检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2014年第10期44卷 1014-1021页

作者：王芳芳罗金袁小松谢俊仁田占成王素艳郭锦霞刘光远中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

根据本实验室建立的高通量测序数据库中长角血蜱miR-275的成熟体序列信息,设计出特异性茎环引物及PCR扩增引物,同时以长角血蜱β-actin基因(GenBank登录号:AY254898)为内参基因,绘制标准曲线,计算长角血蜱miR-275的标准拷贝数,采用Graph... 详细信息

根据本实验室建立的高通量测序数据库中长角血蜱miR-275的成熟体序列信息,设计出特异性茎环引物及PCR扩增引物,同时以长角血蜱β-actin基因(GenBank登录号:AY254898)为内参基因,绘制标准曲线,计算长角血蜱miR-275的标准拷贝数,采用GraphPad Prism 5软件分析miR-275在长角血蜱不同发育时期及不同组织中的表达情况。结果显示,长角血蜱miR-275和β-actin标准曲线的回归系数均大于0.99,熔解曲线峰值单一,Ct值的变异率均小于5%,表明引物特异性好,标准曲线重复性和稳定性高。用real-time PCR方法对miR-275在长角血蜱卵的不同发育时期、蜱不同发育阶段及不同组织中的表达情况进行分析。结果显示,miR-275在长角血蜱卵发育到第16天的拷贝数最大,为(13.07±1.63)×106 copies/μL,是表达量最低的第5天的43.57倍;在饱血成蜱中拷贝数最多,为(18.95±1.55)×106 copies/μL,是饥饿成蜱的236.88倍;长角血蜱卵巢中拷贝数是最高的,为(15.29±3.59)×106 copies/μL,是表皮表达量的10.47倍。结果表明,miR-275在长角血蜱卵的发育、细胞增殖、组织分化等过程中可能起到了至关重要的作用。

关键词：长角血蜱 microRNA 荧光定量PCR 标准曲线

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猪繁殖与呼吸综合征病毒HN-HW株全基因组分子特征分析

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中国兽医科学 2011年第8期41卷 771-777页

作者：马米玲郝雪峰关贵全刘志杰李有全刘爱红中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

利用RT-PCR方法扩增得到猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒(PRRSV)HN-HW分离株全长基因组的17个片段。拼接后发现该毒株基因组全长为15 334nt(包括poly A尾巴),与国内外14株美洲型PRRSV分离株全序列相似性介于85.3%～99.4%之间,而与欧洲型PRRS... 详细信息

利用RT-PCR方法扩增得到猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒(PRRSV)HN-HW分离株全长基因组的17个片段。拼接后发现该毒株基因组全长为15 334nt(包括poly A尾巴),与国内外14株美洲型PRRSV分离株全序列相似性介于85.3%～99.4%之间,而与欧洲型PRRSV Lelystad Virus(M96262)和SD01-08(DQ489331)分离株全序列相似性仅为59.7%和59.9%。序列分析表明,该毒株包括189nt的5′UTR,14 981nt的蛋白编码区和150nt的3′UTR及14nt的poly(A)尾巴。同美洲标准株ATCC VR-2332相比,Nsp2存在30个氨基酸的缺失。本研究结果补充了PRRSV毒株的基因组信息数据,为深入研究该毒株的遗传与变异及其与生物学特性的关系奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 HN-HW株全基因组特征

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长角血蜱MESK基因的克隆及其生物学特性分析

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中国兽医科学 2013年第8期43卷 806-811页

作者：赵波刘光远罗金张萍田占成谢俊仁田美媛王芳芳袁小松中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

为进一步了解MESK基因在长角血蜱免疫应答中的作用,克隆了长角血蜱MESK基因全长序列,采用有关生物信息学软件对该基因序列的一级结构进行了分析;构建了真核表达载体pEGFP-C1-MESK,采用脂质体转染法在HEK293细胞及HeLa细胞中对其进行了... 详细信息

为进一步了解MESK基因在长角血蜱免疫应答中的作用,克隆了长角血蜱MESK基因全长序列,采用有关生物信息学软件对该基因序列的一级结构进行了分析;构建了真核表达载体pEGFP-C1-MESK,采用脂质体转染法在HEK293细胞及HeLa细胞中对其进行了表达。48h后对细胞进行裂解,用兔抗长角血蜱阳性血清与表达出的重组蛋白进行反应,以检测重组蛋白的免疫活性。结果显示,MESK基因全长为1 426bp,包括1个1 185bp的开放阅读框。该基因含有5个N-糖基化位点、5个豆蔻酰化位点、9个酪氨酸蛋白Ⅱ激酶磷酸化位点、1个酪氨酸蛋白激酶位点、2个cAMP和cGMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点、1个蛋白磷酸激酶C磷酸化位点。SDS-PAGE分析及Western-blot分析表明,表达出的重组蛋白的分子质量约为71ku,且以与兔抗长角血蜱阳性血清反应,免疫原性良好。结果表明,MESK基因可以作为一种重要的分子标记参与蜱分类的研究,在作为候选抗蜱疫苗的研究中具有重要的开发价值。

