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中国农学会高新技术农业应用专业委员会2009年学术研讨会

作者：殷相平易咏竹李志勇李江涛张韵张志芳柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州 730046 中国农业科学院生物技术研究所北京 100081

将狂犬病毒(rabies virus，RV)核蛋白基因克隆到家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中，构建重组家蚕杆状病毒转移质粒pVL-N，pVL-N与线性化的亲本病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕细胞，经空斑筛选后成功获得携带有RV核蛋白基因的重组病毒rBmNPV... 详细信息

将狂犬病毒(rabies virus，RV)核蛋白基因克隆到家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中，构建重组家蚕杆状病毒转移质粒pVL-N，pVL-N与线性化的亲本病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕细胞，经空斑筛选后成功获得携带有RV核蛋白基因的重组病毒rBmNPV(N)。将获得的重组病毒rBmNPV(N)感染家蚕蚕蛹，双抗体夹心ELISA法检测证明，目的基因在蚕蛹中获得较高水平表达，用蚕蛹表达产物作抗原制备疫苗免疫Ba1b／c小白鼠，免疫动物均产生了特异性抗体，免疫后30 d用狂犬病毒CVS攻毒株攻击，获得了50％的保护。

关键词：狂犬病核蛋白家蚕杆状病毒载体基因克隆疫苗免疫特异性抗体

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禽流感病毒致病机制研究进展

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江西农业学报 2009年第5期21卷 114-117页

作者：杨生海殷宏刘永生陈豪泰马丽娜马艳平丁耀忠张杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州730046

禽流感病毒(AIV)属于正粘病毒科,它的致病性与毒株和宿主均有很大关系,根据毒力强弱将AIV划分为高致病性和低致病性毒株。高致病性AIV由于其传染性极强,可引起家禽全身性感染,造成多个组织器官严重病理损伤,致死率达100%,给世界养禽业... 详细信息

禽流感病毒(AIV)属于正粘病毒科,它的致病性与毒株和宿主均有很大关系,根据毒力强弱将AIV划分为高致病性和低致病性毒株。高致病性AIV由于其传染性极强,可引起家禽全身性感染,造成多个组织器官严重病理损伤,致死率达100%,给世界养禽业造成重大损失。对禽流感病毒的分子结构及其致病机制方面的研究现状进行了综述。

关键词：禽流感病毒分子结构致病机制研究进展

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口蹄疫基因工程疫苗研究进展

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江西农业学报 2009年第4期21卷 104-108页

作者：杨生海殷宏张杰刘永生陈豪泰马丽娜马艳平丁耀忠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州730046

介绍了口蹄疫在世界范围内暴发流行的现状及其疫苗的研究应用,重点综述了各种口蹄疫基因工程疫苗的研究进展。

关键词：口蹄疫基因工程疫苗分子生物学进展

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痘病毒F10L基因的克隆及生物信息学分析

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西北民族大学学报（自然科学版） 2014年第4期35卷 69-74页

作者：赵银龙吴国华吴健朱海霞颜新敏赵志荀李健吴娜张强穆晓峰西北民族大学生命科学与工程学院甘肃兰州730124 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实室甘肃兰州730046 吉林农业大学吉林长春130033

将古浪山羊痘病毒的基因组DNA提取出来,并设计引物进行PCR扩增,克隆F10L基因的DNA序列.为了分析山羊痘病毒F10蛋白的分子特征,将PCR产物连接到p GEM-T Easy载体后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆进行序列测定,利用生物信息... 详细信息

将古浪山羊痘病毒的基因组DNA提取出来,并设计引物进行PCR扩增,克隆F10L基因的DNA序列.为了分析山羊痘病毒F10蛋白的分子特征,将PCR产物连接到p GEM-T Easy载体后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆进行序列测定,利用生物信息学软件对F10L基因序列进行预测分析.结果显示,F10L基因序列由1 335个核苷酸组成的开放阅读框,编码444个氨基酸残基组成的多肽,蛋白质分子质量的理论值53.01 ku,理论等电点为7.14.该蛋白的二级结构中,α螺旋占12.44%,β折叠占15.73%,其余71.83%为无规则卷曲.多序列比对分析显示,不同羊痘病毒分离株F10L序列高度保守,一致性在97%以上.此研究结果为进一步研究F10蛋白的生物学功能和羊痘病毒早期蛋白的分子相互作用奠定了基础.

