检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医杂志 2023年第6期59卷 22-28页

作者：伏中方杨建春罗金张掖市畜牧技术推广站甘肃张掖734000 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

为厘清粗糙巴贝斯虫蜱媒种类、分类特征和流行情况,本试验收集新疆西北部地区蜱和对应地区羊血液,对蜱进行形态学鉴定;提取蜱和羊血液基因组DNA,利用引物Bcrlong18 F/R对粗糙巴贝斯虫进行18S rRNA全长序列扩增,基于该序列分析粗糙巴贝... 详细信息

为厘清粗糙巴贝斯虫蜱媒种类、分类特征和流行情况,本试验收集新疆西北部地区蜱和对应地区羊血液,对蜱进行形态学鉴定;提取蜱和羊血液基因组DNA,利用引物Bcrlong18 F/R对粗糙巴贝斯虫进行18S rRNA全长序列扩增,基于该序列分析粗糙巴贝斯虫遗传进化特征;为确定粗糙巴贝斯虫流行特征,利用BcrD F/R检测引物对收集的蜱样和血样进行粗糙巴贝斯虫的PCR检测。结果显示,新疆地区蜱种有森林革蜱、胫距革蜱、边缘革蜱、草原革蜱、亚洲璃眼蜱、麻点璃眼蜱、血红扇头蜱和刻点血蜱等;其中收集自新源县的森林革蜱、阿合奇县的胫距革蜱和温宿县的边缘革蜱中可检测到粗糙巴贝斯虫18S rRNA核酸序列;伊宁市、新源县、巩留县、温泉县和温宿县的羊血液中可检测到该核酸片段。18S rRNA序列分析和系统发生树结果显示,粗糙巴贝斯虫18S rRNA高度保守,且包括2个主要基因型(Ⅰ型和Ⅱ型),Ⅰ型主要感染蜱和羊,Ⅱ型主要感染人类。野外样本检测结果显示,粗糙巴贝斯虫在新疆西北广大地区广泛流行,其对羊的感染已经是一种普遍现象。本试验为蜱的流行病学、粗糙巴贝斯虫遗传进化特征以及粗糙巴贝斯虫在蜱种间和羊体中的流行研究提供了参考;也提示基层管理部门需要进一步加强蜱的防控和家畜的科学养殖,这也是有效防控粗糙巴贝斯虫疾病流行的重要举措。

关键词：蜱粗糙巴贝斯虫胫距革蜱新疆

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多房棘球蚴感染对小鼠肝脂质代谢的影响

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畜牧兽医学报 2023年第1期54卷 263-271页

作者：李红李艳萍刘婷丽陈国梁王立群郭小腊骆学农中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046 扬州大学江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009

旨在探讨多房棘球蚴感染早期对小鼠肝脂质代谢的影响。选取60只清洁级BALB/c小鼠(6周龄,雄性)随机分为试验组和对照组,每组30只。试验组小鼠每只腹腔接种600个原头蚴,对照组小鼠腹腔注射等体积的PBS缓冲液。采用原位两步循环灌流及多步... 详细信息

旨在探讨多房棘球蚴感染早期对小鼠肝脂质代谢的影响。选取60只清洁级BALB/c小鼠(6周龄,雄性)随机分为试验组和对照组,每组30只。试验组小鼠每只腹腔接种600个原头蚴,对照组小鼠腹腔注射等体积的PBS缓冲液。采用原位两步循环灌流及多步低速差速离心分离纯化肝实质细胞。利用高通量测序分析感染3月小鼠肝实质细胞差异表达的mRNA,并对其进行KEGG、GO分析和qRT-PCR验证。制备多房棘球蚴感染2、3和6月小鼠的肝组织切片,分别进行油红O染色,并通过qRT-PCR检测多房棘球蚴感染不同感染时期肝实质细胞脂质代谢相关基因的表达水平。结果表明,与未感染对照组相比,小鼠感染多房棘球蚴后3、6月肝脂肪沉积明显增多;感染2月的肝实质细胞脂质合成相关基因Scd1、Fasn和Srebf1,以及脂质氧化分解相关基因Acox1和Cpt1α均明显上调;感染3月的肝实质细胞Scd1、Fasn、Srebf1及Cd36的表达水平均明显升高,而Acox1、Cpt1α、Pparγ和Pparα的表达水平明显降低。上述结果表明,多房棘球蚴感染早期可能通过促进肝实质细胞的脂质合成,抑制脂质氧化分解,从而导致肝脂质沉积。

