检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2016年第12期47卷 2476-2482页

作者：赵萍陈胜利郝华芳李学瑞贺英储岳峰刘永生中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室兰州730046

旨在构建一种由山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum ***,Mccp)六个B细胞表位和三个T细胞表位组成的多重抗原肽(multiple antigenic peptide,MAP),将其在大肠杆菌中表达后免疫小鼠,评估其体液免疫和细胞免疫。分别用MAP、单个... 详细信息

旨在构建一种由山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum ***,Mccp)六个B细胞表位和三个T细胞表位组成的多重抗原肽(multiple antigenic peptide,MAP),将其在大肠杆菌中表达后免疫小鼠,评估其体液免疫和细胞免疫。分别用MAP、单个B细胞表位及全菌超破抗原作为抗原,检测免疫小鼠抗体水平,结果显示三种抗原均能和小鼠免疫血清发生很好的反应(P<0.01)。体外代谢抑制试验显示,1∶64倍稀释的免疫小鼠血清可以有效抑制Mccp的生长。淋巴细胞增殖试验显示,当用单个T细胞表位及Mccp超破抗原分别刺激免疫小鼠的淋巴细胞时均产生明显的增殖现象(P<0.01)。细胞因子检测结果显示,免疫小鼠的IFN-γ、TNF-α、IL-1β和IL-10产量明显升高(P<0.001),而IL-12产量明显下降(P<0.001)。数据显示,构建的MAP能够引起小鼠的免疫反应,这一结果为由Mccp引起的山羊传染性胸膜肺炎亚单位疫苗的研制奠定了一定的基础。

关键词：免疫反应小鼠多重抗原肽山羊支原体山羊肺炎亚种

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狂犬病病毒糖蛋白膜外区密码子优化、原核表达及纯化

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中国人兽共患病学报 2012年第9期28卷 932-937页

作者：鞠美芳殷相平柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室兰州730046

目的有效检测狂犬病毒抗原。方法本研究利用生物信息学软件对狂犬病病毒aG株糖蛋白膜外区进行分析,采用密码子优化策略将该序列的大肠杆菌稀有密码子优化成大肠杆菌常用密码子。将优化的序列合成与表达载体pET-28a(+)分别双酶切、胶回... 详细信息

目的有效检测狂犬病毒抗原。方法本研究利用生物信息学软件对狂犬病病毒aG株糖蛋白膜外区进行分析,采用密码子优化策略将该序列的大肠杆菌稀有密码子优化成大肠杆菌常用密码子。将优化的序列合成与表达载体pET-28a(+)分别双酶切、胶回收后连接并转化至Rosetta(DE3)菌株。挑选阳性重组表达菌经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定。同时对最佳表达条件进行了研究,重组菌在30℃、IPTG终浓度为0.6mmol/L、诱导表达6h时重组蛋白的表达量达到最大值。结果狂犬病病毒aG株糖蛋白膜外区通过密码子优化后能够在大肠杆菌中成功表达,表达产物具有良好的反应原性。结论该项研究为后续检测狂犬病毒抗原的ELISA试剂盒的研发建立基础。

关键词：狂犬病病毒糖蛋白膜外区密码子优化原核表达

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牛支原体P48蛋白的表达及间接血凝检测方法的建立与应用

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中国兽医科学 2015年第3期45卷 241-246页

作者：简莹娜储岳峰赵萍陈胜利贺英秦明明潘玮玮刘永生逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

优化并合成牛支原体的p48基因,将其克隆到pET-32a(+)表达载体上后,转化大肠杆菌BL21(DE3),16℃低温诱导表达,获得可溶性表达的大小约66ku的重组P48蛋白。将纯化后的重组P48蛋白致敏戊二醛和鞣酸处理过的绵羊红细胞,建立了检测牛支原体... 详细信息

优化并合成牛支原体的p48基因,将其克隆到pET-32a(+)表达载体上后,转化大肠杆菌BL21(DE3),16℃低温诱导表达,获得可溶性表达的大小约66ku的重组P48蛋白。将纯化后的重组P48蛋白致敏戊二醛和鞣酸处理过的绵羊红细胞,建立了检测牛支原体抗体的间接血凝试验。重组P48蛋白致敏红细胞的最佳质量浓度是20~40μg/mL,牛支原体超免疫血清抗体效价达1∶2 048~1∶4 096。该方法对牛肺疫、牛巴氏杆菌病、牛病毒性腹泻病、布氏杆菌病、结核病、口蹄疫、牛生殖道支原体感染、里奇氏支原体感染、大肠杆菌病阳性血清的检测结果均为阴性。该方法的特异性为100%,敏感性为93.33%。与国外商品化的牛支原体ELISA试剂盒相比,平均符合率为96.15%。对833份田间血清和1 084份乳清进行检测,阳性率分别是15.37%和19.56%。结果表明,该方法敏感性高、特异性强和重复性好,可用于牛支原体抗体水平检测、牛支原体病的辅助诊断和流行病学调查。

