检索结果-内蒙古大学图书馆

湖北农业科学 2010年第3期49卷 715-717,726页

作者：刘萍丛国正独军政邵军军林彤常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/国家口蹄疫参考实验室兰州730046 中农威特生物科技股份有限公司兰州730046

细胞凋亡是机体维持自身稳定的一种基本生理机制,是有许多基因产物及细胞因子参与的一种有序的细胞自我消亡形式。细胞凋亡发生过程的启动和进行受到精确调控,具有独特而复杂的信号系统。各种凋亡信号通过信号传导通路传至细胞内,激活... 详细信息

细胞凋亡是机体维持自身稳定的一种基本生理机制,是有许多基因产物及细胞因子参与的一种有序的细胞自我消亡形式。细胞凋亡发生过程的启动和进行受到精确调控,具有独特而复杂的信号系统。各种凋亡信号通过信号传导通路传至细胞内,激活靶分子而产生细胞效应,引发细胞凋亡。一般认为,细胞凋亡存在3条主要通路:线粒体通路、内质网通路和死亡受体通路,各通路间互相联系,共同调节细胞凋亡。

关键词：细胞凋亡信号传导死亡受体线粒体内质网

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A型塞内卡病毒激活炎症因子表达及诱导细胞焦亡

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中国兽医科学 2022年第5期52卷 586-594页

作者：李媛媛马旭升 Mohiuddin 郑海学刘湘涛马永华甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业农村部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

初步探索A型塞内卡病毒(SVA)感染3D4/21细胞后引起细胞因子的变化,以及诱导细胞焦亡的分子机制。用SVA感染3D4/21细胞,不同时间点分别检测IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-12、GM-CSF、IL-10、IFN-γ、CXCL10细胞因子mRNA的表达水平和相关炎... 详细信息

初步探索A型塞内卡病毒(SVA)感染3D4/21细胞后引起细胞因子的变化,以及诱导细胞焦亡的分子机制。用SVA感染3D4/21细胞,不同时间点分别检测IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-12、GM-CSF、IL-10、IFN-γ、CXCL10细胞因子mRNA的表达水平和相关炎症因子分泌水平;采用CCK-8检测细胞活力;用乳酸脱氢酶释放试验检测细胞膜的损伤程度;用Western-blot检测目的基因在蛋白水平的表达程度。结果显示:SVA感染细胞后,IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-12、GM-CSF、IL-10、IFN-γ、CXCL10细胞因子mRNA表达水平均升高,与转录水平相似,SVA能够诱导IL-1β、IL-6、TNF-α以及IL-12分泌水平上调;SVA感染3D4/21细胞后,焦亡相关基因在mRNA水平表达增加,焦亡相关蛋白GSDMD、IL-1β以及Caspase-1被激活;SVA感染细胞后,导致细胞活力下降,细胞膜完整性丧失;转染sh-NLRP3或加入NLRP3抑制剂MCC950,Caspase-1抑制剂VX765,然后感染SVA,发现焦亡相关活性蛋白表达降低。结论:SVA感染3D4/21细胞后引起上述细胞因子表达增加,激活Caspase-1引起的细胞焦亡,且与NLRP3炎症小体途径相关。

关键词： A型塞内卡病毒炎症反应细胞焦亡 NLRP3炎症小体

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实时荧光定量PCR技术研究进展及其在兽医学中的应用

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中国农学通报 2010年第7期26卷 11-15页

作者：薛霜独军政高闪电常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)技术融汇了传统PCR技术灵敏、快速、特异的特点以及光谱技术的高敏感性和高精确定量的优点,直接探测PCR过程中荧光信号的变化以获得定量的结果。随着现代医学和分子生... 详细信息

实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)技术融汇了传统PCR技术灵敏、快速、特异的特点以及光谱技术的高敏感性和高精确定量的优点,直接探测PCR过程中荧光信号的变化以获得定量的结果。随着现代医学和分子生物学的飞速发展,该技术已在兽医学的基础研究及临床应用方面发挥着越来越大的作用。笔者将对FQ-PCR技术的原理、检测方法研究进展以及目前的应用状况等作一综述。

关键词：实时荧光定量PCR 探针应用

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口蹄疫病毒前导蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

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中国兽医科学 2020年第10期50卷 1215-1219页

作者：李娜袁红李平花孙普白兴文龚婷余琼朱国强李坤马雪青卢曾军包慧芳刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 河南牧业经济学院河南郑州450000

前导蛋白(Lpro)是口蹄疫病毒(FMDV)编码的重要毒力因子,在拮抗宿主抗病毒反应中发挥多种功能。为了获得抗Lpro的抗体以研究Lpro的功能,本研究将L基因克隆到pET-28a(+)原核表达质粒中,构建了重组表达质粒pET-28a-L,转化至大肠杆菌BL21中... 详细信息

