检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2021年第9期51卷 1073-1081页

作者：杨金柯郝雨崔卉梅赵登率袁兴国陈学辉杨博张婷郑海学刘湘涛张克山中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为探讨山羊体表脓包中的微生物多样性,运用高通量测序技术对脓包积液中的16S rRNA和ITS基因测序。根据获得的有效序列和操作分类单元(OTU)数目,进行α多样性分析和菌群结构组成分析。结果表明,脓包中细菌和真菌OTU数目分别为53和410;细... 详细信息

为探讨山羊体表脓包中的微生物多样性,运用高通量测序技术对脓包积液中的16S rRNA和ITS基因测序。根据获得的有效序列和操作分类单元(OTU)数目,进行α多样性分析和菌群结构组成分析。结果表明,脓包中细菌和真菌OTU数目分别为53和410;细菌群落中优势菌属分别为葡萄球菌属(Staphylococcus,98.04%)、梭杆菌属(Fusobacterium,80.62%)和拟杆菌属(Bacteroides,19.32%),真菌群落中没有明显优势菌群。本研究通过16S rRNA高通量测序技术,分析了可能引起山羊皮肤脓包的病原微生物,为皮肤脓包病的防控和临床指导用药提供了参考。

关键词：山羊皮肤脓包 16S rRNA 微生物多样性菌群结构

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HEK293T细胞敲除TPL2基因促进塞内卡病毒复制的研究

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中国兽医科学 2020年第9期50卷 1073-1082页

作者：闫鸣昊郝军红张大俊申超超徐国伟侯景张克山郑海学刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

肿瘤进展位点2(TPL2)在不同病毒感染过程中扮演着不同角色。为探究TPL2对塞内卡病毒(SVA)复制的影响,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建TPL2基因敲除HEK293T细胞系,以PCR测序和Western-blot对TPL2敲除效率进行双重鉴定,同时检测TPL... 详细信息

肿瘤进展位点2(TPL2)在不同病毒感染过程中扮演着不同角色。为探究TPL2对塞内卡病毒(SVA)复制的影响,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建TPL2基因敲除HEK293T细胞系,以PCR测序和Western-blot对TPL2敲除效率进行双重鉴定,同时检测TPL2缺失对细胞形态和细胞增殖速度的影响。最后,用SVA感染细胞,采用IFA、RT-qPCR、Western-blot和TCID50方法检测病毒增殖水平,综合评价TPL2敲除对SVA复制的影响。结果,获得两株敲除TPL2基因的HEK293T细胞。随机选取B1细胞株(HEK293T-TPL2-/-)进行后续功能评价,发现TPL2敲除后细胞的增殖速度与对照HEK293T细胞无显著差异,均为贴壁、上皮样细胞形态。SVA感染后与对照细胞相比,敲除TPL2基因显著增加病毒拷贝数,病毒mRNA的转录,病毒蛋白的翻译以及子代病毒的毒力。综上所述,本研究成功建立TPL2基因敲除HEK293T细胞系并证明TPL2在SVA感染过程中发挥着抗病毒作用,为进一步揭示TPL2相关免疫反应和SVA感染过程的具体作用机制奠定试验基础并提供良好的细胞模型,也为疫苗生产过程中提高病毒产量提供一种可行性策略。

关键词： CRISPR/Cas9 TPL2基因 HEK293T细胞基因敲除塞内卡病毒

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猪繁殖与呼吸综合征病毒的纯化与形态观察

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中国兽医科学 2021年第12期51卷 1519-1524页

作者：魏德陇张婧李坤孙普白兴文包慧芳李冬刘在新卢曾军曹轶梅中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)全病毒抗原,用于免疫学研究,本研究在Marc-145细胞上繁殖了PRRSV基因Ⅱ型VR2332株,经聚乙二醇浓缩后,用蔗糖密度梯度离心法纯化PRRSV病毒粒子。用电子显微镜观察病毒粒子形态结构,并用SDS-PAGE、免... 详细信息

