检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2017年第8期47卷 964-968页

作者：李四通刘军龙刘爱红李有全赵洪喜赵帅阳何欣陈银银殷宏罗建勋关贵全中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046 宁夏大学农学院宁夏银川750021

根据Gen Bank发表的相关序列,分别设计针对牛NOD样受体(NLRs)信号通路10个相关分子NOD1、NOD2、NLRP1、NLRP3、NLRC4、NAIP、RIP2、CASP1、IL-18和IL-1β基因设计Real-time PCR特异性引物,通过优化反应条件后对其特异性、敏感性和重复... 详细信息

根据Gen Bank发表的相关序列,分别设计针对牛NOD样受体(NLRs)信号通路10个相关分子NOD1、NOD2、NLRP1、NLRP3、NLRC4、NAIP、RIP2、CASP1、IL-18和IL-1β基因设计Real-time PCR特异性引物,通过优化反应条件后对其特异性、敏感性和重复性进行评价,并分别检测环形泰勒虫感染细胞Ta NM中靶基因的转录水平及其与对照的差异。结果显示,所建立的分别检测10个靶基因的Real-time PCR方法特异均非常,其敏感性均在1~100 copies/L之间;而在F10代Ta NM细胞中,NOD1、NOD2、NLRP1、NLRP3、NLRC4、NAIP、RIP2、CASP1和IL-18基因的转录水平均显著低于对照组外周血单核细胞(P<0.01),而IL-1β在F10代Ta NM细胞中的转录水平却显著高于对照组(P<0.01)。本研究结果为开展环形泰勒虫对宿主细胞天然免疫机制的研究奠定了基础。

关键词： NLRs real-time PCR 环形泰勒虫转录水平

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刚地弓形虫PTS核酸疫苗的构建及免疫保护力评价

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中国兽医学报 2017年第12期37卷 2344-2349,2357页

作者：朱伟宁王金磊陈凯黄思扬朱兴全山东农业大学动物科技学院山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室山东泰安271018 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

旨在构建弓形虫磷脂酰苏氨酸合成酶(Toxoplasma gondii phosphatidylthreonine synthase,PTS)基因DNA疫苗,评价其抗弓形虫的免疫保护力。利用RT-PCR技术扩增得到弓形虫PTS基因,构建真核表达质粒pVAXTgPTS,然后转染HEK 293-T细胞,分析pVAX-TgPTS在细胞中的表达情况。利用真核表达质粒pVAX-TgPTS对BABL/c小鼠进行3次免疫,并用空质粒pVAX1作为对照,在每次免疫前和第3次免疫后2周收集小鼠血清,经ELISA方法检测小鼠血清中的IgG水平。第3次免疫后2周每组取3只小鼠,将其剖杀取脾脏,CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖能力,流式细胞仪测定CD4+和CD8+T细胞百分比。小鼠脾细胞经STAg刺激后,利用ELISA试剂盒检测脾细胞细胞因子的表达情况。第3次免疫后2周,每只小鼠腹腔注射1 000个弓形虫RH株速殖子,观察记录小鼠的存活时间。结果显示,pVAX-TgPTS能够在HEK 293-T细胞中表达;第3次免疫后2周pVAX-TgPTS组血清中IgG含量相比对照组有了显著提高;pVAX-TgPTS组淋巴细胞刺激指数(SI)略微高于对照组;CD4+和CD8+T细胞百分比含量明显高于对照组;pVAX-TgPTS组中脾细胞经STAg刺激后能够明显提高IFN-γ的表达量。攻虫试验结果表明,pVAX-TgPTS组小鼠存活时间比对照组明显增长。本试验成功构建真核表达质粒pVAX-TgPTS,证明pVAX-TgPTS能够诱导小鼠产生一定的体液免疫和细胞免疫反应,并对弓形虫感染产生一定程度的免疫保护力,该研究结果为进一步研发弓形虫核酸疫苗奠定基础。

关键词：弓形虫磷脂酰苏氨酸合成酶(PTS) 真核表达质粒免疫保护小鼠

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吕氏泰勒虫TlSP无跨膜区重组蛋白的表达及反应原性分析

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中国兽医科学 2017年第12期47卷 1503-1509页

作者：韩元许强杨学财李有全郭鹏飞关贵全刘军龙刘爱红刘光远李禤殷宏罗建勋蔡葵蒸西北民族大学生命科学与工程学院甘肃兰州730030 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