关键词：多房棘球蚴肝实质细胞脂质代谢脂质沉积

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环形泰勒虫重组TA04380蛋白的原核表达及ELISA的建立

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2022年第3期40卷 362-368页

作者：曹天行刘军龙张志刚史康妍石苗关贵全李有全殷宏罗建勋中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009

目的表达环形泰勒虫的重组TA04380蛋白(r TA04380)并建立酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法,初步评价该方法的应用价值。方法用TMHMM和SignalP对TA04380蛋白进行生物信息学分析,根据GenBank上公布的环形泰勒虫TA04380核苷酸序列设计引... 详细信息

目的表达环形泰勒虫的重组TA04380蛋白(r TA04380)并建立酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法,初步评价该方法的应用价值。方法用TMHMM和SignalP对TA04380蛋白进行生物信息学分析,根据GenBank上公布的环形泰勒虫TA04380核苷酸序列设计引物,PCR扩增TA04380基因的截短片段(1~636 bp),构建pET30a (+)-TA04380表达质粒,转化至Rosetta (DE3)感受态细胞,诱导表达并纯化r TA04380蛋白,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定蛋白表达情况;蛋白质免疫印迹(Western blotting)分析r TA04380蛋白的反应原性及其与其他牛梨形虫的交叉反应性。以r TA04380蛋白为靶抗原建立检测抗环形泰勒虫抗体的ELISA方法,筛选确定最佳的抗原包被量、血清和二抗的稀释度、孵育时间以及最优的封闭剂;用所建立的ELISA方法检测56份标准环形泰勒虫阴性牛血清和76份标准环形泰勒虫阳性牛血清以确定该检测方法的阈值;分析r TA04380蛋白包被后第1、 2、 3周ELISA方法的重复性和稳定性;用建立的ELISA检测125份牛血清,并与已报道的基于子孢子表面抗原(SPAG)蛋白的ELISA方法作比较,计算符合率;用建立的ELISA方法检测571份来自9个省(自治区)的牛血清,评价该方法的应用价值。结果生物信息学分析结果显示,环形泰勒虫TA04380蛋白无信号肽序列,在212~413 aa存在4次跨膜区,与东方泰勒虫同源蛋白的氨基酸序列一致性为55%;PCR扩增片段长636 bp。SDS-PAGE结果显示,r TA04380蛋白主要以包涵体的形式存在,纯化后的r TA04380蛋白相对分子质量(Mr)为31 940;Western blotting分析结果显示,r TA04380蛋白能与抗His的单克隆抗体和环形泰勒虫阳性牛血清反应,与东方泰勒虫、中华泰勒虫、双芽巴贝斯虫、牛巴贝斯虫阳性牛血清和健康牛血清无交叉反应。以r TA04380蛋白为抗原建立的ELISA方法,最佳反应条件为:抗原包被浓度为10μg/ml,1%牛血清白蛋白封闭1 h,1∶100稀释的血清孵育1 h,1∶6 000稀释的兔抗牛HRP-IgG孵育1 h;检测阈值为16.9%,敏感性和特异性分别为93.4%和96.4%,假阳性率为3.6%。用所建立的ELISA方法与基于SPAG蛋白的ELISA方法检测牛血清样品的阳性率分别是54.4%(68/125)和49.6%(62/125),符合率为85.6%。用所建立的ELISA方法检测来自9个省(自治区)的571份牛血清样品,总阳性率为43.1%(246/571),其中阳性率由高到低依次为吉林(85.7%,24/28)、宁夏(54.2%,13/24)、贵州(50.0%,13/26)、河南(8/16)、甘肃(43.8%,57/130)、内蒙古(42.2%,35/83)、辽宁(41.1%,30/73)、云南(38.2%,42/110)和青海(29.6%,24/81)。结论成功表达了r TA04380蛋白,建立的ELISA方法敏感性、特异性高,稳定性和符合性良好,具有大规模现场应用的潜在价值。

关键词：环形泰勒虫 TA04380蛋白原核表达特异性 ELISA方法

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兰州市宠物猫隐孢子虫流行情况调查及分子生物学鉴定

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畜牧与兽医 2023年第10期55卷 76-81页

作者：李雅琪王玉桂邹扬张月玥马平平叶得河王帅马永华甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室/农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

为探究兰州市宠物猫隐孢子虫的感染情况,采集兰州市五大主城区宠物猫粪便样品共计655份,提取DNA,采用套式PCR扩增结合测序的方法进行基因分型并构建遗传关系树。兰州市宠物猫隐孢子虫的感染率为3.97%(26/655),测序鉴定发现均为猫隐孢子... 详细信息