关键词：痘病毒 F10L 基因克隆生物信息学分析

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猪源冠状病毒TGEV中国分离株纤突蛋白生物信息学分析

猪源冠状病毒TGEV中国分离株纤突蛋白生物信息学分析

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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：李建强柳纪省兰喜程杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州 730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州 730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州 730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州 730070

以猪源冠状病毒TGEV纤突蛋白基因序列为基础，利用生物软件对TGEV中国分离株纤突蛋白进行N-糖基化位点、跨膜螺旋、进化树、二级结构及抗原位点的预测和分析。结果显示所有TGEV毒株可分为3个基因型，4株中国分离株分别归属于以上3个基... 详细信息

以猪源冠状病毒TGEV纤突蛋白基因序列为基础，利用生物软件对TGEV中国分离株纤突蛋白进行N-糖基化位点、跨膜螺旋、进化树、二级结构及抗原位点的预测和分析。结果显示所有TGEV毒株可分为3个基因型，4株中国分离株分别归属于以上3个基因型，属于Ⅰ型的中国株TSX在跨膜螺旋的氨基酸及二级结构上与其他中国株有明显的差异，而同属于Ⅲ型中国毒株SC-Y和TH-98在跨膜螺旋的氨基酸及二级结构上非常接近，而所有中国分离株抗原表位没有明显差别，表明TGEV在中国没有显著的变异。

关键词：猪源冠状病毒猪传染性胃肠炎纤突蛋白基因序列生物信息学

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表达狂犬病毒糖蛋白和核蛋白的重组腺病毒的生物学特性及免疫研究

表达狂犬病毒糖蛋白和核蛋白的重组腺病毒的生物学特性及免疫研究

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首届中国兽药大会——兽医生物制品学、兽医微生物学学术论坛

作者：殷相平李志勇李学瑞李宝玉兰喜杨彬柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃农业大学动物医学院

将含有狂犬病毒G+N的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/G+N与腺病毒骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌细胞内同源重组,获得带有目的基因的重组腺病毒载体pAd/G+N。将重组腺病毒载体经PacⅠ酶切后转染HEK-293细胞获得带有目的基因的重组腺病毒。重组... 详细信息

将含有狂犬病毒G+N的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/G+N与腺病毒骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌细胞内同源重组,获得带有目的基因的重组腺病毒载体pAd/G+N。将重组腺病毒载体经PacⅠ酶切后转染HEK-293细胞获得带有目的基因的重组腺病毒。重组腺病毒在HEK-293细胞中连续传代15代次,病毒在细胞的病变时间缩短在20h以内。经测定,重组腺病毒对HEK-293细胞的TCID达10/ml。用RT-PCR对重组腺病毒进行检测,可以检测到狂犬病毒糖蛋白和核蛋白基因片段。重组腺病毒经口服免疫小白鼠,21天后用狂犬病毒CVS毒株进行脑内攻击,观察10天,免疫保护率达60%。

关键词：狂犬病毒重组腺病毒生物学特性免疫

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ASFV解旋酶D1133L蛋白表达和抗体检测方法的建立及初步应用

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江西农业学报 2021年第6期33卷 1-6页

作者：侯景申超超张大俊杨博史喜绢张婷杨泽晓张克山郑海学李丹党文刘湘涛四川农业大学动物医学院四川成都611130 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业农村部畜禽病毒学重点开放实验室/国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为了建立快速检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的血清学方法,本研究原核表达了ASFV的D1133L重组蛋白,并以其为包被抗原,通过反应条件优化,建立了一种快速检测ASFV的间接ELISA方法,并采用该方法检测了ASFV感染猪后D1133... 详细信息

为了建立快速检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的血清学方法,本研究原核表达了ASFV的D1133L重组蛋白,并以其为包被抗原,通过反应条件优化,建立了一种快速检测ASFV的间接ELISA方法,并采用该方法检测了ASFV感染猪后D1133L的抗体应答情况。结果显示:成功表达纯化了D1133L蛋白,以此为抗原建立了ELISA抗体检测方法,该方法特异性高,灵敏性强,其检测结果与市售试剂盒检测结果的符合率达100%。家猪在感染ASFV后,针对D1133L的抗体在第5天可被检测到,在第7天抗体水平达到顶峰。