为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)全病毒抗原,用于免疫学研究,本研究在Marc-145细胞上繁殖了PRRSV基因Ⅱ型VR2332株,经聚乙二醇浓缩后,用蔗糖密度梯度离心法纯化PRRSV病毒粒子。用电子显微镜观察病毒粒子形态结构,并用SDS-PAGE、免疫印迹等方法分析了纯化效果。结果显示,电子显微镜观察到PRRSV形状呈球形或椭圆形,囊膜表面有微绒毛样突起,病毒粒子大小不一,大多数直径在50~80 nm之间,有极少数直径超过120 nm。SDS-PAGE可见病毒的多个结构蛋白条带,利用感染康复猪血清进行免疫印迹检测显示,M蛋白的印迹条带最深,显示纯化病毒具有良好的反应活性,为后续免疫学研究奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒纯化形态学蔗糖密度梯度

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口蹄疫病毒持续感染的黄牛分离毒株VP1和3ABC基因变异特征分析

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农业生物技术学报 2008年第5期16卷 729-735页

作者：沈小燕丛国正常惠芸刘湘涛谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室

为明确口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)持续感染与病毒基因变异潜在关系,研究FMDV持续感染分离株结构蛋白VP1和非结构蛋白3ABC基因在牛体内的动态变化。实验用O/Akesu/58毒株以104ID50/mL剂量舌面穿刺接种5头黄牛,出现... 详细信息

为明确口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)持续感染与病毒基因变异潜在关系,研究FMDV持续感染分离株结构蛋白VP1和非结构蛋白3ABC基因在牛体内的动态变化。实验用O/Akesu/58毒株以104ID50/mL剂量舌面穿刺接种5头黄牛,出现临床或亚临床症状后痊愈动物会成为可能的FMDV带毒牛。用探杯定期采集实验牛咽喉部黏性液体(O/P液),接种BHK-21细胞增殖病毒后共分离到12株毒株。RT-PCR扩增持续感染分离毒株VP1和3ABC基因,克隆测序发现,所有持续感染分离毒株的VP1基因核苷酸和氨基酸同源性都在98%以上,且没有碱基缺失或插入现象;但与O/Akesu/58的核苷酸同源性仅为85%左右,氨基酸同源性也仅为90%。持续感染分离株VP1基因有多处位点发生突变,其中有16个核苷酸位点发生一致突变,但只有两个位点造成氨基酸突变(I56→T、A210→E);在所有FMDV持续感染分离毒株之间有4个核苷酸位点和3个氨基酸位点发生了颠换。非结构蛋白3ABC基因较为稳定,仅有13个核苷酸位点和5个氨基酸位点的颠换,与宿主嗜性相关的3A基因也没有缺失。推测FMDV持续感染的形成与主要结构抗原基因VP1和宿主嗜性相关基因3ABC变异的关系不显著。

关键词：口蹄疫病毒持续感染黄牛基因变异 VP1和3ABC

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小反刍兽疫根除计划及其疫苗的最新研究进展

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中国兽医科学 2021年第4期51卷 412-420页

作者：张大俊杨博史喜绢张婷杨金柯崔卉梅赵登率袁兴国郑海学刘湘涛张克山中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

主要介绍了小反刍兽疫国内外控制和根除战略方面的内容以及近年来小反刍兽疫疫苗的最新研究进展,以期为我国小反刍兽疫的净化和根除提供参考。

关键词：小反刍兽疫全球根除计划疫苗控制

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羊口疮病毒F1L基因的克隆及其B细胞表位预测

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中国兽医科学 2010年第11期40卷 1101-1105页

作者：吉艳红尚佑军王光祥尹双辉刘艳红刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家121蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

为了研究羊口疮病毒(ORFV)F1L基因,以该病毒基因组DNA为模板,应用聚合酶链式反应(PCR)扩增得到1011bp的F1L基因,将其插入pMD18-TEasy克隆载体,构建了F1L基因克隆重组质粒;再将该基因片段插入pGEX-6P-1表达载体,通过PCR、限制性内切酶双... 详细信息

