检索结果-内蒙古大学图书馆

抗原表位预测方法的研究进展

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中国兽医科学 2009年第10期39卷 938-940页

作者：王艳华张德林殷宏付宝权中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

概述了B细胞线性表位、B细胞构象性表位、CTL表位及Th表位等抗原表位预测方法的研究进展,并对每种表位预测方法的预测结果进行了比较,旨在为从事抗原表位研究的人员提供理论参考。

关键词： B细胞表位 T细胞表位表位预测

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小亚璃眼蜱4D8基因在毕赤酵母中的表达及免疫原性分析

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中国兽医科学 2011年第4期41卷 375-379页

作者：赵金国刘爱红殷宏罗建勋天水市动物疫病预防控制中心甘肃天水741000 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

为进行抗小亚璃眼蜱疫苗的研究,采用PCR方法从重组质粒pGEM-T-pHyaa4D8中克隆了pHyaa4D8分子的基因片段,构建了真核融合表达载体pPIC9K-pHyaa4D8,在毕赤酵母中进行表达,并对重组酵母菌的发酵条件进行了优化。结果表明,表达出约19ku的目... 详细信息

为进行抗小亚璃眼蜱疫苗的研究,采用PCR方法从重组质粒pGEM-T-pHyaa4D8中克隆了pHyaa4D8分子的基因片段,构建了真核融合表达载体pPIC9K-pHyaa4D8,在毕赤酵母中进行表达,并对重组酵母菌的发酵条件进行了优化。结果表明,表达出约19ku的目的蛋白,诱导表达的最佳时间是72h。Western-blot分析结果显示,表达产物能被半饱血小亚璃眼蜱雌性成蜱唾液腺抗原免疫兔血清识别,在19ku左右出现目的条带,说明表达的目的蛋白具有反应活性。

关键词：小亚璃眼蜱 4D8基因片段真核表达毕赤酵母

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甘肃合作猪白细胞抗原经典Ⅱ类分子DR基因克隆及生物信息学分析

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畜牧兽医学报 2009年第11期40卷 1662-1668页

作者：莫斯科房永祥冯海燕景志忠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

为了克隆甘肃合作猪白细胞抗原(SLA)DRA和DRB基因,分析SLA-DR基因特性和抗原多态性,首次研究了甘肃合作猪在异种移植等研究领域中的应用前景。应用RT-PCR分别扩增合作猪SLA-DRA和SLA-DRB基因并进行测序,将所获得基因序列登录GenBank(登... 详细信息

为了克隆甘肃合作猪白细胞抗原(SLA)DRA和DRB基因,分析SLA-DR基因特性和抗原多态性,首次研究了甘肃合作猪在异种移植等研究领域中的应用前景。应用RT-PCR分别扩增合作猪SLA-DRA和SLA-DRB基因并进行测序,将所获得基因序列登录GenBank(登录号分别为FJ905823和FJ9058258),再用NCBI中的BLAST和ExPASy等相关软件进行生物信息学分析。发现在猪-人异种移植中,近亲繁殖的合作猪种在与人类主要组织相容性复合体遗传基因水平相似性方面有一定优势,也可作为备选猪种对相关基因进行必要的修饰和改造。

关键词：猪白细胞抗原合作猪 RT-PCR 生物信息学

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猪带绦虫TSOL18特异性单克隆抗体的制备及其体外杀虫作用的研究

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畜牧兽医学报 2010年第2期41卷 208-213页

作者：郭爱疆吴润贾万忠刘斌闫鸿斌骆学农才学鹏甘肃农业大学动物医学院兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046

本研究目的在于制备抗猪带绦虫TSOL18单克隆抗体,并分析单抗对六钩蚴的杀伤作用。采用SephadexG-100纯化在毕赤酵母中表达的猪带绦虫六钩蚴TSOL18蛋白;纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术建立能分泌抗TSOL18单克隆抗体的细胞株;通... 详细信息

本研究目的在于制备抗猪带绦虫TSOL18单克隆抗体,并分析单抗对六钩蚴的杀伤作用。采用SephadexG-100纯化在毕赤酵母中表达的猪带绦虫六钩蚴TSOL18蛋白;纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术建立能分泌抗TSOL18单克隆抗体的细胞株;通过ELISA叠加试验进行mAb的抗原表位分析;采用间接ELISA法测定TSOL18单克隆抗体特异性及腹水效价;采用抗TSOL18单克隆抗体对激活的猪带绦虫六钩蚴进行体外六钩蚴杀伤试验,观察单抗对猪带绦虫六钩蚴活力的影响。结果成功获得12株稳定分泌抗TSOL18单克隆抗体的杂交瘤细胞株,识别2个不同抗原表位,不同抗原表位的2株单克隆抗体腹水效价分别为1×102、1×106。抗体体外六钩蚴杀伤试验结果证明,在有补体的情况下,多抗和单抗作用6 d后,六钩蚴结构模糊,边缘不清晰。表明单抗对六钩蚴有一定的杀伤作用。