关键词：牛支原体重组P48蛋白可溶性表达间接血凝试验抗体检测

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狂犬病病毒反向遗传学的研究进展

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中国兽医科学 2011年第9期41卷 979-984页

作者：焦文强殷相平柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

对狂犬病病毒反向遗传学操作系统进行了综述,论述了狂犬病病毒反向遗传操作技术的发展状况,并对反向遗传学操作技术在狂犬病病毒致病机理、狂犬病疫苗以及病毒载体研究中的应用进行了综述,对各种病毒拯救方法进行了比较,并对狂犬病病毒... 详细信息

对狂犬病病毒反向遗传学操作系统进行了综述,论述了狂犬病病毒反向遗传操作技术的发展状况,并对反向遗传学操作技术在狂犬病病毒致病机理、狂犬病疫苗以及病毒载体研究中的应用进行了综述,对各种病毒拯救方法进行了比较,并对狂犬病病毒反向遗传学操作技术的应用进行了初步探讨。

关键词：狂犬病病毒反向遗传学应用

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多房棘球蚴感染与宿主相互作用的免疫学机制研究进展

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012年第5期30卷 401-405页

作者：娄忠子李宏民闫鸿斌倪兴维贾万忠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

通过感染过程中宿主的固有免疫和获得性免疫的作用,多房棘球蚴可调节一系列虫体与宿主的相互作用效应,这些效应有助于虫体在宿主肝脏内的增殖和成熟,从而完成其生活史;对中间宿主来说,则可限制寄生所导致的病理变化的发展。本文主要针... 详细信息

通过感染过程中宿主的固有免疫和获得性免疫的作用,多房棘球蚴可调节一系列虫体与宿主的相互作用效应,这些效应有助于虫体在宿主肝脏内的增殖和成熟,从而完成其生活史;对中间宿主来说,则可限制寄生所导致的病理变化的发展。本文主要针对多房棘球蚴免疫相关分子在提高寄生虫生存能力等方面与宿主间的免疫应答研究进行综述。

关键词：多房棘球蚴免疫相关分子宿主-虫体相互作用

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狂犬病病毒致病机制的研究进展

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中国兽医科学 2012年第6期42卷 651-656页

作者：焦文强鞠美芳殷相平柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

在介绍细胞因子在抵抗狂犬病病毒感染的基础上,从狂犬病病毒入侵宿主细胞的机制,狂犬病病毒的5个结构蛋白N、P、M、G、L在狂犬病病毒致病性中的作用以及细胞凋亡在该病毒致病性中的作用等方面综述了狂犬病病毒与宿主的相互作用,旨在为... 详细信息

在介绍细胞因子在抵抗狂犬病病毒感染的基础上,从狂犬病病毒入侵宿主细胞的机制,狂犬病病毒的5个结构蛋白N、P、M、G、L在狂犬病病毒致病性中的作用以及细胞凋亡在该病毒致病性中的作用等方面综述了狂犬病病毒与宿主的相互作用,旨在为狂犬病的防制和疫苗研制提供新的思路。

关键词：狂犬病病毒致病机制细胞凋亡反向遗传学

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猪繁殖与呼吸综合征病毒shRNA和GP5及M蛋白重组腺相关病毒的制备

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中国兽医科学 2013年第5期43卷 480-487页

作者：邱燕兰喜李学瑞殷相平李宝玉柳纪省杨彬中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

为研究新型猪繁殖与呼吸综合征疫苗,采用基因克隆技术将合成的特异性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)RNA干扰寡核苷酸序列克隆至pAAV Helper-Free System中表达质粒pAAV-U6-IRES-hrGFP的U6启动子下游,将PRRSV的ORF5、ORF6基因克隆至pAAV-... 详细信息