前导蛋白(Lpro)是口蹄疫病毒(FMDV)编码的重要毒力因子,在拮抗宿主抗病毒反应中发挥多种功能。为了获得抗Lpro的抗体以研究Lpro的功能,本研究将L基因克隆到pET-28a(+)原核表达质粒中,构建了重组表达质粒pET-28a-L,转化至大肠杆菌BL21中进行重组蛋白的诱导表达,所获得重组His-Lpro主要以包涵体形式存在,利用Ni-NTA柱纯化获得了高纯度的His-Lpro,将His-重组Lpro与弗氏佐剂混合乳化后免疫新西兰大白兔,制备了高效价的Lpro兔多克隆抗体血清。通过免疫荧光试验(IFA)、免疫印迹试验(WB)检测Lpro兔多克隆抗体血清的反应原性。结果显示,该多抗血清能够特异性识别FMDV感染BHK21细胞后表达的Lpro,表明本研究制备的Lpro多抗血清具有很好的反应原性,为深入研究Lpro功能及其拮抗宿主天然免疫的作用机理奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒前导蛋白原核表达多克隆抗体

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猪瘟病毒P7基因的原核表达及表达产物的寡聚化研究

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中国兽医科学 2014年第3期44卷 235-239页

作者：孙德惠闫丹董虎魏衍全敖大王海明孙世琪中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 四川农业大学动物医学院动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川雅安625014

采用RT-PCR方法从接种了猪瘟疫苗的家兔脾组织中扩增出了P7基因,将其克隆到表达载体pSMK中,测序验证后转化入表达菌BL21中进行诱导表达。结果显示,重组菌可以表达出分子质量约为19ku的重组融合蛋白,经终浓度为1mmol/L的IPTG诱导2h的表... 详细信息

采用RT-PCR方法从接种了猪瘟疫苗的家兔脾组织中扩增出了P7基因,将其克隆到表达载体pSMK中,测序验证后转化入表达菌BL21中进行诱导表达。结果显示,重组菌可以表达出分子质量约为19ku的重组融合蛋白,经终浓度为1mmol/L的IPTG诱导2h的表达效果较好。表达产物经Ni柱纯化,可得到纯度较好的目的蛋白。纯化的蛋白置于4℃2d后进行Western-blot检测,发现有多聚体形成;戊二醛交联结果表明,P7蛋白可形成同源寡聚体。此研究结果为进一步研究猪瘟病毒P7基因表达蛋白的性质和功能奠定了基础。

关键词：猪瘟病毒 P7蛋白原核表达同源寡聚

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非洲猪瘟病毒CP312R蛋白T细胞表位的筛选及抗原性分析

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中国兽医科学 2022年第4期52卷 410-416页

作者：周晓丽毛箬青朱紫祥孙德惠朱昱茜王凌云齐萌郑海学塔里木大学动物科学学院新疆阿拉尔843300 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业农村部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

利用免疫表位数据库(IEDB)预测和筛选非洲猪瘟病毒(ASFV)CP312R蛋白的T细胞表位;通过流式细胞术检测表位肽促进ASFV抗原特异性脾淋巴细胞增殖情况,促进免疫细胞分泌IFN-γ水平及其对T淋巴细胞杀伤作用的影响;通过RT-qPCR技术分析表位肽... 详细信息

利用免疫表位数据库(IEDB)预测和筛选非洲猪瘟病毒(ASFV)CP312R蛋白的T细胞表位;通过流式细胞术检测表位肽促进ASFV抗原特异性脾淋巴细胞增殖情况,促进免疫细胞分泌IFN-γ水平及其对T淋巴细胞杀伤作用的影响;通过RT-qPCR技术分析表位肽对ASFV在骨髓巨噬细胞中复制的影响。结果显示,筛选出2条表位肽PP8和PP9,均可促进ASFV抗原特异性脾淋巴细胞增殖(P<0.05),促进CD8^(+)T细胞分泌IFN-γ的水平(P<0.05)。表位肽PP8不能显著促进CD8^(+)T细胞对ASFV感染的靶细胞的杀伤效率(P>0.05),而表位肽PP9能够显著促进CD8^(+)T细胞对靶细胞的杀伤效率(P<0.01)。2条表位肽均可显著抑制ASFV在骨髓巨噬细胞中的复制(P<0.01)。本研究结果为筛选ASFV保护抗原或表位提供了基础数据。

关键词：非洲猪瘟病毒 T细胞表位筛选蛋白抗原性

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羊传染性脓疱病毒基因组结构和主要基因功能研究进展

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动物医学进展 2014年第7期35卷 82-85页

作者：成伟伟张克山刘永杰孔汉金尚佑军刘湘涛刘磊中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

羊传染性脓疱(羊口疮)是由羊传染性脓疱病毒(羊口疮病毒,ORFV)引起的一种重要人兽共患传染病,ORFV作为副痘病毒属的代表成员之一,其基因组结构和功能具有明显的种属特异性。ORFV基因组是由中央核心区和两端反向末端重复序列构成,中央核... 详细信息