关键词：猪带绦虫六钩蚴 TSOL18 单抗体外杀六钩蚴作用

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感染弓形虫的肉鸡的临床症状及病理变化

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中国兽医科学 2014年第9期44卷 951-955页

作者：蒲元华王萌杨晓宇张德林中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

为观察鸡感染弓形虫后的临床症状及组织器官的病理特点,以弓形虫GJS株速殖子人工感染鸡,然后在不同时间剖杀,观察其组织器官病理变化;取内脏组织器官,浸泡于100mL/L中性福尔马林溶液中,运用常规HE染色观察其病理变化特点,并用免疫组织... 详细信息

为观察鸡感染弓形虫后的临床症状及组织器官的病理特点,以弓形虫GJS株速殖子人工感染鸡,然后在不同时间剖杀,观察其组织器官病理变化;取内脏组织器官,浸泡于100mL/L中性福尔马林溶液中,运用常规HE染色观察其病理变化特点,并用免疫组织化学检测组织中弓形虫速殖子。结果显示,鸡感染弓形虫后出现精神沉郁、食欲不振、形体消瘦、跛行、拉稀等临床症状。解剖发现,被感染鸡肝肿大,肺发炎,胸、腹腔液增多,心肌变性,脾肿大,肠道出血。HE染色观察发现,肺的病理变化尤为明显,出现出血、充血;肝汇管区增大,有炎性细胞浸润;脾出血、充血,出现弥漫性增生;大脑中纤维组织增生,脑细胞减少。说明鸡感染弓形虫速殖子后能产生比较明显的临床症状和病理变化。

关键词：鸡弓形虫临床症状病理变化

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应用三磷酸核苷水解酶基因检测弓形虫方法的建立

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中国兽医科学 2010年第12期40卷 1223-1227页

作者：王萌王艳华蔡志杰付宝权李文卉张德林中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

用Primer Explorer V4软件针对弓形虫三磷酸核苷水解酶(NTPase)基因设计了6条环介导等温扩增(LAMP)特异性引物,建立弓形虫LAMP反应体系,并进行特异性和敏感性试验。结果显示,用该反应体系30 min即可检测出弓形虫NTPase基因,产生瀑布状... 详细信息

用Primer Explorer V4软件针对弓形虫三磷酸核苷水解酶(NTPase)基因设计了6条环介导等温扩增(LAMP)特异性引物,建立弓形虫LAMP反应体系,并进行特异性和敏感性试验。结果显示,用该反应体系30 min即可检测出弓形虫NTPase基因,产生瀑布状的特异性条带,检测极限为20 copies,敏感性比PCR高10倍。与犬新孢子虫、鹦鹉热衣原体、柔嫩艾美耳球虫、吕氏泰勒虫、羊巴贝斯虫未定种和牛巴贝斯虫间无交叉反应,且重复性良好。应用此方法,可以在攻虫后第2天于试验猪血液中检测出弓形虫,比PCR方法提前2 d。表明将弓形虫NTPase基因作为环介导等温扩增检测弓形虫的目的基因,具有特异性强、敏感性高的特点,是快速诊断弓形虫病的一种新方法。

关键词：弓形虫三磷酸核苷水解酶基因环介导等温扩增

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旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制因子基因的克隆与原核表达

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中国兽医科学 2010年第5期40卷 470-474页

作者：盖文燕李文卉王鸿盛姚菊霞曲自刚王艳华张德林付宝权中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

根据GenBank中旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制因子(Tsserpin)基因序列设计1对引物,从旋毛虫肌幼虫提取总RNA,应用RT-PCR扩增获得目的基因片段,进行限制性酶切后连接到表达质粒载体pET30a,构建重组表达质粒pET30a-Tsserpin,转化大肠杆菌DH5α,... 详细信息

根据GenBank中旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制因子(Tsserpin)基因序列设计1对引物,从旋毛虫肌幼虫提取总RNA,应用RT-PCR扩增获得目的基因片段,进行限制性酶切后连接到表达质粒载体pET30a,构建重组表达质粒pET30a-Tsserpin,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,经PCR、限制性酶切分析及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG进行了诱导表达。SDS-PAGE分析表达产物,表达产物纯化后用Western-blotting鉴定Tsserpin重组蛋白的抗原性。PCR与酶切鉴定结果显示,构建的重组表达质粒pET30a-Tsserpin与预期结果一致。测序结果表明,插入片段为1122bp,编码373个氨基酸,与GenBank中旋毛虫Tsserpin基因的相似性为99%。含有pET30a-Tsserpin重组表达质粒的大肠杆菌BL21(DE3)诱导后得到了高效表达,SDS-PAGE分析结果显示,表达产物的分子质量约为48.5ku,而且主要以包涵体形式存在。Western-blot分析结果表明Tsserpin重组蛋白可以被旋毛虫感染猪阳性血清特异性识别,提示其具有良好的抗原性,可以作为猪旋毛虫病免疫诊断的候选抗原。