为了研究羊口疮病毒(ORFV)F1L基因,以该病毒基因组DNA为模板,应用聚合酶链式反应(PCR)扩增得到1011bp的F1L基因,将其插入pMD18-TEasy克隆载体,构建了F1L基因克隆重组质粒;再将该基因片段插入pGEX-6P-1表达载体,通过PCR、限制性内切酶双酶切和测序鉴定,得到F1L基因插入方向和读码框结构均正确的阳性质粒,表明,成功构建了羊口疮病毒F1L基因的重组表达载体。通过对F1L基因序列进行生物信息学分析,预测发现F1L蛋白亲水、无信号肽,B细胞表位主要位于第4～8位、第16～22位、第32～53位、第59～73位、第82～99位和第123～133位氨基酸。这将为建立ORFV诊断方法、制备单克隆抗体及合成肽疫苗奠定基础。

关键词：羊口疮病毒 F1L基因克隆亲水性信号肽 B细胞表位

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宿主Arf6通过阻止口蹄疫病毒入侵发挥抗病毒作用

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中国兽医科学 2020年第10期50卷 1207-1214页

作者：李国丽史喜绢张大俊徐国伟刘原子申超超张克山郑海学刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业农村部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

本实验室前期i TRAQ技术研究发现母猪初乳中Arf6表达量显著高于常乳,现有文献报道Arf6在病原感染中扮演重要角色。为研究宿主Arf6在口蹄疫病毒(FMDV)感染中的作用,本研究构建Arf6真核表达质粒,应用Arf6抑制剂,利用RT-qPCR和Western-blo... 详细信息

本实验室前期i TRAQ技术研究发现母猪初乳中Arf6表达量显著高于常乳,现有文献报道Arf6在病原感染中扮演重要角色。为研究宿主Arf6在口蹄疫病毒(FMDV)感染中的作用,本研究构建Arf6真核表达质粒,应用Arf6抑制剂,利用RT-qPCR和Western-blot技术检测FMDV和Arf6的相互调控作用;构建Arf6系列突变体,评估Arf6调控FMDV复制的功能区或者功能位点;利用间接免疫荧光技术(IFA)分析Arf6对FMDV入侵的影响。结果表明,FMDV感染PK-15细胞后,内源性Arf6表达水平显著上调;过表达Arf6抑制FMDV在PK-15细胞中的复制;抑制Arf6能促进FMDV复制;Arf6(155-176 aa)不是Arf6抑制FMDV侵入的关键区域,第48位氨基酸是Arf6抑制FMDV入侵的关键位点。IFA结果显示,Arf6在细胞膜水平阻止了FMDV的入侵。结果表明,宿主Arf6在FMDV入侵层面发挥了抗病毒作用,本研究结果为揭示FMDV和宿主蛋白相互调控作用提供了理论依据。

关键词： Arf6 口蹄疫病毒病毒入侵抗病毒作用

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阿瑞吡坦在体外对PAMs内非洲猪瘟病毒复制的抑制作用

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中国兽医科学 2022年第10期52卷 1207-1214页

作者：崔卉梅史喜绢张大俊杨行杨博杨金柯郝雨陈玲玲闫文倩刘湘涛郑海学张克山中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业农村部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

阿瑞吡坦具有抗肿瘤和抗HIV-1活性。为了探究与非洲猪瘟病毒(ASFV)D1133L亲和力较高的阿瑞吡坦是否具有抗ASFV作用,利用MTT方法测定阿瑞吡坦对PAMs细胞的毒性,然后将荧光蛋白重组ASFV感染PAMs细胞后观察荧光变化和TCID_(50)、同时用RT-q... 详细信息

阿瑞吡坦具有抗肿瘤和抗HIV-1活性。为了探究与非洲猪瘟病毒(ASFV)D1133L亲和力较高的阿瑞吡坦是否具有抗ASFV作用,利用MTT方法测定阿瑞吡坦对PAMs细胞的毒性,然后将荧光蛋白重组ASFV感染PAMs细胞后观察荧光变化和TCID_(50)、同时用RT-qPCR和Western-blot分析阿瑞吡坦对ASFV复制及D1133L、P30和P72转录和翻译的影响。结果表明,当DMSO处理PAMs时,细胞存活率未达到100%,对PAMs细胞具有一定毒性;当浓度为20和40μmol/L的阿瑞吡坦处理PAMs后,PAMs细胞存活率均接近100%,当浓度为80μmol/L的阿瑞吡坦处理PAMs时,细胞存活率达到70%以上:当阿瑞吡坦处理感染荧光蛋白重组ASFV的PAMs细胞后,ASFV的荧光值、基因组拷贝数和TCID_(50)被显著降低,ASFV D1133L、P30和P72转录和翻译被显著抑制。结论:阿瑞吡坦在体外对PAMs细胞的毒性较小,通过靶向ASFV编码的D1133L蛋白显著抑制ASFV的体外复制,对ASFVP30和P72的转录和翻译也具有抑制作用。

