检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2012年第1期52卷 114-119页

作者：李平花白兴文卢增军孙普祁国财韩成昊刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

【目的】近年来,O型口蹄疫的不断暴发严重危害了我国畜牧业的发展,其病原——O型口蹄疫病毒已演化出3种谱系:中国型猪毒系、泛亚系和缅甸98系。其中中国型猪毒系病毒高度嗜猪,对养猪业危害最大。目前应用的疫苗已不能有效保护中国型猪... 详细信息

【目的】近年来,O型口蹄疫的不断暴发严重危害了我国畜牧业的发展,其病原——O型口蹄疫病毒已演化出3种谱系:中国型猪毒系、泛亚系和缅甸98系。其中中国型猪毒系病毒高度嗜猪,对养猪业危害最大。目前应用的疫苗已不能有效保护中国型猪毒系变异株的流行,这给我国猪口蹄疫的防控带来了极大的困难。为了进一步发展免疫原性好、抗原谱广的猪O型口蹄疫疫苗候选株,本研究以O/HN/93现用疫苗毒株的感染性克隆为骨架,用流行的新猪毒系病毒的部分VP3和VP1基因(主要是替换VP1蛋白上的B-C环和G-H环)替换疫苗毒株的相应部分,构建了嵌合的FMDV全长cDNA克隆。【方法】线化的嵌合全长质粒和表达T7 RNA聚合酶的真核质粒pcDNAT7P共转染BHK-21细胞,体内转录拯救嵌合病毒。【结果】嵌合全长质粒转染BHK-21细胞36h后,出现明显的FMDV致细胞病变效应。对收获的病毒分别用RT-PCR、间接免疫荧光、电子显微镜观察结果证实成功拯救到嵌合的FMDV。拯救的病毒乳鼠致病性试验结果表明该拯救病毒对乳鼠的致病力减弱。该嵌合病毒的成功拯救为研制口蹄疫新型疫苗等奠定了基础。

关键词：型内嵌合口蹄疫病毒全长感染性cDNA克隆

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口蹄疫病毒牛源整联蛋白受体β_3、β_8亚基基因的克隆及分子特征分析

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畜牧兽医学报 2012年第7期43卷 1143-1149页

作者：杜平尚佑军刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

本研究旨在从分子角度阐明口蹄疫病毒(FMDV)牛源整联蛋白受体β3和β8基因的结构特征,并为研究病毒遗传变异与宿主范围改变奠定基础。采用RT-PCR技术在国内首次从牛肾组织获得β3和β8基因,并用生物软件对它们的分子特征进行了分析。结... 详细信息

本研究旨在从分子角度阐明口蹄疫病毒(FMDV)牛源整联蛋白受体β3和β8基因的结构特征,并为研究病毒遗传变异与宿主范围改变奠定基础。采用RT-PCR技术在国内首次从牛肾组织获得β3和β8基因,并用生物软件对它们的分子特征进行了分析。结果显示:β3亚基基因全长2 355bp,编码784个氨基酸,其中信号肽由22个氨基酸组成,胞外区由692个氨基酸组成,跨膜区由29个氨基酸组成,胞质区由41个氨基酸组成,氨基酸同源性与羊最高,与易感FMDV的牛、骆驼、猪和羊的β3亚基位于同一进化分支,各功能区的保守性为胞质区>跨膜区>配体结合区>胞外区>信号肽,但半胱氨酸富集区的突变率仅次于信号肽。牛源β8亚基基因全长2 304bp,编码767个氨基酸,包括42个氨基酸的信号肽,637个氨基酸的胞外区,29个氨基酸的跨膜区及59个氨基酸的胞质区,氨基酸同源性与马最高,进化分析发现与猪的β8亚基不在同一分支,各功能区的保守性排序为跨膜区>配体结合区>胞质区>胞外区>信号肽。将β3亚基与β8亚基比较发现,β8亚基的配体结合区比β3亚基更为保守,β3亚基的胞质区存在NPLY基序,而β8亚基无此基序,且β8亚基胞质区可变性更高。本研究提示FMDV对ανβ8的利用率高于ανβ3可能与β8亚基配体结合区更为保守有关。