提取吕氏泰勒虫裂殖子的总RNA,采用RT-PCR方法扩增其表面蛋白TlSP(Theileria luwenshuni surface protein)基因的cDNA片段,结合生物信息学方法,对TlSP蛋白抗原表位和跨膜区进行预测,设计表达引物,分别扩增得到TlSP全长及逐一去除跨膜区... 详细信息

提取吕氏泰勒虫裂殖子的总RNA,采用RT-PCR方法扩增其表面蛋白TlSP(Theileria luwenshuni surface protein)基因的cDNA片段,结合生物信息学方法,对TlSP蛋白抗原表位和跨膜区进行预测,设计表达引物,分别扩增得到TlSP全长及逐一去除跨膜区的4个片段,并将其分别克隆至pET-30a原核表达载体,将重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)p Lys S感受态细胞进行诱导表达,并对融合蛋白的反应原性进行分析。结果表明,TlSP融合蛋白的N端具有较好的抗原性,而在C端存在3个跨膜区:185~207 aa、228~250 aa和255~277 aa;SDS-PAGE结果表明,只有去除全部跨膜区的重组载体可成功表达。Western-blot分析表明,TlSP融合蛋白能与吕氏泰勒虫、尤氏泰勒虫、绵羊泰勒虫及环形泰勒虫阳性血清发生反应,而与巴贝斯虫、羊无浆体阳性血清无交叉反应。本研究为今后TlSP候选亚单位疫苗的研究奠定了基础。

关键词：吕氏泰勒虫 TlSP基因跨膜区原核表达反应原性分析

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大片吸虫钙结合蛋白-2(CaBp2)基因的克隆、表达及免疫反应性研究

大片吸虫钙结合蛋白-2(CaBp2)基因的克隆、表达及免疫反应性研究

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第十一届全国寄生虫学青年工作者学术研讨会

作者：袁晓丹侯俊玲田艾灵黄思扬王春仁朱兴全黑龙江八一农垦大学动物科技学院中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室扬州大学兽医学院/江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心

目的克隆、表达大片吸虫钙结合蛋白-2(Ca Bp2),并探索其作为诊断抗原的可行性。方法鉴定大片吸虫后,以肝片吸虫Ca Bp2的基因序列为模板,设计以Nde 1和Xho 1作为酶切位点的Ca Bp2蛋白的引物。提取大片吸虫总RNA,利用RT-PCR克隆出目的基因... 详细信息

目的克隆、表达大片吸虫钙结合蛋白-2(Ca Bp2),并探索其作为诊断抗原的可行性。方法鉴定大片吸虫后,以肝片吸虫Ca Bp2的基因序列为模板,设计以Nde 1和Xho 1作为酶切位点的Ca Bp2蛋白的引物。提取大片吸虫总RNA,利用RT-PCR克隆出目的基因,对其进行测序鉴定、生物信息学分析、系统进化分析。构建p ET-30a-Fg Ca Bp2重组表达载体后,在大肠杆菌Transetta(DE3)感受态细胞中完成诱导、表达;对纯化的目的蛋白进行SDS-PAGE和Western-blot分析;目的蛋白免疫家兔后,制备多克隆抗体。结果大片吸虫Ca Bp2开放阅读框为570 bp,编码189个氨基酸残基。生物信息学预测表明,CaBp2主要以α螺旋为主,β折叠较少;具有较多B细胞抗原表位。Ca Bp2呈现出可溶性表达。Western blotting检测结果表明所表达的蛋白在25 kD处存在特异性条带,其具有良好的免疫反应性。结论成功克隆大片吸虫Ca Bp2基因,其表达产物能与该蛋白的特异性多克隆抗体产生良好的免疫反应性,是潜在的大片吸虫病诊断抗原。

关键词：大片吸虫钙结合蛋白-2(CaBp2) 克隆表达诊断候选抗原

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柔嫩艾美耳球虫多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2的基因表达及转录动态分析

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畜牧兽医学报 2017年第11期48卷 2173-2180页

作者：刘晓丽龚振兴马雪婷曲自刚韩政岚刘保红袁如意杨孝朴蔡建平甘肃农业大学动物医学院兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009

蛋白质翻译后O-糖基化修饰普遍存在于真核生物、细菌和古细菌,多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(polypeptide:N-acetylgalactosaminyltransferase 2,ppGalNAc-T2)是O-糖基化反应的限速酶。基因组数据分析揭示艾美耳球虫具有O-糖基化反应途... 详细信息