羊传染性脓疱(羊口疮)是由羊传染性脓疱病毒(羊口疮病毒,ORFV)引起的一种重要人兽共患传染病,ORFV作为副痘病毒属的代表成员之一,其基因组结构和功能具有明显的种属特异性。ORFV基因组是由中央核心区和两端反向末端重复序列构成,中央核心区主要调控病毒的复制、组装和释放,两端重复序列则决定ORFV的毒力、宿主范围、参与免疫逃避及免疫调节。论文综述了ORFV的基因组结构及功能最新研究进展。

关键词：羊传染性脓疱病毒基因组结构及功能

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C型口蹄疫病毒VP1基因的原核表达及重组蛋白的纯化

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畜牧与兽医 2009年第7期41卷 4-7页

作者：常惠芸独军政丛国正邵军军林彤冯金瑞刘萍中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州730046

利用PCR技术扩增获得C型口蹄疫病毒VP1基因,将其克隆到原核表达载体pET-30α(+)上,构建重组表达质粒pET-VP1。质粒pET-VP1转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导VP1基因的表达,收集不同时间的菌液进行SDS-PAGE、Western blot分析... 详细信息

利用PCR技术扩增获得C型口蹄疫病毒VP1基因,将其克隆到原核表达载体pET-30α(+)上,构建重组表达质粒pET-VP1。质粒pET-VP1转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导VP1基因的表达,收集不同时间的菌液进行SDS-PAGE、Western blot分析,结果得到分子量约为33 ku的目的条带,表达产物占菌体总蛋白的35%,且该目的条带能被C型FMDV阳性血清识别,说明VP1基因在大肠杆菌中得到高效表达。融合表达蛋白经镍柱纯化,重组蛋白纯度达90%以上。

关键词： C型口蹄疫病毒 VP1基因表达蛋白纯化

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多重PCR方法快速鉴别猪伪狂犬疫苗毒和野毒

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安徽农业科学 2009年第13期37卷 5889-5891页

作者：蔺芳尹双辉尚佑军刘艳红刘湘涛胡永浩甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

根据Genbank中PRV的gB、gE、TK基因序列设计并合成引物,对样品中PRVDNA进行多重PCR扩增及反应条件优化,得到与设计相符合的3条特异性条带,分别为427 bp(gB)、298 bp(gE)和208 bp(TK)。用这3对引物对四种伪狂犬疫苗样品DNA进行多次多重PC... 详细信息

根据Genbank中PRV的gB、gE、TK基因序列设计并合成引物,对样品中PRVDNA进行多重PCR扩增及反应条件优化,得到与设计相符合的3条特异性条带,分别为427 bp(gB)、298 bp(gE)和208 bp(TK)。用这3对引物对四种伪狂犬疫苗样品DNA进行多次多重PCR扩增,其中1种疫苗得到与设计相符的1条特异性条带,其余为2条。该结果表明,此检测方法敏感度较高,适用于科学研究、临床诊断以及流行病学调查,对根除伪狂犬病具有重要意义。

关键词：伪狂犬病病毒多重PCR 鉴别诊断

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非洲猪瘟病毒D1133L蛋白腺苷三磷酸酶活性的测定

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中国兽医科学 2022年第5期52卷 572-578页

作者：崔卉梅张婷杨博杨金柯赵登率袁兴国陈学辉郝雨闫文倩张克山刘霞郑海学刘湘涛甘肃农业大学生命科学技术学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业农村部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为测定非洲猪瘟病毒(ASFV)编码的D1133L蛋白的腺苷三磷酸酶活性,首先原核表达和纯化了D1133L蛋白。然后,利用Kinase-Glo Plus Luminescent Kinase Assay Platform试剂盒优化了反应条件,建立了D1133L蛋白腺苷三磷酸酶活性的测定方法,测定... 详细信息

为测定非洲猪瘟病毒(ASFV)编码的D1133L蛋白的腺苷三磷酸酶活性,首先原核表达和纯化了D1133L蛋白。然后,利用Kinase-Glo Plus Luminescent Kinase Assay Platform试剂盒优化了反应条件,建立了D1133L蛋白腺苷三磷酸酶活性的测定方法,测定了D1133L蛋白腺苷三磷酸酶活性。结果显示,在25μL的反应体系中,当蛋白浓度为1.8μmol/L,Cu^(2+)浓度为10 mmol/L,37℃反应70 min时D1133L蛋白具有最佳腺苷三磷酸酶活性,可水解体系中40.04%的腺苷三磷酸。本结果为进一步明确D1133L功能,揭示其解旋机制和靶向D1133L解旋活性的高通量化学药物筛选奠定了基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 D1133L 腺苷三磷酸酶活性测定

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