检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：陈秋语陈荣贵赵卫东陈泽任巧云罗金王素艳李凯刘小翠卢海燕刘光远家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所新疆伊犁州动物疾病控制与诊断中心

本实验于2014年春季对新疆伊犁地区五个县的牛、羊蜱传性疾病进行了调查,采集血样若干,提取基因组,运用PCR的方法在样品中检测包括巴贝斯虫、泰勒虫、无浆体、立克次体以及莱姆病螺旋体在内的共五类病原的感染情况,以了解我国新疆伊犁... 详细信息

本实验于2014年春季对新疆伊犁地区五个县的牛、羊蜱传性疾病进行了调查,采集血样若干,提取基因组,运用PCR的方法在样品中检测包括巴贝斯虫、泰勒虫、无浆体、立克次体以及莱姆病螺旋体在内的共五类病原的感染情况,以了解我国新疆伊犁地区蜱传疾病的感染率以及分布情况,为该区域蜱传性疾病的防制打下基础。在新疆伊犁地区选择了5个采样点,采集动物血液样品和蜱虫样本。采集的血样提取全血基因组,采集的蜱样鉴定种属后也提取基因组。利用经典的检测基因保守区域设计引物,运用PCR的方法检测血液基因组样品中的以上5类病原,并对检测结果进行分析。2014年在伊犁地区总共采集牛、羊血液样品共计233份,其中牛血液样品108份,羊血液样品125份。根据巴贝斯虫及泰勒虫18SrRNA序列设计通用引物,运用套式PCR的方法检测上述样品,共检出阳性123份(其中牛21份,羊102份),测序结果经比对后正确的有102份。通过序列分析,在这102份阳性样品中泰勒虫属有三种,分别是泰勒虫OT3(Theileria ***3)71份,水牛泰勒虫(Theileria buffeli)26份以及羊泰勒虫(Theileria ovis)1份;巴贝斯虫阳性样品有4份,为莫氏巴贝斯虫(Babesia motasi)。基于无浆体16S rRNA的基因序列设计引物,运用套式PCR检测上述样品,阳性结果共计122份(其中牛13份,羊109份)。通过序列分析,共有三种结果,分别是绵羊无浆体(Anaplasma ovis)68份,嗜吞噬细胞无形体(Anaplasma phagocytophilum)51份以及Uncultured Anaplasma 3份。在上述血液样品中未检出莱姆病螺旋体。值得一提的是,以立克次体groEL为参照基因设计引物,在样品中扩增出了1份立克次体阳性样品,且序列分析后为正确结果。这也是迄今为止本实验室第一次从血液样品中扩增出的立克次体的阳性结果。蜱传病原对我国乃至世界家畜养殖业造成了严重的危害,因此,厘清诸如巴贝斯虫,泰勒虫以及其他蜱传性细菌病病原在家畜中的感染及流行情况,能够对这些病原的防控提供参考依据。

关键词：伊犁牛羊蜱传疾病流行病学调查

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2014年春季伊犁地区蜱传性病原微生物分子流行病学调查

2014年春季伊犁地区蜱传性病原微生物分子流行病学调查

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十五次全国学术会议暨第六次国际寄生虫学学术研讨会

目的:本实验于2014年春季对新疆伊犁地区五个县的牛、羊蜱传性疾病进行了调查,采集血样若干,提取基因组,运用PCR的方法在样品中检测包括巴贝斯虫、泰勒虫、无浆体、立克次体以及莱姆病螺旋体在内的共五类病原的感染情况,以了解我国新疆... 详细信息

