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中国草食动物科学 2014年第S1期34卷 11-13页

作者：张克山刘永杰成伟伟尚佑军逯忠新刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

天然免疫又称为非特异性免疫、固有免疫是机体与生俱来的抵抗体外病原体侵袭、清除体内抗原性异物的第一道屏障[1]。细胞天然免疫是机体天然免疫的关键组成部分,随着人们对巨噬细胞、NK细胞及树突状细胞(DCs)等天然免疫细胞的深入研究,... 详细信息

天然免疫又称为非特异性免疫、固有免疫是机体与生俱来的抵抗体外病原体侵袭、清除体内抗原性异物的第一道屏障[1]。细胞天然免疫是机体天然免疫的关键组成部分,随着人们对巨噬细胞、NK细胞及树突状细胞(DCs)等天然免疫细胞的深入研究,加上天然免疫具有即时性且缺乏记忆的特点,天然免疫得到越来越广泛的重视和深入的研究。

关键词：羊传染性脓疱宿主免疫应答固有免疫抗原性非特异性免疫关键组成凋亡蛋白免疫原性体液免疫反

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羊传染性脓疱病毒逃避宿主免疫应答的机制

羊传染性脓疱病毒逃避宿主免疫应答的机制

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2014年全国养羊生产与学术研讨会

作者：张克山刘永杰成伟伟尚佑军逯忠新刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室

关键词：羊传染性脓疱病毒口疮病毒天然免疫应答宿主免疫应答

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中草药红茶菌的制备及其体外抗口蹄疫病毒活性

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安徽农业科学 2014年第17期42卷 5500-5502页

作者：符乃方吴俊才符启俊吕律何继军李开绵叶剑秋蒋盛军蒋小强邱红辉高李泽何萍谢峥嵘陈吉雄中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所海南儋州571737 中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 海南东方市畜牧局动物疾病预防控制中心海南东方570100

[目的]研究中草药红茶菌的细胞、乳鼠毒性以及对口蹄疫病毒在体外的抗病毒活性。[方法]将中草药红茶菌过滤,用细胞培养液稀释,分别接种在BHK21细胞上观察细胞生长情况,评价其对细胞的毒性作用。将中草药红茶菌用灭菌水稀释,分别接种3日... 详细信息

[目的]研究中草药红茶菌的细胞、乳鼠毒性以及对口蹄疫病毒在体外的抗病毒活性。[方法]将中草药红茶菌过滤,用细胞培养液稀释,分别接种在BHK21细胞上观察细胞生长情况,评价其对细胞的毒性作用。将中草药红茶菌用灭菌水稀释,分别接种3日龄乳鼠,观察乳鼠生长、健康状态和接种部位变化情况,评价其对乳鼠的毒性作用。用稀释的中草药红茶菌与浓度为1 000 LD50的口蹄疫病毒等量混合,37℃条件下作用30 min,接种3日龄乳鼠,观察乳鼠发病死亡情况,估算中草药红茶菌体外可杀灭口蹄疫病毒的最大使用浓度。用稀释的中草药红茶菌与口蹄疫病毒混合,接种BHK21细胞,观察致细胞病变效应,记录不同稀释度的中草药红茶菌对口蹄疫病毒的杀灭效果。[结果]BHK21细胞和乳鼠试验表明,中草药红茶菌在1∶4稀释后,对BHK21细胞无毒性反应,并可有效抑制1 000TCID50口蹄疫病毒在BHK21细胞生长繁殖;1∶2稀释的红茶菌微生态制剂对3日龄乳鼠无毒性反应,并可有效杀灭1 000 LD50口蹄疫病毒。[结论]中草药红茶菌是一种安全性好且对口蹄疫病毒有较好杀灭作用的口蹄疫预防中草药微生态制剂。

关键词：中草药红茶菌口蹄疫病毒预防活性体外

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中草药红茶菌的制备及其体内抗口蹄疫病毒活性

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安徽农业科学 2014年第18期42卷 5892-5894,5908页