关键词：口蹄疫病毒 β3亚基 β8亚基分子特征

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Flotillin-1缺失突变体基因酵母双杂交诱饵载体的构建与鉴定

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中国兽医科学 2012年第11期42卷 1168-1173页

作者：马俊俊刘永生丁耀忠周建华高宗良陈豪泰马丽娜张杰中国农业科学院、兰州兽医研究所、家畜疫病病原生物学国家重点实验室、农业部畜禽病毒学重点实验室、国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为了筛选朊蛋白(PrP)与Flotillin-1蛋白相互作用的分子区域,采用RT-PCR方法从牛脑组织中扩增出Flotillin-1基因片段,应用酵母双杂交技术构建Flotillin-1各缺失突变体的诱饵质粒载体pGBKT7-X,进行了酶切鉴定及序列分析,并验证了诱饵质粒... 详细信息

为了筛选朊蛋白(PrP)与Flotillin-1蛋白相互作用的分子区域,采用RT-PCR方法从牛脑组织中扩增出Flotillin-1基因片段,应用酵母双杂交技术构建Flotillin-1各缺失突变体的诱饵质粒载体pGBKT7-X,进行了酶切鉴定及序列分析,并验证了诱饵质粒载体对酵母细胞的自激活作用和毒性。结果显示,成功构建了诱饵载体pGBKT7-X,部分诱饵载体对报告基因无自激活作用,对酵母细胞无毒性;部分诱饵载体对报告基因有自激活作用,对酵母细胞无毒性。证明,部分重组诱饵载体可用于酵母双杂交系统寻找与PrP蛋白相互作用的分子区域。

关键词：疯牛病 Flotillin-1蛋白酵母双杂交诱饵载体自激活作用

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RGD基序邻近氨基酸突变对口蹄疫病毒O/JC/2010株毒力的影响

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中国兽医科学 2012年第5期42卷 441-447页

作者：况文东白兴文李平花祁国财包慧芳卢曾军孙普谢宝霞郝晓芳刘在新中国农业科学院、兰州兽医研究所、家畜疫病病原生物学国家重点实验室、农业部畜禽病毒学重点实验室、国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为了研究RGD基序邻近氨基酸位点对口蹄疫病毒毒力的影响,利用O/JC/2010株病毒的基因组全长cDNA分子克隆,置换O/HN/93株病毒的VP1基因,拯救获得了1株嵌合病毒(pBlue-HJ);除此之外,在O/JC/2010VP1的3个氨基酸位点进行突变P142T、A152D、Q1... 详细信息

为了研究RGD基序邻近氨基酸位点对口蹄疫病毒毒力的影响,利用O/JC/2010株病毒的基因组全长cDNA分子克隆,置换O/HN/93株病毒的VP1基因,拯救获得了1株嵌合病毒(pBlue-HJ);除此之外,在O/JC/2010VP1的3个氨基酸位点进行突变P142T、A152D、Q153P,分为4组,拯救出4株突变病毒:pBlue-HJ(142)、pBlue-HJ(142+152)、pBlue-HJ(152+153)、pBlue-HJ(142+152+153)。比较这5株病毒的LD50和TCID50特性,发现P142T、A152D可以增强口蹄疫病毒对BHK-21细胞和乳鼠的致病力,而Q153P则相反。该试验证明RGD基序附近的非保守氨基酸位点对口蹄疫病毒的毒力存在影响,为进一步阐明口蹄疫病毒的分子致病机制奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒 G-H环 RGD基序毒力

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口蹄疫病毒OT株的全基因组序列测定及比较分析

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畜牧兽医学报 2012年第1期43卷 90-97页

作者：吕占禄王光祥尚佑军刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒病重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