蛋白质翻译后O-糖基化修饰普遍存在于真核生物、细菌和古细菌,多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(polypeptide:N-acetylgalactosaminyltransferase 2,ppGalNAc-T2)是O-糖基化反应的限速酶。基因组数据分析揭示艾美耳球虫具有O-糖基化反应途径。为研究柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)蛋白质翻译后糖基化修饰及其关键酶的药靶效用,对Et ppGalNAc-T2基因进行了克隆,并检测其在***不同发育阶段的表达动态。根据EuPathDB中所预测Et ppGalNAc-T2基因序列设计引物,以RT-PCR方法扩增获得Et ppGalNAc-T2的ORF,插入酶切位点后连接到原核表达载体pGEX-6p-1进行诱导表达。提取***广东株未孢子化卵囊、孢子化7h卵囊、孢子化卵囊、子孢子和第二代裂殖子5个发育阶段的总RNA,以qRT-PCR法检测Et ppGalNAc-T2转录水平的动态变化。结果表明,Et ppGalNAc-T2的全长ORF为1 983bp,编码660个氨基酸,在*** Transetta(DE3)可溶性表达。qRT-PCR结果显示,Et ppGalNAc-T2转录水平随发育阶段不同而有显著差异,子孢子阶段表达水平最高、而在孢子化卵囊则几近不能检出。结果为进一步研究EtppGalNAc-T2的功能提供了试验基础。

关键词：柔嫩艾美耳球虫 ppGalNAc-T2 基因克隆表达差异 qRT-PCR

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大片吸虫α-微管蛋白基因的克隆表达及免疫反应性的研究

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中国兽医科学 2017年第4期47卷 495-499页

作者：岳东梅王金磊黄思扬朱兴全王春仁黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

为鉴定大片吸虫α-微管蛋白基因(FgAT),并分析其作为诊断抗原的可行性,根据肝片吸虫的基因组及转录组数据设计α-微管蛋白基因的扩增引物,以大片吸虫总RN A为模板,通过RT-PCR获得大片吸虫的FgAT基因;对其进行生物信息学分析及鉴定,然后... 详细信息

为鉴定大片吸虫α-微管蛋白基因(FgAT),并分析其作为诊断抗原的可行性,根据肝片吸虫的基因组及转录组数据设计α-微管蛋白基因的扩增引物,以大片吸虫总RN A为模板,通过RT-PCR获得大片吸虫的FgAT基因;对其进行生物信息学分析及鉴定,然后构建pGEX-6P-1(+)-FgAT重组表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,再对纯化的目的蛋白进行SDS-PAGE和Western-blot分析。结果表明,大片吸虫FgAT基因的大小为1 356 bp,编码452个氨基酸残基。生物信息学分析表明,FgAT二级结构预测以无规卷曲为主,抗原表位在整个序列中均有存在。优化后的α-微管蛋白为可溶性表达,Western-blot分析结果表明其具有良好的免疫反应性。本研究首次克隆并鉴定了大片吸虫α-微管蛋白基因,表达的重组蛋白具有良好的免疫反应性,该蛋白是潜在的大片吸虫诊断靶标。

关键词：大片吸虫 α-微管蛋白基因表达诊断候选抗原

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多聚甲醛处理的昆明小鼠T细胞及其亚群存放不同时间分析

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细胞与分子免疫学杂志 2017年第4期33卷 460-464页

作者：郭海婷胡超严普李中原陈志宝黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

目的确定昆明小鼠CD3e^+ CD4^+ T细胞和CD3e^+ CD8a^+ T细胞两种淋巴细胞的可存放时间。方法无菌收集昆明小鼠抗凝血和脾脏并制备单细胞悬液,经荧光基团标记的抗体对CD3e、CD4、CD8a进行标记、多聚甲醛处理后运用三色标记流式细胞术分... 详细信息