[目的]研究中草药红茶菌在动物体内对口蹄疫病毒复制的抑制作用。[方法]选取健康猪20头,喷雾和口服中草药红茶菌3 d后,进行O型口蹄疫毒株(猪O型O/China/99株鼠毒)攻毒试验;攻毒后,继续对猪群进行喷雾和口服给药,观察中草药红茶菌对攻毒... 详细信息

[目的]研究中草药红茶菌在动物体内对口蹄疫病毒复制的抑制作用。[方法]选取健康猪20头,喷雾和口服中草药红茶菌3 d后,进行O型口蹄疫毒株(猪O型O/China/99株鼠毒)攻毒试验;攻毒后,继续对猪群进行喷雾和口服给药,观察中草药红茶菌对攻毒猪的保护作用及体内抗口蹄疫病毒的作用。[结果]攻毒结果显示,低剂量给药猪3/5保护,中剂量给药猪1/5保护,高剂量给药猪0/5保护;在低剂量给药条件下,攻毒保护效果优于中剂量和高剂量;从攻毒后的第1天到第7天,陆续从试验猪全血中检测到口蹄疫病毒,其中中草药红茶菌高浓度预防组猪的口蹄疫病毒的复制水平最高,中剂量组较低,低剂量组复制水平最低。[结论]给药合适剂量的中草药红茶菌对猪体内的口蹄疫病毒具有一定的抑制作用。

关键词：中草药红茶菌制备口蹄疫病毒体内抗病毒活性抑制

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Al(OH)_3、ISA206及Poly(I:C)免疫佐剂对灭活口蹄疫140S抗原免疫效果的影响

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免疫学杂志 2013年第11期29卷 927-932页

作者：周春雪魏巍李冬韩成昊李艳丽刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

目的选取Al(OH)3、ISA206及Poly(I:C)3种佐剂,分别与灭活口蹄疫病毒(FMDV)配制成疫苗,并通过小鼠实验比较和评价3种佐剂的免疫效力。方法以口蹄疫O型病毒为毒种,经细胞培养传代,获得较高滴度的病毒培养物,并经化学方法灭活制成140S口蹄... 详细信息

目的选取Al(OH)3、ISA206及Poly(I:C)3种佐剂,分别与灭活口蹄疫病毒(FMDV)配制成疫苗,并通过小鼠实验比较和评价3种佐剂的免疫效力。方法以口蹄疫O型病毒为毒种,经细胞培养传代,获得较高滴度的病毒培养物,并经化学方法灭活制成140S口蹄疫完整病毒粒子抗原。在蔗糖密度梯度定量后分别与Al(OH)3、ISA206及Poly(I:C)3种佐剂配合制作口蹄疫灭活疫苗。疫苗经肌肉注射免疫Balb/c小鼠,通过检测抗体效价评价机体产生的体液免疫反应。通过检测体外刺激免疫小鼠脾淋巴细胞后产生的细胞因子以及淋巴细胞增殖实验评价机体产生的细胞免疫反应。结果 ISA206口蹄疫灭活苗和Poly(I:C)口蹄疫灭活苗诱导小鼠产生的抗体效价较高;通过体外刺激实验发现,ISA206口蹄疫灭活苗免疫组小鼠脾淋巴细胞在抗原刺激后,产生的IFN-γ和IL-4含量最高;通过淋巴细胞增殖实验发现,ISA206口蹄疫灭活苗免疫组小鼠脾淋巴细胞的增殖能力最强(P<0.05)。结论ISA206佐剂在配合灭活口蹄疫140S完整病毒粒子进行免疫时所表现的免疫效力最高。

关键词： Poly(I C) Al(OH)3 ISA206 口蹄疫

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型内非编码区嵌合口蹄疫病毒的拯救及生物学特性分析

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中国兽医科学 2013年第11期43卷 1101-1108页

作者：韩成昊李平花白兴文包慧芳卢曾军孙普曹轶梅刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 中国农业科学院兰州兽医研究所畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为探寻口蹄疫病毒(FMDV)非编码区对病毒生命周期乃至生物学特性的影响,以O/HN/93现用疫苗株的感染性克隆为骨架,利用融合PCR分别构建了含持续感染毒株O/CHN/Mya98/33-P 3′非编码区、5′非编码区及3′非编码区和5′非编码区嵌合的3株全... 详细信息