目的:本实验于2014年春季对新疆伊犁地区五个县的牛、羊蜱传性疾病进行了调查,采集血样若干,提取基因组,运用PCR的方法在样品中检测包括巴贝斯虫、泰勒虫、无浆体、立克次体以及莱姆病螺旋体在内的共五类病原的感染情况,以了解我国新疆伊犁地区蜱传疾病的感染率以及分布情况,为该区域蜱传性疾病的防制打下基础。方法:在新疆伊犁地区选择了5个采样点,采集动物血液样品和蜱虫样本。采集的血样提取全血基因组,采集的蜱样鉴定种属后也提取基因组。在基因的保守区域设计引物,运用PCR的方法检测血液基因组样品中的以上5类病原,并对检测结果进行分析。结果:2014年在伊犁地区总共采集牛、羊血液样品共计233份,其中牛血液样品108份,羊血液样品125份。根据巴贝斯虫及泰勒虫18Sr RNA序列设计通用引物,运用套式PCR的方法检测上述样品,共检出阳性123份(其中牛21份,羊102份),测序结果经比对后正确的有102份。通过序列分析,在这102份阳性样品中泰勒虫属有三种,分别是泰勒虫OT3(Theileria ***3)71份,水牛泰勒虫(Theileria buffeli)26份以及羊泰勒虫(Theileria ovis)1份;巴贝斯虫阳性样品有4份,为莫氏巴贝斯虫(Babesia motasi)。基于无浆体16S r RNA的基因序列设计引物,运用套式PCR检测上述样品,阳性结果共计122份(其中牛13份,羊109份)。通过序列分析,共有三种结果,分别是绵羊无浆体(Anaplasma ovis)68份,嗜吞噬细胞无形体(Anaplasma phagocytophilum)51份以及Uncultured Anaplasma 3份。在上述血液样品中未检出莱姆病螺旋体。值得一提的是,以立克次体gro EL为参照基因设计引物,在样品中扩增出了1份立克次体阳性样品,且序列分析后为正确结果。这也是迄今为止本实验室第一次从血液样品中扩增出的立克次体的阳性结果。结论蜱传病原对我国乃至世界家畜养殖业造成了严重的危害,因此,厘清诸如巴贝斯虫,泰勒虫以及其他蜱传性细菌病病原在家畜中的感染及流行情况,能够对这些病原的防控提供参考依据。

关键词：伊犁牛羊蜱传疾病流行病学调查

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寄生性蠕虫丝氨酸蛋白酶抑制剂研究进展

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中国动物检疫 2015年第3期32卷 57-61页

作者：盖文燕王君玮付宝权中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046 中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032

丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serpin)是一种蛋白水解酶,广泛存在于生物体中。本文论述了丝氨酸蛋白酶抑制剂的分类、结构、功能及在寄生性蠕虫中的研究进展。指出通过对Serpin的研究,有望使其作为寄生性蠕虫病诊断和疫苗的候选分子,为寄生性蠕... 详细信息

丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serpin)是一种蛋白水解酶,广泛存在于生物体中。本文论述了丝氨酸蛋白酶抑制剂的分类、结构、功能及在寄生性蠕虫中的研究进展。指出通过对Serpin的研究,有望使其作为寄生性蠕虫病诊断和疫苗的候选分子,为寄生性蠕虫病防治奠定基础。

关键词：寄生性蠕虫丝氨酸蛋白酶抑制剂

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基于三维细胞培养的多房棘球蚴感染模型的建立

基于三维细胞培养的多房棘球蚴感染模型的建立

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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会

作者：李立闫鸿斌娄忠子贾万忠戴建武中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室中国科学院遗传与发育生物学研究所

(目的)多房棘球蚴病是棘球属多房棘球绦虫的幼虫（多房棘球蚴）寄生于动物体及人体内所致的一种严重影响人畜健康的人兽共患寄生虫病。目前对于该病的研究缺乏可模拟体内微环境的体外宿主-寄生虫研究模型,而基于三维（3D）细胞培养的宿... 详细信息