关键词：旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制因子重组蛋白抗原性

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绦虫线粒体基因组学研究进展

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中国预防兽医学报 2011年第11期33卷 910-914页

作者：贾万忠闫鸿斌娄忠子倪兴维史万贵郭爱疆詹芳中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046 甘肃省动物疫病控制中心甘肃兰州730046

绦虫大约有1 500多种,隶属于扁形动物门（Platyhel-minthes）绦虫纲（Cestoda）,营寄生生活,由成虫及其幼虫（蚴）所致的绦虫病和绦虫蚴病严重危害人和动物的健康。绦虫线粒体基因组有许多独特的特征如基因组很小,基因位置排列相对稳定... 详细信息

绦虫大约有1 500多种,隶属于扁形动物门（Platyhel-minthes）绦虫纲（Cestoda）,营寄生生活,由成虫及其幼虫（蚴）所致的绦虫病和绦虫蚴病严重危害人和动物的健康。绦虫线粒体基因组有许多独特的特征如基因组很小,基因位置排列相对稳定等,tRNA和两个主要非编码区的二级结构、碱基组成和变异等有也其自身特点,这些特征已经在研究物种分类、基因进化、现有物种进化史等方面得到应用[1-4]。

关键词：线粒体基因组基因组学绦虫纲扁形动物门物种分类相对稳定二级结构非编码区

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弓形虫GJS株致密颗粒6基因真核表达质粒的构建及在BHK-21细胞中的表达

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中国兽医科学 2010年第4期40卷 363-367页

作者：张燕丽曹丽艳芦赟蔡志杰王艳华付宝权李文卉张德林中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

根据GenBank数据库中弓形虫RH株GRA6基因序列设计1对引物,采用PCR技术从弓形虫GJS株基因组DNA中扩增GRA6基因,导入真核表达载体pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO,转化大肠杆菌DH5α,经酶切、PCR及测序鉴定,将重组质粒转染BHK-21细胞。GFP标签证明质... 详细信息

根据GenBank数据库中弓形虫RH株GRA6基因序列设计1对引物,采用PCR技术从弓形虫GJS株基因组DNA中扩增GRA6基因,导入真核表达载体pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO,转化大肠杆菌DH5α,经酶切、PCR及测序鉴定,将重组质粒转染BHK-21细胞。GFP标签证明质粒DNA成功转染到细胞中并得以表达,通过Western-blot分析,细胞裂解液中有一条约52 ku的条带,可被山羊抗弓形虫超免疫血清识别,大小与预测值相符。表明真核表达质粒pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO-GRA6中的GRA6基因在BHK-21细胞中获得表达且表达产物具有抗原性。

关键词：刚地弓形虫致密颗粒6 基因克隆真核表达

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18S rRNA序列差异在马梨形虫分类学中的应用

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中国兽医杂志 2012年第10期48卷 6-9页

作者：罗金刘光远田占成谢俊仁沈辉田美媛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

为揭示18SrRNA V4高变区在物种分类学的本质意义,及进一步阐述马泰勒虫(之前称马巴贝斯虫)的分类学地位,本试验参考马泰勒虫(DQ287951)和驽巴贝斯虫(FJ209026)18SrRNA基因序列,在其V4高变区设计引物。将获得的片段克隆至pMD19-T进行测序... 详细信息

为揭示18SrRNA V4高变区在物种分类学的本质意义,及进一步阐述马泰勒虫(之前称马巴贝斯虫)的分类学地位,本试验参考马泰勒虫(DQ287951)和驽巴贝斯虫(FJ209026)18SrRNA基因序列,在其V4高变区设计引物。将获得的片段克隆至pMD19-T进行测序,正确的结果与其他种梨形虫的相应序列进行分析。系统发生树结果显示,泰勒虫和巴贝斯虫处于明显的两个分支,而称之为马巴贝斯虫的物种和泰勒虫有着较为密切的关系,他们处于同一分支,其亲缘关系较巴贝斯虫更远。序列对齐分析表明,巴贝斯虫核苷酸序列相对于泰勒虫种序列存在多个位点的缺失和突变。而马巴贝斯虫和泰勒虫18SrRNA V4高变区核苷酸序列的相似程度较高,与巴贝斯虫在该序列上的差异较大。以上结果表明,泰勒虫种和巴贝斯虫种18SrRNA V4高变区核苷酸序列间的这种缺失和突变可作为泰勒虫和巴贝斯虫分类依据的本质因素之一。马巴贝斯虫应隶属于泰勒虫科,泰勒虫属。

关键词：泰勒虫巴贝斯虫分类学 18S rRNA

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