为探寻口蹄疫病毒(FMDV)非编码区对病毒生命周期乃至生物学特性的影响,以O/HN/93现用疫苗株的感染性克隆为骨架,利用融合PCR分别构建了含持续感染毒株O/CHN/Mya98/33-P 3′非编码区、5′非编码区及3′非编码区和5′非编码区嵌合的3株全长cDNA克隆。3个全长克隆经线性化后分别在脂质体介导下转染表达T7RNA聚合酶的BHK-21细胞,转染后第60小时均出现明显的致细胞病变效应。对收获的病毒分别用RT-PCR、间接免疫荧光分析,结果表明成功拯救到3个嵌合的FMDV。拯救的病毒对乳鼠致病力和细胞感染力的比较分析结果显示,发现分别替换两端非编码区会导致病毒细胞感染力和乳鼠致病力下降,而同时替换非编码区的病毒则无明显变化。这些嵌合病毒的成功拯救为进一步阐述非编码区的功能奠定了基础。

关键词：型内嵌合非编码区口蹄疫病毒生物学特性

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Dpl蛋白和PrP蛋白与Flotillins蛋白相互作用的酵母双杂交技术分析

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中国兽医科学 2013年第3期43卷 233-237页

作者：马俊俊刘永生丁耀忠周建华高宗良陈豪泰马丽娜张杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为了确定Dpl蛋白和PrP是否与Flotillins蛋白相互作用,采用RT-PCR方法从牛睾丸组织中扩增出Dpl基因,从牛脑组织中扩增出PrP、Flotillins基因,应用酵母双杂交技术构建诱饵载体pGBKT7-Flo-tillins,捕获载体pGADT7-Dpl、pGADT7-PrP,然后验证... 详细信息

为了确定Dpl蛋白和PrP是否与Flotillins蛋白相互作用,采用RT-PCR方法从牛睾丸组织中扩增出Dpl基因,从牛脑组织中扩增出PrP、Flotillins基因,应用酵母双杂交技术构建诱饵载体pGBKT7-Flo-tillins,捕获载体pGADT7-Dpl、pGADT7-PrP,然后验证Dpl蛋白和PrP蛋白是否与Flotillins蛋白相互作用。结果显示,成功构建了Flotillins蛋白的诱饵载体,Dpl和PrP蛋白的捕获载体;诱饵载体和捕获载体对报告基因无自激活作用,对酵母细胞无毒性。证明PrP与Flotillins在酵母水平有相互作用;Dpl与Flotil-lins在酵母水平没有相互作用。

关键词：疯牛病 Flotillins蛋白 Dpl蛋白酵母双杂交

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商品化口蹄疫疫苗与猪瘟疫苗对小鼠免疫效力的研究

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中国兽医科学 2013年第6期43卷 572-577页

作者：周春雪刘艳红李冬刘在新祁淑云中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

通过研究口蹄疫疫苗和猪瘟疫苗在小鼠模型上免疫后的免疫效力变化,以便探讨共免疫两种疫苗与单独免疫其中一种疫苗对小鼠免疫应答作用的差异。将小鼠分成以下几个免疫组进行接种或注射:①口蹄疫疫苗单免组;②猪瘟疫苗单免组;③口蹄疫疫... 详细信息

通过研究口蹄疫疫苗和猪瘟疫苗在小鼠模型上免疫后的免疫效力变化,以便探讨共免疫两种疫苗与单独免疫其中一种疫苗对小鼠免疫应答作用的差异。将小鼠分成以下几个免疫组进行接种或注射:①口蹄疫疫苗单免组;②猪瘟疫苗单免组;③口蹄疫疫苗与猪瘟疫苗共免组;④PBS注射组。二免后第7天采集血液,分离血清,检测抗体效价及血清中IFN-γ、IL-4的质量浓度;二免后第7天分离小鼠脾淋巴细胞,分别进行淋巴细胞增殖试验及对脾淋巴细胞CD3+CD4+和CD3+CD8+T淋巴细胞亚群分化进行检测。结果,共免疫两种疫苗的小鼠产生的口蹄疫抗体效价比单独免疫口蹄疫疫苗的要低,但是产生的猪瘟抗体效价比单独免疫猪瘟疫苗的要高很多;共免组产生的INF-γ比单免口蹄疫疫苗组的要低,但是比单免猪瘟疫苗组的要高。淋巴细胞增殖试验及流式细胞仪检测的结果表明,共免疫口蹄疫疫苗和猪瘟疫苗对小鼠脾淋巴细胞再次识别特定抗原的应答能力及T细胞亚群分化均具有重要影响。结果表明,共免疫这两种疫苗对小鼠体液免疫反应影响较小,甚至有促进作用,但是细胞免疫应答受到了抑制。