参考GenBank上已发表的口蹄疫病毒(FMDV)全长基因组序列,设计了覆盖基因组全长的数对引物,通过RT-PCR方法对口蹄疫病毒OT株进行分段克隆及序列测定。结果表明不含poly(C)序列的OT株基因组全序列长8 142nt,开放读码框(ORF)长6 969nt、编... 详细信息

参考GenBank上已发表的口蹄疫病毒(FMDV)全长基因组序列,设计了覆盖基因组全长的数对引物,通过RT-PCR方法对口蹄疫病毒OT株进行分段克隆及序列测定。结果表明不含poly(C)序列的OT株基因组全序列长8 142nt,开放读码框(ORF)长6 969nt、编码2 322aa,5′UTR长1 004nt,3′UTR长93nt,3′UTR之后为23nt的poly(A)尾巴。应用分子生物学软件将OT株与FMDV其它参考毒株进行序列比对,并对其基因特征进行分析。结果显示,OT株的假结节(Pseudoknots)从第415—499位连续缺失85nt,但是其3A基因却未发生碱基的缺失。其VP1基因的核苷酸同源性与O/Akesu58、OMⅢ两株最高,但OT株在进化时间上要比O/Akesu58、OMIII早很多,其毒株起源和遗传衍化关系还需要进一步的关注。

关键词：口蹄疫病毒全基因组编码区分子生物学特性序列比对

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反向遗传学技术在新型疫苗研制中的应用

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中国预防兽医学报 2012年第10期34卷 841-844页

作者：祁国财李平花刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点实验室/国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

随着分子生物学等学科的发展，出现了许多可以应用于疫苗研制的新方法和新技术，并在某些方面已经开始逐步取代传统的疫苗研制技术。其中，反向遗传学技术发展迅速，倍受国内外研究者关注。这项技术不仅为解析病毒蛋白在病毒复制周期和... 详细信息

随着分子生物学等学科的发展，出现了许多可以应用于疫苗研制的新方法和新技术，并在某些方面已经开始逐步取代传统的疫苗研制技术。其中，反向遗传学技术发展迅速，倍受国内外研究者关注。这项技术不仅为解析病毒蛋白在病毒复制周期和致病性中的作用提供了有效的研究工具，而且为研发RNA病毒为载体疫苗提供了新的思路和策略。

关键词：遗传学技术载体疫苗应用分子生物学 RNA病毒病毒复制病毒蛋白新技术

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羊口疮病毒B2L蛋白二级结构及其细胞表位的预测

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中国兽医科学 2012年第11期42卷 1133-1138页

作者：王光祥尚佑军吕占禄田宏张克山刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

采用网络平台的SOPMA服务器和DNAStar软件预测羊口疮病毒(ORFV)B2L蛋白的二级结构;综合利用DNAStar软件、二级结构预测及ABCpred方案预测羊口疮病毒B2L蛋白的B细胞表位;分别采用人工神经网络法(ANNA)和在线程序预测羊口疮病毒B2L蛋白的... 详细信息

采用网络平台的SOPMA服务器和DNAStar软件预测羊口疮病毒(ORFV)B2L蛋白的二级结构;综合利用DNAStar软件、二级结构预测及ABCpred方案预测羊口疮病毒B2L蛋白的B细胞表位;分别采用人工神经网络法(ANNA)和在线程序预测羊口疮病毒B2L蛋白的细胞毒性T细胞和辅助T细胞的抗原表位。结果显示,羊口疮病毒B2L蛋白的整个结构中α-螺旋区域和无规则卷曲区域出现得较多,其中α-螺旋占30.42%,β-片层占24.34%,β-转角占5.56%,无规则卷曲占39.68%;有6个优势B细胞表位,3个细胞毒性T细胞表位和2个辅助T细胞表位。本研究为ORFV诊断方法的建立、单克隆抗体的制备及表位疫苗的研制提供了理论依据。

