肝炎病毒,近年来对戊型肝炎病毒病原学、流行病学、实验室诊断、基因结构等方面研究取得了重大进展,本文就HEV的形态、基因分型、分子生物学特性、戊型肝炎(Hepatitis E,HE)的流行病学特点作一简要概述。

关键词：戊型肝炎病毒形态基因分型分子生物学特性流行病学

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OMⅢ株口蹄疫病毒P1-2A-3C腺病毒载体的构建

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湖南农业科学 2010年第6期 125-127,130页

作者：李杨柳纪省甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

选取O型口蹄疫病毒(FMDV)OMⅢ株的P1-2A和3C作为目的基因,分别扩增出目的片断后,定向亚克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,得到重组载体pAdTrack-P12A3C,重组穿梭质粒和腺病毒骨架载体pAdeasy-1共同电转化入大肠杆菌BJ5183感受态细胞... 详细信息

选取O型口蹄疫病毒(FMDV)OMⅢ株的P1-2A和3C作为目的基因,分别扩增出目的片断后,定向亚克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,得到重组载体pAdTrack-P12A3C,重组穿梭质粒和腺病毒骨架载体pAdeasy-1共同电转化入大肠杆菌BJ5183感受态细胞,同源重组后得到重组腺病毒质粒(pAd-P12A3C)。将重组腺病毒质粒线性化后转染至HEK293细胞中可观察到典型的绿色荧光,从重组腺病毒的基因组中可扩增到P12A3C基因,证实获得了含有P12A3C的重组腺病毒。

关键词：口蹄疫病毒 P12A3C基因重组腺病毒

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口蹄疫A型病毒AF/72株标准乳鼠组织毒的研制

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浙江农业科学 2009年第3期50卷 596-599页

作者：杜进鑫王永录张永光方玉珍蒋守田吕建亮潘丽刘力宽张淑刚李正丰张昱张中旺中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

用口蹄疫A型病毒AF/72株的第3代乳鼠组织毒,通过乳鼠适应至6代,获得该毒株的乳鼠组织毒AF/72/MF6,经测定其LD50为***-1;经RT-PCR获得其VP1基因序列,并与GenBank中的其它6株口蹄疫A型病毒株比对,同源性大于85%;经无菌检验和外源病毒检验... 详细信息

用口蹄疫A型病毒AF/72株的第3代乳鼠组织毒,通过乳鼠适应至6代,获得该毒株的乳鼠组织毒AF/72/MF6,经测定其LD50为***-1;经RT-PCR获得其VP1基因序列,并与GenBank中的其它6株口蹄疫A型病毒株比对,同源性大于85%;经无菌检验和外源病毒检验,纯净性达到兽用生物制品标准要求;经间接夹心ELISA测定,OD值均大于0.2,且经乳鼠中和试验证实该毒仅能被口蹄疫A型标准血清中和,具有型特异性;经紫外分光光度法测定其146S含量,均值为189 ***-1,远大于22 ***-1的国际标准。综合纯净性检验、特异性检验和146S含量测定结果,可确定AF/72/MF6为口蹄疫A型病毒AF/72株乳鼠组织毒的标准毒。

关键词： FMD 标准毒株

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人成熟叠朊在大肠埃希菌中高效表达

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动物医学进展 2006年第10期27卷 62-65页

作者：路伟张杰刘永生卫广森沈阳农业大学畜牧兽医学院辽宁沈阳110161 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

以含有人叠朊编码基因Prnd的ORF的质粒HoPrnd-T为模板,PCR扩增出成熟叠朊编码基因片段homDpl,并将其插入原核表达载体pGEX-6P-1的EcoRⅠ和XhoⅠ位点之间,构建出重组表达质粒pGEX-homDpl。将pGEX-homDpl电转化到宿主菌株BL21(DE3)中,以1.... 详细信息

以含有人叠朊编码基因Prnd的ORF的质粒HoPrnd-T为模板,PCR扩增出成熟叠朊编码基因片段homDpl,并将其插入原核表达载体pGEX-6P-1的EcoRⅠ和XhoⅠ位点之间,构建出重组表达质粒pGEX-homDpl。将pGEX-homDpl电转化到宿主菌株BL21(DE3)中,以1.0 mmol/LIPTG诱导表达,SDS-PAGE结果显示人成熟叠朊被大肠埃希菌高效表达。

关键词：成熟叠朊大肠埃希菌表达人

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微生物分离与培养的新方法与新技术

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畜牧兽医科技信息 2009年第11期25卷 10-11页

作者：李国娟柳纪省李宝玉田永强中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室兰州730046 兰州交通大学化工学院兰州730070

目前自然界中只有极少部分微生物能够得到分离与培养,严重阻碍了对微生物生命活动规律的研究和微生物资源的开发。改进传统的分离与培养方法,采用新型分离与培养技术,提高微生物可培养性,大量培养自然界中存在的微生物,从而更全面、准... 详细信息

目前自然界中只有极少部分微生物能够得到分离与培养,严重阻碍了对微生物生命活动规律的研究和微生物资源的开发。改进传统的分离与培养方法,采用新型分离与培养技术,提高微生物可培养性,大量培养自然界中存在的微生物,从而更全面、准确地了解微生物细胞的生命规律、获悉微生物群落中各种微生物之间的动态相互作用和相互协调的规律,对环境微生物工艺进行准确地设计、精细地调控和高效地利用。本文综述了微生物分离与培养的最新方法与技术,及其所存在的问题。