为探究兰州市宠物猫隐孢子虫的感染情况,采集兰州市五大主城区宠物猫粪便样品共计655份,提取DNA,采用套式PCR扩增结合测序的方法进行基因分型并构建遗传关系树。兰州市宠物猫隐孢子虫的感染率为3.97%(26/655),测序鉴定发现均为猫隐孢子虫(Cryptosporidium felis)。统计学分析结果显示,兰州市宠物猫隐孢子虫的感染率与品种、季节及样品来源显著相关(P<0.05)。结果表明,兰州市宠物猫携带隐孢子虫且存在传播给人的风险,研究结果为预防兰州地区人、猫感染隐孢子虫提供一定的依据。

关键词：隐孢子虫宠物猫兰州流行病学调查

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基于转录组数据分析环形泰勒虫对诱导宿主细胞转化相关基因的影响

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畜牧兽医学报 2022年第12期53卷 4398-4409页

作者：赵保才赵帅阳关贵全罗建勋曹天行张志刚石苗刘军龙赵洪喜宁夏大学农学院银川750021 中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046

本试验主要通过研究布帕伐醌(BW720)处理前后,环形泰勒虫转化牛单核细胞(TaNMⅠ)转录组数据的变化情况,为进一步研究环形泰勒虫诱导宿主细胞转化的分子机制奠定基础。以环形泰勒虫感染的牛单核细胞为试验材料,设置对照组(二甲基亚砜,DM... 详细信息

本试验主要通过研究布帕伐醌(BW720)处理前后,环形泰勒虫转化牛单核细胞(TaNMⅠ)转录组数据的变化情况,为进一步研究环形泰勒虫诱导宿主细胞转化的分子机制奠定基础。以环形泰勒虫感染的牛单核细胞为试验材料,设置对照组(二甲基亚砜,DMSO)和试验组(BW720),利用Illumina HiSeq4000测序平台进行高通量测序,将测序得到的原始数据(Raw reads)与GenBank和Rfam数据库进行比对过滤,通过质控获得最终数据(Clean read)。利用Venn分析软件筛选出DMSO组和BW720组中差异表达明显的基因,进行功能注释(GO)以及信号通路(KEGG)分析。随机选择10个基因,利用荧光定量PCR(qPCR)检测基因在不同处理条件下细胞中的表达量。在验证测序结果的准确性后,选出差异表达明显的基因,分析其在TaNMⅠ细胞的凋亡、增殖等信号通路方面的作用。结果显示:BW720组和DMSO组中分别得到6854019704和6627265854条Raw reads,过滤、质控后分别得到22925606和22171427条Clean reads。BW720组和DMSO组中筛选出差异表达明显的基因共计4054个(P<0.05),其中,2146个基因显著上调,1908个基因显著下调;进一步筛选出共同差异表达的基因367个,其中,显著上调的196个,显著下调的171个。同时,qPCR验证随机选择10个基因的表达趋势与转录组测序结果一致,表明测序结果可靠。然后对差异表达基因进行GO功能注释,筛选到与细胞增殖相关的20个生物学过程、15个细胞组分以及11个分子功能条目。KEGG富集分析结果显示,在Top20的信号通路中筛选出与环形泰勒虫转化细胞有关的一些信号通路,如:癌症信号通路、PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路等。对这些信号通路进一步分析发现:PI3KR3、FOXO1、IL23A、FZD3、AKT、MMP9等基因在环形泰勒虫转化细胞的研究中也有相关文献的报道。本研究表明,在TaNMⅠ细胞中DAPK1、FZD3、FOXO3、PI3KR3等可能在感染细胞无限增殖的过程中发挥作用,为后续研究TaNMⅠ细胞无限增殖机制奠定了基础。

关键词：环形泰勒虫牛单核细胞转录组信号通路

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奶牛结合珠蛋白生物信息学分析及其多克隆抗体的制备

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中国兽医学报 2024年第3期44卷 558-564,594页

作者：刘佩雯董伟韬陈艳赵晓萱贺海健卢挺张全伟张勇刘光远甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 甘肃省动物生殖生理与繁殖调控重点实验室甘肃兰州730070 中国农业科学院、兰州兽医研究所、家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学生命科学技术学院甘肃兰州730070

结合珠蛋白(haptoglobin,Hp)是奶牛罹患乳房炎期间一种重要的标志性蛋白,其在血液和乳汁中含量变化与患牛乳房炎病情密切相关。为制备奶牛Hp多克隆抗体及了解其理化性质、结构和功能,本研究通过PCR成功扩增获得奶牛Hp完整CDS区序列,对... 详细信息