为研究新型猪繁殖与呼吸综合征疫苗,采用基因克隆技术将合成的特异性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)RNA干扰寡核苷酸序列克隆至pAAV Helper-Free System中表达质粒pAAV-U6-IRES-hrGFP的U6启动子下游,将PRRSV的ORF5、ORF6基因克隆至pAAV-U6-IRES-hrGFP的CMV启动子下游,构建重组质粒pAAV-U6-IRES-hrGFP-shRNA-ORF5-ORF6;将该质粒与系统中的控制质粒pAAV-RC、辅助质粒pHelper用磷酸钙法共转染293T细胞,包装得到表达PRRSV shRNA、GP5及M蛋白的重组腺相关病毒rAAV-shRNA-ORF5-ORF6。原病毒液经分离纯化后,用点杂交法测定的重组病毒的物理效价高达1010copies/mL。Western-blot检测该重组病毒感染293T细胞后GP5、M蛋白的表达,并通过PRRSV抑制试验检测rAAV-shRNA-ORF5-ORF6的干扰作用。结果显示,成功构建了重组腺相关病毒rAAV-shRNA-ORF5-ORF6,并能在体外表达GP5和M蛋白;rAAV-shRNA-ORF5-ORF6转导Marc145细胞后能够抑制PRRSV的复制。表明成功构建了重组腺相关病毒rAAV-shRNA-ORF5-ORF6,为新型猪繁殖与呼吸综合征双功能疫苗的研制奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒短发夹RNA 腺相关病毒 GP5蛋白 M蛋白双功能疫苗

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布鲁氏菌毒力基因的研究状况

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中国人兽共患病学报 2009年第7期25卷 689-693页

作者：曹小安邱昌庆秦天达中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室兰州730046

随着马耳他布鲁氏菌、猪布鲁氏菌和流产布鲁氏菌的全基因组被破译,发现这三种布鲁氏菌的染色体序列、组成和结构非常相似。染色体的序列测定和阐明为布鲁氏菌蛋白质的研究和分析铺平了道路,与以前通过分析染色体来推测布鲁氏菌的毒力比... 详细信息

随着马耳他布鲁氏菌、猪布鲁氏菌和流产布鲁氏菌的全基因组被破译,发现这三种布鲁氏菌的染色体序列、组成和结构非常相似。染色体的序列测定和阐明为布鲁氏菌蛋白质的研究和分析铺平了道路,与以前通过分析染色体来推测布鲁氏菌的毒力比较,这对后基因组时代完全弄清楚不同布鲁氏菌种生物学特征的研究提供了可能性。而对基因结构和功能的大量研究,很多与致病性和毒力有关的基因发现,将为弄清楚布鲁氏菌的致病机制打下坚实的基础,[第一段]

关键词：猪布鲁氏菌毒力基因后基因组时代序列测定基因结构生物学特征染色体全基因组

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杆状病毒/哺乳动物基因转移载体应用于活载体疫苗研究的进展

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中国人兽共患病学报 2010年第3期26卷 272-274页

作者：李志勇殷相平张韵李学瑞李宝玉柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室兰州730046

近年,高致病性禽流感、猪链球菌等动物疫病频繁暴发流行,不但对畜牧业生产造成巨大经济损失,而且给人民健康带来严重威胁.因此,如何研制并利用安全、有效的基因工程疫苗对预防和控制人兽共患传染病的发生和流行意义重大.

关键词：基因转移载体活载体疫苗哺乳动物杆状病毒高致病性禽流感人兽共患传染病应用基因工程疫苗

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猪圆环病毒2型两种重组多表位蛋白免疫效果的评价

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中国兽医科学 2012年第10期42卷 1031-1036页

作者：田晓婷李宝玉柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

Cap蛋白和Rep蛋白是猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2)的2个主要蛋白,其中含有很多表位。本研究合成了由3个Cap蛋白表位和1个Rep蛋白表位组成的2个表位串联体,利用NcoⅠ、SpeⅠ和SalⅠ位点,将Hsp65基因与表位串联体依次克隆到pE... 详细信息

Cap蛋白和Rep蛋白是猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2)的2个主要蛋白,其中含有很多表位。本研究合成了由3个Cap蛋白表位和1个Rep蛋白表位组成的2个表位串联体,利用NcoⅠ、SpeⅠ和SalⅠ位点,将Hsp65基因与表位串联体依次克隆到pET30a,把构建的重组表达质粒PHE转化到大肠杆菌BL21(DE3)细胞中,诱导重组蛋白的表达。将表达的两种重组蛋白HSP-e-1和HSP-e-2纯化复性后分别免疫小鼠,结果被免疫的小鼠产生特异性抗体,其中HSP-e-2产生的抗体水平较高,而HSP-e-1的淋巴细胞增殖结果要优于HSP-e-2。结果表明,牛型分枝杆菌Hsp65能够作为多表位肽的载体,而融合蛋白HSP-e-1和HSP-e-2可作为PCV2新型疫苗的候选物。

关键词：猪圆环病毒2型热休克蛋白65 抗原表位免疫应答

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