关键词：共免疫口蹄疫猪瘟小鼠

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新型高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒株全长cDNA克隆的构建与分析

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中国兽医科学 2013年第5期43卷 458-465页

作者：王松豪郑海学杨帆曹伟军刘芳张艳刘华南郭建宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为了获得高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)弱毒株的全基因组序列和病毒基因组全长cDNA克隆,根据高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒株(EF635006)和经典CH-1a株(AY032626)全基因组序列设计并合成特异引物,进而用RT-PCR分6段扩增了H... 详细信息

为了获得高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)弱毒株的全基因组序列和病毒基因组全长cDNA克隆,根据高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒株(EF635006)和经典CH-1a株(AY032626)全基因组序列设计并合成特异引物,进而用RT-PCR分6段扩增了HP-PRRSV弱毒株的全基因组。将扩增的各个cDNA重叠片段分别克隆到pMD20-T载体中,建立了PRRSV弱毒株的初级cDNA克隆,并对基因组cDNA序列进行了测定。根据测序结果,选择特异的酶切位点,将各个亚克隆产物逐段亚克隆入经过改造的低拷贝pOK12载体中,通过引入MluⅠ和EcoRⅠ酶切位点将聚合酶Ⅱ、Ⅰ和T7启动子序列及榔头锤酶基因置于病毒基因组的5′端,引入NotⅠ和FseⅠ将聚合酶Ⅱ、Ⅰ终止子序列及戊型肝炎病毒核酶基因置于病毒基因组的3′端,结果得到了病毒基因组全长cDNA克隆ppAPRRSVOK12。测序结果表明,该毒株基因组全长15 319bp[不包括poly(A)尾];全基因序列比对结果显示,该毒株属于北美洲型毒株,与HuN4的同源性高达99.5%。测序及酶切鉴定结果证实,HP-PRRSV弱毒株基因组全长cDNA克隆已构建成功。

关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组全长cDNA克隆感染性分子克隆序列分析

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三株重组VP1基因的泛亚1系口蹄疫病毒的蚀斑特性

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中国兽医科学 2013年第8期43卷 795-799页

作者：魏蔚白兴文包慧芳中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

利用反向遗传学技术,以PCR和盒式替换方法构建了3株含泛亚1系病毒的VP1基因序列的感染性克隆,转染BHK-21细胞,拯救3株口蹄疫病毒,进行蚀斑形成试验,并比较三者之间的差异。结果显示,在BHK-21细胞上,被拯救的病毒r-HK和r-ZheJ形成大斑,... 详细信息

利用反向遗传学技术,以PCR和盒式替换方法构建了3株含泛亚1系病毒的VP1基因序列的感染性克隆,转染BHK-21细胞,拯救3株口蹄疫病毒,进行蚀斑形成试验,并比较三者之间的差异。结果显示,在BHK-21细胞上,被拯救的病毒r-HK和r-ZheJ形成大斑,而被拯救的病毒r-NX则形成大小斑兼有的混合斑;在CHO-K1细胞上,r-HK和r-ZheJ不能形成蚀斑,而r-NX却能形成蚀斑。证实r-NX可以利用HS受体,而r-HK和r-ZheJ则不能利用HS受体,推测r-NX在BHK-21细胞上形成的小斑可能与病毒利用二类受体HS有关。

关键词：口蹄疫病毒 VP1蛋白蚀斑硫酸乙酰肝素

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