(目的)多房棘球蚴病是棘球属多房棘球绦虫的幼虫（多房棘球蚴）寄生于动物体及人体内所致的一种严重影响人畜健康的人兽共患寄生虫病。目前对于该病的研究缺乏可模拟体内微环境的体外宿主-寄生虫研究模型,而基于三维（3D）细胞培养的宿主-病原相互作用研究为该病的体外研究提供了新方法。本研究旨在使用胶原蛋白为原材料制备的3D多孔支架结构作为培养支架,实现原代肝实质细胞与骨髓间充质干细胞的3D共培养,进一步建立基于3D肝实质细胞-骨髓间充质干细胞的体外原头蚴的生长、发育的肝脏感染模型。（方法）本研究将从SD大鼠分离得到的肝实质细胞与骨髓间充质干细胞分别以5×10～5和1×10～5个数量进行混合,混匀的细胞接种于3D支架材料,添加培养基后置于5%CO的培养箱中进行培养,培养2 d后添加从小鼠感染棘球蚴动物模型中分离得到的原头蚴进行共培养,并分析原头蚴的生长发育,感染性及基因的表达谱。（结果）结果表明,与3D肝实质细胞-骨髓间充质干细胞共培养的原头蚴,在培养第42 d发育为包囊的比例为81.2%,死亡率为9%,另有9.8%的原头蚴未发育。收集上述包囊并给小鼠腹腔注射50个/只,在注射3 m后剖检小鼠,可见其腹腔内大量的包囊,其内部有大量发育良好原头节。对培养后发育为直径大于3 mm的包囊进行转录组分析,与原头蚴转录组相比较有807个差异表达基因,其中165个基因表达上调,642个基因表达下调（p<0.05,q<0.05）。对差异基因进行GO富集分析,结果表明上调的差异基因富集于环核苷酸生物合成和代谢过程、葡萄糖运输及跨膜转运、葡萄糖转运蛋白的跨膜活性、磷-氧裂解酶的活性、硫酸酯水解酶活性和裂合酶活性等（p<0.05）;下调的差异基因富集于对细胞表面受体信号传导途径、细胞黏附、细胞通讯过程、跨膜信号传导受体活性、离子跨膜和被动跨膜转运蛋白活性等（p<0.05）。对差异基因进行KEGG生物通路富集分析,结果表明上调的差异基因富集于代谢途径、半乳糖代谢、叶酸合成等;下调的差异基因富集于神经活性配体受体相互作用等。（结论）结果表明,本研究首次建立了3D多房棘球蚴培养、感染模型,并筛选出了大量差异表达基因,为体外棘球蚴-宿主相互作用提供了新方法。

关键词：三维细胞培养多房棘球蚴感染模型

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PCR-RFLP技术鉴别亚洲带绦虫和牛带绦虫

PCR-RFLP技术鉴别亚洲带绦虫和牛带绦虫

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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会

作者：王力骆学农刘光学才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室吉林大学动物医学学院

人带绦虫病是由猪带绦虫、牛带绦虫、亚洲带绦虫寄生于人体小肠内引起的一类重要的人兽共患寄生虫病,其流行广泛,危害严重。传统的绦虫鉴别主要依据虫体的形态学特点,包括节片的数目、头节小钩的有无、孕节的子宫分支、成节中第三卵巢... 详细信息

人带绦虫病是由猪带绦虫、牛带绦虫、亚洲带绦虫寄生于人体小肠内引起的一类重要的人兽共患寄生虫病,其流行广泛,危害严重。传统的绦虫鉴别主要依据虫体的形态学特点,包括节片的数目、头节小钩的有无、孕节的子宫分支、成节中第三卵巢叶和阴道括约肌的有无等。依靠形态特征可以把猪带绦虫与牛带绦虫和亚洲带绦虫相鉴别,但牛带绦虫和亚洲带绦虫形态相似,很难用传统方法鉴别亚洲带绦虫和牛带绦虫。线粒体细胞色素C氧化酶1(COX1,cytochrome c oxidase subunit 1)用于物种间及物种亚型的分类鉴别已有报道。本实验基于COX1基因采用聚合酶链式反应一限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术进行牛带绦虫和亚洲带绦虫的鉴别。首先,分别取本实验室保存的牛带绦虫、亚洲带绦虫成虫节片20 mg左右,移到已预冷的研钵内缓慢倒入适量液氮快速用力研磨成匀浆,按照组织DNA提取试剂盒说明书提取虫体基因组DNA,并检测DNA含量;其次,根据带绦虫线粒体COX1基因序列设计引物,分别以牛带绦虫和亚洲带绦虫的DNA为模板进行常规PCR扩增,PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳分离并使用DNA胶回收试剂盒进行回收纯化。最后,分别取上述胶回收产物均加入限制性内切酶BamHⅠ37℃水浴孵育3 h,经2%的琼脂糖凝胶电泳分离孵育后的DNA片段,在紫外灯下观察、拍照。1%的琼脂糖凝胶电泳结果显示,PCR反应均扩增出长度大约为961bp的COX1基因片段。BamHⅠ孵育的目的基因经2%琼脂糖凝胶电泳显示牛带绦虫仅有一条大小为961bp的条带,亚洲带绦虫有两条大小分别为640bp和321bp的条带。本实验应用PCR-RFLP方法成功鉴别出牛带绦虫和亚洲带绦虫,仅有一条约为961bp大小条带的是牛带绦虫;有640bp和321bp两条明显条带的是亚洲带绦虫。本实验方法操作简便,结果直观,为疫区基层从业人员准确区分牛带绦虫和亚洲带绦虫、为有关部门制定正确防治措施提供保障。