关键词： ASFV 解旋酶 D1133L 抗体检测应用

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蛋白质芯片技术在动物源性食品检测中的应用研究进展

蛋白质芯片技术在动物源性食品检测中的应用研究进展

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中国畜牧兽医学会生物制品学分会、中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会暨第三届中国兽药大会

作者：祁光宇黄银军牟克斌刘学荣王宇任维维蒋韬中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州 730046 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室，兰州 730046 中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州 730046 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室，兰州 730046

来，蛋白质芯片因其具有平行性，高通量、灵敏度高、样品用量少及检测速度快等优点而引起人们的高度关注。本文对蛋白质芯片技术及在动物源性食品检测中应用研究进展进行了简要综述，并分析了蛋白质芯片检测技术中存在的问题及应用前景。

关键词：

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两种方法制备胶体金及其免疫标记的比较研究

两种方法制备胶体金及其免疫标记的比较研究

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中国畜牧兽医学会生物制品学分会、中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会暨第三届中国兽药大会

作者：祁光宇智晓莹任维维黄银军牟克斌刘学荣王宇蒋韬中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州 730046 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室，兰州 730046 中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州 730046 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室，兰州 730046

：寻找一种适合口蹄疫Asia Ⅰ抗体标记的胶体金。方法：采用柠檬酸三钠和柠檬酸三钠-鞣酸法分别还原成氯金酸溶液，制备纳米胶体金，并分别对制得的胶体金粒子大小、粒径分布情况、稳定性及微观形貌进行了分析，同时进行口蹄疫抗体标记...

：寻找一种适合口蹄疫Asia Ⅰ抗体标记的胶体金。方法：采用柠檬酸三钠和柠檬酸三钠-鞣酸法分别还原成氯金酸溶液，制备纳米胶体金，并分别对制得的胶体金粒子大小、粒径分布情况、稳定性及微观形貌进行了分析，同时进行口蹄疫抗体标记。结果：柠檬酸三钠-鞣酸法制备胶体金较稳定，标记的试纸条灵敏度要高于柠檬酸三钠法。结论：采用柠檬酸三钠-鞣酸法制备纳米胶体金适合口蹄疫AsiaⅠ抗体的标记。

关键词：

来源：评论

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检测O型口蹄疫病毒的胶体金免疫层析法的建立

检测O型口蹄疫病毒的胶体金免疫层析法的建立

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中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会（第三届中国兽药大会学术论坛）

作者：祁光宇智晓莹任维维黄银军牟克斌刘学荣王宇蒋韬中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室中农威特生物科技股份有限公司

目的:建立一种快速、简便的检测O型口蹄疫病毒（FMDV）的胶体金免疫层析法（GICA）。方法:采用柠檬酸三钠-鞣酸还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的标准株O型口蹄疫抗体。将纯化的口蹄疫流行株O/China99抗体和羊抗豚鼠抗体分别包被在硝酸... 详细信息

目的:建立一种快速、简便的检测O型口蹄疫病毒（FMDV）的胶体金免疫层析法（GICA）。方法:采用柠檬酸三钠-鞣酸还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的标准株O型口蹄疫抗体。将纯化的口蹄疫流行株O/China99抗体和羊抗豚鼠抗体分别包被在硝酸纤维素膜上,作为检测带与质控带。经试验条件优化,组装成胶体金快速诊断试纸条。结果:本试验研制的口蹄疫O型试剂盒具有良好的灵敏度,O型可检测到的3.9×10～4LD的病毒量。同时对阳性及阴性样品进行3次重复检测结果完全相同,说明其具有较好的重复性;特异性试验证实该方法在检测口蹄疫临床症状相似病原,如猪水疱病抗原（SVD）、水泡性口炎（VS）、水泡性疹（VES）等病毒时无交叉反应;试剂盒对53份阳性参考样本及78份阴性参考样本做了符合率试验,阳性样品和阴性样本的符合率分别为92.45%和100%,样品检出率为96.95%。试剂盒在4℃下可保存6个月。结论:建立的检测O型口蹄疫病毒（FMDV）胶体金免疫层析法是一种快速、灵敏、特异的FMD O型抗原检测方法,对基层现场具有广泛应用价值。

关键词： O型口蹄疫病毒胶体金免疫层析法

来源：评论

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