结合珠蛋白(haptoglobin,Hp)是奶牛罹患乳房炎期间一种重要的标志性蛋白,其在血液和乳汁中含量变化与患牛乳房炎病情密切相关。为制备奶牛Hp多克隆抗体及了解其理化性质、结构和功能,本研究通过PCR成功扩增获得奶牛Hp完整CDS区序列,对其进行生物信息学分析和pQE-80L-Hp原核表达载体的构建。将测序成功的重组质粒转化至M15感受态细胞,用1 mmol/L IPTG诱导重组蛋白的表达。重组蛋白表达后用亲和层析法进行纯化。利用纯化后的蛋白免疫动物制备多克隆抗体,利用ELISA方法和Western blot对多克隆抗体进行效价检测和反应性分析。结果显示,Hp是一种不稳定亲水性蛋白,分子式为C_(1936)H_(3049)N_(545O567)S_(19),编码388个氨基酸残基,由α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲4种结构组成,有15个抗原决定族,36个磷酸化位点。在1~42氨基酸位置存在信号肽,无跨膜结构域与CD163、MMP9、CP等蛋白具有较好的互作关系。pQE-80L-Hp在大肠杆菌中经诱导表达的重组蛋白的相对分子质量为42 kDa,主要以包涵体的形式存在,用其免疫兔子制备得到的多克隆抗体效价可达到1∶25600。本研究结果不仅有助于了解Hp的结构,而且为后续进行其功能的研究以及利用其作为标志物进行奶牛乳房炎早期高效快速诊断技术的研发奠定了基础。

关键词：结合珠蛋白生物信息学原核表达多克隆抗体奶牛

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多房棘球蚴感染小鼠脾淋巴细胞中差异表达miRNA的鉴定及其生物信息学分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2022年第3期40卷 288-295页

作者：仲顺虎孙玥郭小腊郑亚东陈轶霞西北民族大学生命科学与工程学院中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室浙江农林大学动物科技学院动物医学院

目的筛选并鉴定多房棘球蚴感染的小鼠脾淋巴细胞中差异表达的微小RNA (miRNA),分析其可能涉及的生物学过程及信号通路,为进一步研究miRNA在寄生虫感染中的作用提供实验依据。方法将12只小鼠随机分为两组,每组6只,感染组小鼠每只腹腔注... 详细信息

目的筛选并鉴定多房棘球蚴感染的小鼠脾淋巴细胞中差异表达的微小RNA (miRNA),分析其可能涉及的生物学过程及信号通路,为进一步研究miRNA在寄生虫感染中的作用提供实验依据。方法将12只小鼠随机分为两组,每组6只,感染组小鼠每只腹腔注射600个多房棘球蚴原头节,对照组注射等量PBS。感染后90 d,将小鼠安乐死后取脾组织,采用密度梯度离心法分离各组小鼠脾淋巴细胞,使用TRIzol法提取两组小鼠脾淋巴细胞的总RNA。利用高通量测序技术鉴定并筛选差异表达的mi RNA;随机选取5个差异表达的miRNA进行实时荧光定量PCR (qRT-PCR)验证;利用miRanda和RNAhybrid两个数据库对差异表达的mi RNA进行靶基因预测,并进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析;利用Cytoscape软件构建mi RNA-mRNA相互作用网络图。结果通过高通量测序对照组和感染组分别获得12 104 631和10 856 249个纯净序列,其序列主要集中在20~24 nt。共筛选出69个差异表达2倍以上的miRNA,其中40个为上调表达的mi RNA,29个为下调表达miRNA。随机选取的5个差异表达miRNA经qRT-PCR验证结果显示,mi R-150-5p、mi R-181a-5p、 miR-467a-5p、 miR-467b-5p表达下调,miR-223-3p表达上调,与高通量测序结果相一致。GO功能和KEGG通路分析结果显示,69个差异表达miRNA的靶基因与黏膜免疫、应激反应、细菌防御反应等相关,并且主要富集在丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B (PI3K-Akt)、单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)等信号通路。miR-150-5p、 miR-181a-5p、 miR-467a-5p和mi R-467b-5p与m RNA相互作用网络图显示,miRNA与多个mRNA相互作用,mRNA也可被多个miRNA所调控。结论小鼠在多房棘球蚴感染过程中,其脾淋巴细胞中的miRNA呈显著差异表达,差异表达的miRNA主要富集在一些免疫相关的信号通路,可能在对抗多房棘球蚴的免疫反应中发挥作用。