关键词：牛带绦虫亚洲带绦虫 PCR-RFLP 鉴别

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PCR-RFLP技术鉴别亚洲带绦虫和牛带绦虫

PCR-RFLP技术鉴别亚洲带绦虫和牛带绦虫

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十五次全国学术会议暨第六次国际寄生虫学学术研讨会

目的:人带绦虫病是由猪带绦虫、牛带绦虫、亚洲带绦虫寄生于人体小肠内引起的一类重要的人兽共患寄生虫病,其流行广泛,危害严重。传统的绦虫鉴别主要依据虫体的形态学特点,包括节片的数目、头节小钩的有无、孕节的子宫分支、成节中第三... 详细信息

目的:人带绦虫病是由猪带绦虫、牛带绦虫、亚洲带绦虫寄生于人体小肠内引起的一类重要的人兽共患寄生虫病,其流行广泛,危害严重。传统的绦虫鉴别主要依据虫体的形态学特点,包括节片的数目、头节小钩的有无、孕节的子宫分支、成节中第三卵巢叶和阴道括约肌的有无等。依靠形态特征可以把猪带绦虫与牛带绦虫和亚洲带绦虫相鉴别,但牛带绦虫和亚洲带绦虫形态相似,很难用传统方法鉴别亚洲带绦虫和牛带绦虫。线粒体细胞色素C氧化酶1(COX1,cytochrome c oxidase subunit 1)用于物种间及物种亚型的分类鉴别已有报道。本实验基于COX1基因采用聚合酶链式反应—限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术进行牛带绦虫和亚洲带绦虫的鉴别。方法:首先,分别取本实验室保存的牛带绦虫、亚洲带绦虫成虫节片20㎎左右,移到已预冷的研钵内缓慢倒入适量液氮快速用力研磨成匀浆,按照组织DNA提取试剂盒说明书提取虫体基因组DNA,并检测DNA含量;其次,根据带绦虫线粒体COX1基因序列设计引物,分别以牛带绦虫和亚洲带绦虫的DNA为模板进行常规PCR扩增,PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳分离并使用DNA胶回收试剂盒进行回收纯化。最后,分别取上述胶回收产物均加入限制性内切酶Bam HⅠ37℃水浴孵育3 h,经2%的琼脂糖凝胶电泳分离孵育后的DNA片段,在紫外灯下观察、拍照。结果:1%的琼脂糖凝胶电泳结果显示,PCR反应均扩增出长度大约为961bp的COX1基因片段。Bam HⅠ孵育的目的基因经2%琼脂糖凝胶电泳显示牛带绦虫仅有一条大小为961bp的条带,亚洲带绦虫有两条大小分别为640bp和321bp的条带。结论:本实验应用PCR-RFLP方法成功鉴别出牛带绦虫和亚洲带绦虫,仅有一条约为961bp大小条带的是牛带绦虫;有640bp和321bp两条明显条带的是亚洲带绦虫。本实验方法操作简便,结果直观,为疫区基层从业人员准确区分牛带绦虫和亚洲带绦虫、为有关部门制定正确防治措施提供保障。

关键词：牛带绦虫亚洲带绦虫 PCR-RFLP 鉴别

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绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族成员的鉴定及结构分析

绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族成员的鉴定及结构分析

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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会

作者：郭爱疆张少华王帅侯俊玲李君君魏艳玲骆学农才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心

半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族由一类广泛存在于生物体的半胱氨酸蛋白酶抑制剂组成,分为stefins,cystatins and kininogens三个亚家族。研究报道线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂在寄生虫逃避宿主免疫应答、适应寄生生活中发挥着重要作用。本研究... 详细信息