关键词：羊口疮病毒 B2L基因二级结构 B细胞表位 T细胞表位预测

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AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1基因结构预测及亚细胞定位

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中国兽医学报 2012年第11期32卷 1669-1673页

作者：张克山尚佑军郭建宏郑海学田宏靳野刘永杰刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

利用PCR方法扩增到VP1基因,序列测定后利用Mega4.0、swiss-model、GOR4和RasMol软件预测了VP1基因的二、三级结构。将VP1基因融合EGFP基因后定向克隆入PcDNA3.1(+)真核表达载体,构建正确的重组质粒命名为PVP1E,在脂质体介导下将PVP1E质... 详细信息

利用PCR方法扩增到VP1基因,序列测定后利用Mega4.0、swiss-model、GOR4和RasMol软件预测了VP1基因的二、三级结构。将VP1基因融合EGFP基因后定向克隆入PcDNA3.1(+)真核表达载体,构建正确的重组质粒命名为PVP1E,在脂质体介导下将PVP1E质粒转染BHK-21细胞,Western Blotting试验证实VP1基因成功表达,经DAPI细胞核染色后在共聚焦显微镜下观察VP1亚细胞定位。结果表明本研究预测了VP1基因的二、三级结构,其在BHK-21细胞中呈现以细胞核为主的弥散性分布,VP1基因亚细胞定位及结构预测为进一步深入探究AsiaⅠ型FMDV VP1结构和功能提供丰富的资料。

关键词： AsiaⅠ型FMDV VP1基因结构预测亚细胞定位

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细菌的CRISPR/cas免疫及免疫识别

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中国兽医科学 2012年第6期42卷 657-660页

作者：马延滨常惠芸中国农业科学院、兰州兽医研究所、家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室、农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

综述了40%真细菌以及几乎所有古细菌基因组内存在的CRISPR位点以及细菌的CRISPR/cas免疫机制。主要从CRISPR/cas免疫的抗感染机制、特异性间隔序列的获取、crRNA的成熟以及免疫识别等方面展开论述,阐述了成簇存在的、被短的重复回文序... 详细信息

综述了40%真细菌以及几乎所有古细菌基因组内存在的CRISPR位点以及细菌的CRISPR/cas免疫机制。主要从CRISPR/cas免疫的抗感染机制、特异性间隔序列的获取、crRNA的成熟以及免疫识别等方面展开论述,阐述了成簇存在的、被短的重复回文序列所分割的非自身基因(CRISPR位点)以及通过类RNA干扰(RNAi)机制特异性地抵抗噬菌体及侵袭性质粒的二次感染。提出此技术在临床上用来抑制抗生素抗性质粒以及毒力因子在病原菌中传播的应用前景。

关键词： CRISPR/cas 免疫机制免疫识别

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口蹄疫疫苗库的发展

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中国预防兽医学报 2012年第11期34卷 929-932页

作者：郎一飞高闪电常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所、国家口蹄疫参考实验室、家畜疫病病原生物学国家重点实验室、农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

口蹄疫（Foot and mouth disease，FMD）是由FMD病毒（FMDV）引起的偶蹄动物的烈性传染病，患病动物的口、舌、唇、蹄、乳房等部位发生水泡，水泡破溃后形成烂斑。由于该病传染性强，造成的经济损失严重，世界动物卫生组织（OIE）将该... 详细信息

口蹄疫（Foot and mouth disease，FMD）是由FMD病毒（FMDV）引起的偶蹄动物的烈性传染病，患病动物的口、舌、唇、蹄、乳房等部位发生水泡，水泡破溃后形成烂斑。由于该病传染性强，造成的经济损失严重，世界动物卫生组织（OIE）将该病列为实时通报的传染病之一。

关键词：口蹄疫世界动物卫生组织烈性传染病苗库偶蹄动物 FMD病毒经济损失传染性

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