关键词：非洲猪瘟阿瑞吡坦抗病毒药物抑制作用

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口蹄疫病毒A／AKT／58株基因组全长感染性cDNA克隆的体内拯救

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中国科学（C辑） 2008年第11期38卷 1028-1035页

作者：白兴文李平花曹轶梅李冬卢曾军郭建宏孙德惠郑海学孙普刘湘涛罗建勋刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046 广东省农业科学院广东广州540640

构建了两种口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)基因组全长cDNA克隆pTA/FMDV和pCA/FMDV,利用体外转录和体内转录方法制备感染性病毒,并对其抗原性,乳鼠毒力(LD50)和病毒生长动力学等生物学特性进行了分析.为了鉴别野毒与重... 详细信息

构建了两种口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)基因组全长cDNA克隆pTA/FMDV和pCA/FMDV,利用体外转录和体内转录方法制备感染性病毒,并对其抗原性,乳鼠毒力(LD50)和病毒生长动力学等生物学特性进行了分析.为了鉴别野毒与重组病毒,利用融合PCR技术在两种全长cDNA基因组内分别引入了几个点突变(pTA/FMDV:T1029G,pCA/FMDV:A174G,A308G,T1029G)作为遗传标记.结果表明,两种重组病毒对3日龄乳鼠均表现致病性.但是由pTA/FMDV合成的感染性体外转录本RNA的毒力较弱(10?6);而与pCT7RNAP质粒共转染的pCA/FMDV体内拯救病毒的毒力较强(10?7.5),并在BHK-21细胞上表现出与野毒相似的生长特性.这一结果表明,在FMDV的拯救过程中,以pCT7RNAP为基础的体内拯救系统相比体外转录方法更为简便、实用.该系统为利用反向遗传操作技术深入研究FMDV的分子致病机制及其准种特性等奠定了良好的基础.

关键词：口蹄疫病毒感染性cDNA克隆体内转录 A/AKT/58株

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PRRSV兰州分离株ORF3和ORF5基因的克隆与序列分析及其杆状病毒表达载体的构建

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中国兽医科学 2009年第3期39卷 189-195页

作者：赵娜田宏吴锦艳祁燕蓉满自萍尚佑军何生虎刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 宁夏大学农学院宁夏银川750021

根据GenBank中猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）中国代表株CH-1a的基因组序列，设计包含完整ORF3、ORF5基因序列的2对特异引物，利用RT-PCR技术扩增PRRSV兰州分离株（Lanzhou株）的ORF3和ORF5基因，并对其进行序列测定，同时与已发表的1... 详细信息

根据GenBank中猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）中国代表株CH-1a的基因组序列，设计包含完整ORF3、ORF5基因序列的2对特异引物，利用RT-PCR技术扩增PRRSV兰州分离株（Lanzhou株）的ORF3和ORF5基因，并对其进行序列测定，同时与已发表的13株PRRSV进行同源性比较。将扩增的PRRSV Lanzhou株ORF3、ORF5基因分别克隆到杆状病毒表达载体pFastBacHTA上，将经酶切及测序鉴定的阳性重组质粒pFastBacHTA-ORF3、pFastBacHTA-ORF5分别转化到DH10Bac感受态细胞。结果显示，ORF3、ORF5基因长度分别为765bp、603bp，发现核苷酸的同源性分别为88.0％—99.2％、87.3％—99.0％，获得了重组转座子rBacmid-ORF3、rBacmid-ORF5。

关键词：猪生殖与呼吸综合征病毒 ORF3基因 ORF5基因克隆杆状病毒表达载体

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