关键词：多房棘球绦虫微小RNA 脾淋巴细胞高通量测序生物信息学

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伊氏锥虫PFR2蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

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中国兽医科学 2022年第10期52卷 1302-1307页

作者：罗文蔚罗金任巧云刘文阁王奇林张高峰刁沛文曹润来陈则宇马永华刘光远甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

为了探究伊氏锥虫副鞭毛杆蛋白2(paraflagellar rod protein 2,PFR2)的分子特征和免疫特征,利用PCR扩增伊氏锥虫PFR2基因,将扩增产物插入p QE-80L载体,经原核表达后,将纯化后的重组蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,利用Western-blot鉴定反... 详细信息

为了探究伊氏锥虫副鞭毛杆蛋白2(paraflagellar rod protein 2,PFR2)的分子特征和免疫特征,利用PCR扩增伊氏锥虫PFR2基因,将扩增产物插入p QE-80L载体,经原核表达后,将纯化后的重组蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,利用Western-blot鉴定反应原性。结果表明,PFR2基因大小为1803 bp,编码含601个氨基酸残基的蛋白质,SDS-PAGE电泳显示该蛋白大小约为66 ku,主要以包涵体的形式表达。用间接ELISA方法检测小鼠抗PFR2多克隆抗体的效价为1∶25600;Western-blot检测显示重组PFR2蛋白具有较好的反应原性。本研究为进一步研究伊氏锥虫PFR2蛋白的功能奠定了基础。

关键词：伊氏锥虫 PFR2基因原核表达多克隆抗体

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EdU标记多房棘球蚴成体干细胞方法的建立

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中国病原生物学杂志 2022年第9期17卷 1045-1047,1052页

作者：曹珊菱郭小腊郑亚东孙晓林甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室浙江农林大学动物科技学院动物医学院

目的建立EdU(5-ethynyl-2'-deoxyuridine)标记多房棘球蚴体内成体干细胞(neoblasts)的方法,用于观察其细胞形态和分布特点。方法采用0.25%胰蛋白酶消化法从多房棘球蚴包囊中分离原代细胞,分别对原代细胞和多房棘球蚴进行EdU染色,利... 详细信息

目的建立EdU(5-ethynyl-2'-deoxyuridine)标记多房棘球蚴体内成体干细胞(neoblasts)的方法,用于观察其细胞形态和分布特点。方法采用0.25%胰蛋白酶消化法从多房棘球蚴包囊中分离原代细胞,分别对原代细胞和多房棘球蚴进行EdU染色,利用激光共聚焦显微镜检测EdU阳性细胞。结果用建立的EdU标记方法检查多房棘球蚴体内成体干细胞,EdU阳性细胞体积较小,细胞核较大,呈球形或近球形。在成熟的原头节头节中,EdU阳性细胞主要分布在其中后端,呈分散分布,且原头节头节是否外翻在EdU阳性细胞数量上无明显不同。同时,大多数EdU阳性细胞也表达磷酸化组蛋白H3。结论建立的EdU标记多房棘球蚴成体干细胞的方法可靠,简单,易操作,为该细胞的功能研究提供了新的技术手段。

关键词：多房棘球蚴原头节原代细胞成体干细胞 EdU

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传染性囊病病毒对IgM^(+)TIM4^(+)B细胞分化的影响

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中国兽医科学 2022年第7期52卷 908-914页

作者：何雪阳肖星星燕苗苗杨顺利张辛铭蔡建平中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

以佛波酯(PMA)于体外培养中刺激原代法氏囊细胞(PBCs)诱导产生的IgM^(+)TIM4^(+)B细胞为模型,分析传染性囊病病毒(IBDV)感染对IgM^(+)TIM4^(+)B细胞分化形成及IBDV在IgM^(+)TIM4^(+)B和IgM^(+)TIM4^(-)B细胞中的复制动态。结果显示,PMA刺激后第24~48小时PBCs中IgM^(+)TIM4^(+)B细胞比例相对稳定;而以IBDV感染经PMA刺激24 h的PBCs后,IgM^(+)TIM4^(+)B细胞比例显著减少且与IBDV感染剂量成负相关,IgM^(+)TIM4^(+)B细胞的IBDV-VP1 RNA水平也显著低于IgM^(+)TIM4^(-)B细胞。结果提示,IBDV在IgM+TIM4+B细胞和IgM^(+)TIM4^(-)B细胞中的复制过程存在差异。

关键词：鸡传染性囊病病毒原代法氏囊细胞鸡TIM4 IgM^(+)TIM4^(+)B细胞

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