半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族由一类广泛存在于生物体的半胱氨酸蛋白酶抑制剂组成,分为stefins,cystatins and kininogens三个亚家族。研究报道线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂在寄生虫逃避宿主免疫应答、适应寄生生活中发挥着重要作用。本研究旨在鉴定绦虫的半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因家族。首先,利用生物学软件在基因组数据库寻找公布的各种绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因并对其进行结构分析;其次对猪带绦虫、牛带绦虫及亚洲带绦虫样品分别进行RT-PCR验证;通过构建系统发育树对鉴定的半胱氨酸蛋白酶抑制剂进行分类。研究发现,绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族由两个亚家族stefms和cystatins组成,同时通过克隆猪带绦虫、牛带绦虫及亚洲带绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂的成员验证了基因序列。除了亚洲带绦虫stefins亚家族具有两个成员(Tastefin1和Tastefin2)外,其它绦虫的stefins和cystatins家族均有一个成员组成。Tastefin2基因比其它绦虫的stefins基因在N端多出22个氨基酸,分析显示这22个氨基酸不具有信号肽的特点。所有其它绦虫的stefins基因长度和保守结构域符合典型的半胱氨酸蛋白酶抑制剂特性,不含二硫键和糖基化位点。对绦虫的cystatins序列分析发现,它们具有典型半胱氨酸蛋白酶抑制剂cystatins的信号肽序列、保守结构域序列(Q、QVVAG、PW)和两个保守的二硫键。但是值得关注的是带科绦虫的cystatins基因没有两个保守的二硫键,存在一个串联的重复区,而重复区没有保守的结构域。这种结构在其它物种未见报道。系统发育分析显示带科绦虫cystatins形成了一个独立的分支,说明与其它物种存在很大分子差异。通过与已解析的人stefin和鸡cystatin三级结构比较分析,发现绦虫stefms与人stefm模型具有相同的空间结构。尽管带科绦虫cystatins不具有保守的二硫键,在鸡cystatin形成第一个二硫键位置处,它们空间结构与鸡cystatin相同。在鸡cystatin形成第二个二硫键位置处,带科绦虫cystatins与鸡cystatin结构不同。通过结构分析初步推测鉴定的绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂stefins和cystatins与人的stefin、鸡的cystatin一样,具有抑制半胱氨酸蛋白酶的功能。另外根据带科绦虫cystatins的特殊结构推测可能还存在其它功能。本研究鉴定了绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族成员,并对其在分类、进化和功能变异方面进行了初步探讨,以上结果为下一步研究其生物学功能奠定了基础。

关键词：绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂序列分析进化三级结构

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绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族成员的鉴定及结构分析

绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族成员的鉴定及结构分析

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十五次全国学术会议暨第六次国际寄生虫学学术研讨会

目的:半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族由一类广泛存在于生物体的半胱氨酸蛋白酶抑制剂组成,分为stefins,cystatins and kininogens三个亚家族。研究报道线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂在寄生虫逃避宿主免疫应答、适应寄生生活中发挥着重要作用。本... 详细信息

目的:半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族由一类广泛存在于生物体的半胱氨酸蛋白酶抑制剂组成,分为stefins,cystatins and kininogens三个亚家族。研究报道线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂在寄生虫逃避宿主免疫应答、适应寄生生活中发挥着重要作用。本研究旨在鉴定绦虫的半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因家族。方法:首先,利用生物学软件在基因组数据库寻找公布的各种绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因并对其进行结构分析;其次对猪带绦虫、牛带绦虫及亚洲带绦虫样品分别进行RT-PCR验证;通过构建系统发育树对鉴定的半胱氨酸蛋白酶抑制剂进行分类。结果:研究发现,绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族由两个亚家族stefins和cystatins组成,同时通过克隆猪带绦虫、牛带绦虫及亚洲带绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂的成员验证了基因序列。除了亚洲带绦虫stefins亚家族具有两个成员(Tastefin1和Tastefin2)外,其它绦虫的stefins和cystatins家族均有一个成员组成。Tastefin2基因比其它绦虫的stefins基因在N端多出22个氨基酸,分析显示这22个氨基酸不具有信号肽的特点。所有其它绦虫的stefins基因长度和保守结构域符合典型的半胱氨酸蛋白酶抑制剂特性,不含二硫键和糖基化位点。对绦虫的cystatins序列分析发现,它们具有典型半胱氨酸蛋白酶抑制剂cystatins的信号肽序列、保守结构域序列(Q、QVVAG、PW)和两个保守的二硫键。但是值得关注的是带科绦虫的cystatins基因没有两个保守的二硫键,存在一个串联的重复区,而重复区没有保守的结构域。这种结构在其它物种未见报道。系统发育分析显示带科绦虫cystatins形成了一个独立的分支,说明与其它物种存在很大分子差异。通过与已解析的人stefin和鸡cystatin三级结构比较分析,发现绦虫stefins与人stefin模型具有相同的空间结构。尽管带科绦虫cystatins不具有保守的二硫键,在鸡cystatin形成第一个二硫键位置处,它们空间结构与鸡cystatin相同。在鸡cystatin形成第二个二硫键位置处,带科绦虫cystatins与鸡cystatin结构不同。通过结构分析初步推测鉴定的绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂stefins和cystatins与人的stefin、鸡的cystatin一样,具有抑制半胱氨酸蛋白酶的功能。另外根据带科绦虫cystatins的特殊结构推测可能还存在其它功能。结论:本研究鉴定了绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族成员,并对其在分类、进化和功能变异方面进行了初步探讨,以上结果为下一步研究其生物学功能奠定了基础。