关键词：微生物分离纯培养新技术

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具有免疫反应性的猪瘟病毒多表位基因在大肠杆菌中的克隆表达和鉴定

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生物学杂志 2012年第5期29卷 6-10页

作者：侯相民田宏尚佑军田永强刘湘涛兰州交通大学化学与生物工程学院兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

将猪瘟病毒不同抗原表位基因串联构成重组基因BT21,化学合成后克隆至pMD18-T载体中,然后再将BT21串联基因片段插入原核表达载体pGEX-6P-1。经酶切和测序鉴定后,构建的重组质粒pGEX-BT21转化大肠杆菌BL21(DE3),通过IPTG诱导表达,表达产... 详细信息

将猪瘟病毒不同抗原表位基因串联构成重组基因BT21,化学合成后克隆至pMD18-T载体中,然后再将BT21串联基因片段插入原核表达载体pGEX-6P-1。经酶切和测序鉴定后,构建的重组质粒pGEX-BT21转化大肠杆菌BL21(DE3),通过IPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE分析,用Glutathione Sepharose 4B亲和层析法纯化目的蛋白和Western blot分析其免疫学活性。结果表明:融合蛋白GST-BT21以可溶形式表达,分子量约为33kDa,与预期大小相符,纯化的重组蛋白可被猪瘟病毒阳性血清所识别,具有良好的免疫学活性。从而为进一步研究该融合蛋白的免疫特性和功能奠定了基础。

关键词：猪瘟病毒 E2结构糖蛋白多表位抗原抗原活性

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人朊蛋白基因的克隆与原核表达

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甘肃农业大学学报 2006年第3期41卷 11-15页

作者：姜海霞刘永生杨孝朴陈豪泰朱小玲张杰谢庆阁甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

以人血液中提取的总DNA为模板,克隆朊蛋白(prion protein,PrP)基因Prnp户的开放阅读框(ORF),与pMD -18T载体连接后转入*** JM109,用Blast软件比较重组质粒序列,结果表明获得的人Prnp的ORF与Genbank登录的相应核苷酸序列最高同源性为99．... 详细信息

以人血液中提取的总DNA为模板,克隆朊蛋白(prion protein,PrP)基因Prnp户的开放阅读框(ORF),与pMD -18T载体连接后转入*** JM109,用Blast软件比较重组质粒序列,结果表明获得的人Prnp的ORF与Genbank登录的相应核苷酸序列最高同源性为99．6％,推导的氨基酸序列同源性为99．8％,将编码人成熟PrP的基因定向克隆到 pET-30a(+)表达载体,将重组质粒pET-homPrP转化*** BL21(DE3),在37℃下用1．0 mmol／L IPTG诱导,重组融合蛋白获得高效表达,SDS-PAGE显示表达产物以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的20％～25％．用Ni-NTA 树脂亲和层析纯化了表达产物．Western-blotting分析表明,融合蛋白被抗PrP的单克隆抗体特异识别．因此,在大肠杆菌中表达的人成熟PrP融合蛋白可以作为制备PrP抗体的免疫原．

关键词：人朊蛋白基因克隆原核表达

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口蹄疫病毒3ABC绿色荧光蛋白载体构建及表达

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动物医学进展 2006年第4期27卷 72-74,106页

作者：孙德惠独军政常惠芸才学鹏甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

将O型口蹄疫病毒Akesu/58株适应细胞培养。用RT-PCR技术从适应细胞株中克隆了3ABC基因,将其克隆入pGEM-T载体,测序鉴定。然后将目的基因与线性化的绿色荧光蛋白(PEGFPN1)载体连接筛选阳性质粒命名为PEGFPN1-3ABC。将阳性质粒转入JM109... 详细信息

将O型口蹄疫病毒Akesu/58株适应细胞培养。用RT-PCR技术从适应细胞株中克隆了3ABC基因,将其克隆入pGEM-T载体,测序鉴定。然后将目的基因与线性化的绿色荧光蛋白(PEGFPN1)载体连接筛选阳性质粒命名为PEGFPN1-3ABC。将阳性质粒转入JM109大肠埃希菌增殖。提取PEGFPN1-3ABC质粒转染入BHK细胞,在荧光显微镜下直接观察表达结果。

关键词：绿色荧光蛋白口蹄疫病毒 3ABC基因表达

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口蹄疫新型疫苗及其免疫特性研究进展

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生物技术通讯 2009年第2期20卷 295-298页

作者：杜进鑫王永录中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

口蹄疫是世界性重大动物疫病,接种疫苗是预防该病的重要策略之一。随着现代分子生物学技术的发展,对一些新型口蹄疫疫苗如亚单位疫苗、活载体疫苗、核酸疫苗、可饲疫苗、多表位疫苗等的研究和探索已全面展开。我们简要介绍了近年涌现的... 详细信息

口蹄疫是世界性重大动物疫病,接种疫苗是预防该病的重要策略之一。随着现代分子生物学技术的发展,对一些新型口蹄疫疫苗如亚单位疫苗、活载体疫苗、核酸疫苗、可饲疫苗、多表位疫苗等的研究和探索已全面展开。我们简要介绍了近年涌现的口蹄疫新型疫苗,以为口蹄疫分子疫苗的设计提供参考。

关键词：口蹄疫疫苗免疫应答

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