关键词：长角血蜱 MESK基因生物信息学克隆真核表达

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长角血蜱4D8基因的克隆与原核表达

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中国兽医科学 2012年第6期42卷 551-556页

作者：罗金刘光远田占成谢俊仁沈辉田美媛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

根据GenBank上登录的蜱4D8基因序列设计引物,用PCR技术从长角血蜱雌蜱研磨组织cDNA中扩增出4D8基因,将其连入pGEM-T Easy载体,构建重组克隆载体pGEM-T-4D8,并对检测为阳性的克隆进行测序。将该基因重组至原核表达载体pGEX-4T-1,经表达... 详细信息

根据GenBank上登录的蜱4D8基因序列设计引物,用PCR技术从长角血蜱雌蜱研磨组织cDNA中扩增出4D8基因,将其连入pGEM-T Easy载体,构建重组克隆载体pGEM-T-4D8,并对检测为阳性的克隆进行测序。将该基因重组至原核表达载体pGEX-4T-1,经表达纯化后,进行Western-blot试验鉴定其生物学活性。结果,长角血蜱4D8基因的氨基酸序列与青海血蜱、肩突硬蜱的同源性分别为90%、81%。表达的重组蛋白是分子质量约为41ku的融合蛋白。Western-blot试验证明,该重组蛋白能很好地识别兔抗长角血蜱全蜱阳性血清。结果表明,4D8基因作为一种重要的分子标记基因在蜱的流行病学调查方面有着重要的价值,同时作为潜在的候选抗原基因在疫苗的研究方面也有重要意义。

关键词：长角血蜱 4D8基因克隆原核表达

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长角血蜱新基因HL05全长序列的克隆与原核表达

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中国兽医科学 2011年第4期41卷 380-386页

作者：张丽艳刘光远田占成谢俊仁龚真莉刘建刚中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

以兔抗长角血蜱饥饿雌蜱全蜱蛋白阳性血清为探针,对长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库进行免疫学筛选,获得一个阳性克隆HL05。经5′-RACE技术得到HL05基因的全长序列。HL05基因全长1 053bp,开放阅读框长540bp,编码179个氨基酸,预计蛋白分子... 详细信息

以兔抗长角血蜱饥饿雌蜱全蜱蛋白阳性血清为探针,对长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库进行免疫学筛选,获得一个阳性克隆HL05。经5′-RACE技术得到HL05基因的全长序列。HL05基因全长1 053bp,开放阅读框长540bp,编码179个氨基酸,预计蛋白分子质量为20.01ku。序列同源性分析表明,该基因为长角血蜱新基因。对推导的氨基酸序列进行生物信息学分析,表明HL05蛋白为分泌型蛋白,无跨膜区,具有较高的抗原指数。将该基因亚克隆后连接到原核表达载体pGEX-4T-1上,转入BL21(DE3)宿主菌,经IPTG诱导后得到大小为46ku左右的重组蛋白,与预期大小一致。Western-blot结果显示兔抗长角血蜱成蜱全虫抗体能够识别该重组蛋白。

关键词：长角血蜱 HL05新基因全长序列分析原核表达

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长角血蜱雄蜱抑制消减杂交cDNA文库的构建与分析

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中国兽医科学 2009年第8期39卷 659-664页

作者：刘建刚刘光远田占成谢俊仁龚真莉张丽艳中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

为构建长角血蜱雄蜱抑制消减杂交cDNA文库,获得长角血蜱雄性成蜱在半饱血状态下的特异表达基因,用抑制消减杂交方法构建以pGEM-T Easy为载体的长角血蜱半饱血雄蜱全蜱cDNA文库,测序并进行生物信息学分析。以新合成的长角血蜱饥饿和半饱... 详细信息

为构建长角血蜱雄蜱抑制消减杂交cDNA文库,获得长角血蜱雄性成蜱在半饱血状态下的特异表达基因,用抑制消减杂交方法构建以pGEM-T Easy为载体的长角血蜱半饱血雄蜱全蜱cDNA文库,测序并进行生物信息学分析。以新合成的长角血蜱饥饿和半饱血雄蜱cDNA第一链为模板,用RT-PCR方法对从文库中挑选的5个表达序列标签(EST)进行鉴定。初步获得18个EST,BlastX分析显示,所得cDNA编码的功能性蛋白主要包括信号传导、组织形态形成、转录调节和糖类代谢等相关蛋白。RT-PCR鉴定结果显示,随机挑选的5个新EST中有3个在半饱血状态下差异表达。结果表明,成功地构建了长角血蜱雄性全蜱抑制消减杂交文库,获得了有潜在生物学功能的EST。

关键词：长角血蜱抑制消减杂交(SSH) cDNA文库

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鸡抗球虫免疫机理研究进展

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中国兽医学报 2010年第8期30卷 1139-1144页

作者：闫鸿斌贾万忠田广孚才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

鸡球虫病是由顶复器门(Apicomplexa)、孢子虫纲(Sporozoasida)、真球虫目(Eucoccidiorida)、艾美耳科(Eimeriidae)、艾美耳属(Eimeria)的球虫引起的一种呈全球性分布的原虫病,发病率高达50%－70%,死亡率为20%－30%,严重时高达80%。每年... 详细信息