关键词：绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂序列分析进化三级结构

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miR-275在长角血蜱不同发育阶段及组织中表达的动态变化

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中国兽医科学 2014年第10期44卷 1014-1021页

作者：王芳芳罗金袁小松谢俊仁田占成王素艳郭锦霞刘光远中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

根据本实验室建立的高通量测序数据库中长角血蜱miR-275的成熟体序列信息,设计出特异性茎环引物及PCR扩增引物,同时以长角血蜱β-actin基因(GenBank登录号:AY254898)为内参基因,绘制标准曲线,计算长角血蜱miR-275的标准拷贝数,采用Graph... 详细信息

根据本实验室建立的高通量测序数据库中长角血蜱miR-275的成熟体序列信息,设计出特异性茎环引物及PCR扩增引物,同时以长角血蜱β-actin基因(GenBank登录号:AY254898)为内参基因,绘制标准曲线,计算长角血蜱miR-275的标准拷贝数,采用GraphPad Prism 5软件分析miR-275在长角血蜱不同发育时期及不同组织中的表达情况。结果显示,长角血蜱miR-275和β-actin标准曲线的回归系数均大于0.99,熔解曲线峰值单一,Ct值的变异率均小于5%,表明引物特异性好,标准曲线重复性和稳定性高。用real-time PCR方法对miR-275在长角血蜱卵的不同发育时期、蜱不同发育阶段及不同组织中的表达情况进行分析。结果显示,miR-275在长角血蜱卵发育到第16天的拷贝数最大,为(13.07±1.63)×106 copies/μL,是表达量最低的第5天的43.57倍;在饱血成蜱中拷贝数最多,为(18.95±1.55)×106 copies/μL,是饥饿成蜱的236.88倍;长角血蜱卵巢中拷贝数是最高的,为(15.29±3.59)×106 copies/μL,是表皮表达量的10.47倍。结果表明,miR-275在长角血蜱卵的发育、细胞增殖、组织分化等过程中可能起到了至关重要的作用。

关键词：长角血蜱 microRNA 荧光定量PCR 标准曲线

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猪带绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族基因的克隆与序列分析

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中国兽医科学 2014年第7期44卷 678-684页

作者：李君君骆学农张少华侯俊玲郭爱疆才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

为了研究猪带绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因家族的结构特征及编码蛋白的功能,根据GeneDB中获得的2条cDNA序列设计引物,以猪囊尾蚴总RNA为模板进行RT-PCR,获得猪带绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族(TsoStefin和TsoCystatin)基因的完整开放... 详细信息

为了研究猪带绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因家族的结构特征及编码蛋白的功能,根据GeneDB中获得的2条cDNA序列设计引物,以猪囊尾蚴总RNA为模板进行RT-PCR,获得猪带绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族(TsoStefin和TsoCystatin)基因的完整开放阅读框序列,并进行生物信息学分析。结果表明,所获得的2条序列均含有半胱氨酸蛋白酶抑制剂特征性的结构域。TsoStefin由98个氨基酸残基组成,不含二硫键和糖基化位点,为细胞内蛋白;TsoCystatin由274个氨基酸残基构成,含有1个糖基化位点和2个相似的结构域,第1~18位氨基酸残基组成信号肽,属分泌型蛋白。系统发育树显示,TsoStefin是半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族1的成员,TsoCystatin属家族2的成员,与部分绦虫的亲缘关系较近。从上述结果推测,所获得的2条基因均属于猪带绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族基因。

关键词：猪带绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂克隆序列分析

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