鸡球虫病是由顶复器门(Apicomplexa)、孢子虫纲(Sporozoasida)、真球虫目(Eucoccidiorida)、艾美耳科(Eimeriidae)、艾美耳属(Eimeria)的球虫引起的一种呈全球性分布的原虫病,发病率高达50%－70%,死亡率为20%－30%,严重时高达80%。每年全世界因球虫病造成的经济损失超过30亿美元。鸡只感染球虫后能诱导机体产生特异、持久的免疫保护力。一般只有足够的卵囊才能刺激机体产生坚强的免疫力,但是有的虫种也有例外,如巨型艾美耳球虫就具有很强的免疫原性,仅需较小剂量的卵囊就能刺激机体产生坚强的免疫力。[第一段]

关键词：艾美耳球虫鸡细胞免疫体液免疫黏膜免疫细胞因子免疫机理

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猪IFN-α1重组蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其生物学特性

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中国兽医科学 2010年第10期40卷 1057-1062页

作者：和燕玲陈国华王佩雅薛萍房永祥景志忠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

应用杂交瘤细胞技术,将用猪IFN-α1重组蛋白免疫的小鼠脾细胞经与骨髓瘤细胞融合、筛选和多次克隆化培养,成功获得了3株能稳定分泌抗猪IFN-α1的单克隆杂交瘤细胞株,分别将其命名为4E9、5B2和5H11。这3株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体经EL... 详细信息

应用杂交瘤细胞技术,将用猪IFN-α1重组蛋白免疫的小鼠脾细胞经与骨髓瘤细胞融合、筛选和多次克隆化培养,成功获得了3株能稳定分泌抗猪IFN-α1的单克隆杂交瘤细胞株,分别将其命名为4E9、5B2和5H11。这3株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体经ELISA检测,体外细胞培养上清的效价均可达到1∶104,体内腹水的效价均可达1∶105;SDS-PAGE分析显示,纯化的这3株单克隆抗体的重链分子质量均在60ku以上,轻链均在30ku以上,符合抗体IgG重链、轻链分子的大小;抗体亚类鉴定表明4E9、5B2为IgG2a类,5H11株为IgG2b类,且其抗原结合位点基本一致。细胞染色体分析表明,3株杂交瘤细胞株染色体平均数为88～96条,远高于骨髓瘤细胞或脾细胞的染色体数,从遗传角度证实获得了杂交瘤细胞株;在杂交瘤细胞的稳定性试验中,这3株细胞经多次冻存复苏和传代培养,不同代次细胞上清中的抗体效价均在1∶104～1∶105之间,说明该3株杂交瘤细胞分泌单克隆抗体的性能稳定。

关键词：重组猪IFN-α1蛋白单克隆抗体生物学特性

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合作猪TLR3及其剪接体的基因克隆与序列分析

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中国兽医科学 2012年第7期42卷 731-736页

作者：管齐赛房永祥贾怀杰何小兵周涛景志忠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

为了研究猪Toll样受体3(pTLR3)基因的选择性剪切机制,应用反转录-聚合酶链反应扩增技术,从猪外周血淋巴细胞中克隆了pTLR3及其剪接体基因(pTLR3a,pTLR3b)。pTLR3基因序列分析表明,克隆的基因ORF为2 718bp,编码905个氨基酸;推导的氨基酸... 详细信息

为了研究猪Toll样受体3(pTLR3)基因的选择性剪切机制,应用反转录-聚合酶链反应扩增技术,从猪外周血淋巴细胞中克隆了pTLR3及其剪接体基因(pTLR3a,pTLR3b)。pTLR3基因序列分析表明,克隆的基因ORF为2 718bp,编码905个氨基酸;推导的氨基酸序列分析显示,在其胞外区具有LRRs结构域,胞内区含有TIR结构域,具有TLR家族的典型结构特征。剪接体分析显示,pTLR3a和pTLR3b基因缺失第3外显子,都没有可编码跨膜区、胞内区的部分。相似性分析显示,与牛、马、猫和人的相似性较高,与家兔、鼠的相似性次之。证实pTLR3可变剪接体的存在为进一步研究其功能奠定了基础。

关键词：猪TLR3 克隆序列分析可变剪接

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Toll样受体介导的信号转导通路及其调控分子的研究进展

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中国兽医科学 2011年第4期41卷 433-440页

作者：曾爽何小兵陈国华房永祥贾怀杰景志忠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

概述了Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)的基本结构、识别的配体及亚细胞定位,重点介绍了TLRs信号转导通路的类型、作用机制以及在信号转导通路中起调控作用的关键分子,提出了对TLRs信号转导通路的研究必将有助于安全高效新型疫苗... 详细信息

概述了Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)的基本结构、识别的配体及亚细胞定位,重点介绍了TLRs信号转导通路的类型、作用机制以及在信号转导通路中起调控作用的关键分子,提出了对TLRs信号转导通路的研究必将有助于安全高效新型疫苗、药物的设计和研发。

关键词： Toll样受体信号转导通路调控分子天然免疫

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