目的确定昆明小鼠CD3e^+ CD4^+ T细胞和CD3e^+ CD8a^+ T细胞两种淋巴细胞的可存放时间。方法无菌收集昆明小鼠抗凝血和脾脏并制备单细胞悬液,经荧光基团标记的抗体对CD3e、CD4、CD8a进行标记、多聚甲醛处理后运用三色标记流式细胞术分点检测4℃避光保存的待检样品的可存放情况,采用最小二乘法拟合最佳回归曲线,计算各时间点上淋巴细胞含量并进行统计学分析,同设多聚甲醛未处理组。结果昆明小鼠脾组织内CD3e^+ CD4^+ T细胞和CD3e^+ CD8a^+ T淋巴细胞经多聚甲醛处理后分别在第11天和第16天显著降低,未经多聚甲醛处理样品的这两个亚群细胞则在第8天和第11天显著降低;经多聚甲醛处理的外周血T淋巴细胞的可存放时间较长(均为第18天),高于未处理组(第10天和第15天)。结论流式细胞术检测多聚甲醛处理的昆明小鼠脾组织和外周血T淋巴细胞应在第11天前完成。

关键词：昆明小鼠 T淋巴细胞线性回归存放时间流式细胞术

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牛流行热在天祝白牦牛中流行病学的调查

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中国兽医科学 2017年第9期47卷 1154-1158页

作者：黄德萱高闪电康彪独军政田占成殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

为了解牛流行热在天祝白牦牛中的流行状况,本研究从甘肃省武威市天祝藏族自治县的7个乡镇分别随机抽样采集了224头白牦牛的抗凝血和血清,应用间接ELISA抗体检测试剂盒检测血清中牛流行热病毒特异抗体,应用实时荧光定量RT-PCR、RT-PCR方... 详细信息

为了解牛流行热在天祝白牦牛中的流行状况,本研究从甘肃省武威市天祝藏族自治县的7个乡镇分别随机抽样采集了224头白牦牛的抗凝血和血清,应用间接ELISA抗体检测试剂盒检测血清中牛流行热病毒特异抗体,应用实时荧光定量RT-PCR、RT-PCR方法检测牛流行热病毒G基因并进行序列验证。结果表明,7个乡镇的白牦牛均存在牛流行热病毒感染,抗体阳性率为45.09%;荧光定量RT-PCR的检出阳性率为37.5%;以RT-PCR扩增G基因3’端420 bp区段测序并构建系统发育树表明,白牦牛群流行的BEFV毒株与中国大陆1976年分离的JB76H毒株亲缘关系较近,为BEFV基因Ⅰ型。本研究首次证实白牦牛在自然状态下可感染牛流行热病毒,可能是重要的牛流行热病毒宿主。

关键词：牛流行热病毒白牦牛流行病学调查

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信鸽源产气荚膜梭菌的分离鉴定及药敏试验

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黑龙江畜牧兽医 2017年第4期 176-179页

作者：康文娟王艳华蔡建平中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

为了诊断引起信鸽出现厌食、腹泻、精神萎靡等症状的病原及进行有针对性治疗,试验采集信鸽的异常粪便,进行产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)的分离鉴定及药敏试验;提取细菌基因组DNA,扩增16S rD NA片段,并将测序结果与GenB ank报... 详细信息

为了诊断引起信鸽出现厌食、腹泻、精神萎靡等症状的病原及进行有针对性治疗,试验采集信鸽的异常粪便,进行产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)的分离鉴定及药敏试验;提取细菌基因组DNA,扩增16S rD NA片段,并将测序结果与GenB ank报道的产气荚膜梭菌16S rD NA序列进行比对。结果表明:分离到的5株细菌均为产气荚膜梭菌;采用多重PCR方法扩增α、β、ε和γ毒素基因,均只扩增到324 bp的α毒素基因;药敏试验结果显示,5株产气荚膜梭菌菌株对其中10种药物显示高度敏感。

关键词：信鸽产气荚膜梭菌分离鉴定分型药敏试验

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多头带绦虫蛋白激酶A催化亚基基因的克隆及原核表达

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中国畜牧兽医 2017年第10期44卷 2858-2864页

作者：杨洋李文卉张念章李婷婷李立闫鸿斌贾万忠付宝权中国农业科学院兰州兽医研究所、家畜疫病病原生物学国家重点实验室、农业部兽医公共卫生重点开放实验室、甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009

为鉴定多头带绦虫蛋白激酶A催化亚基(Tm PKA-C)基因作为诊断抗原的潜能,本试验以多头带绦虫成虫RNA为模板,利用RT-PCR扩增Tm PKA-C基因。将Tm PKA-C基因片段连接至p ET-30a原核表达载体进行原核表达,然后利用Western blotting和间接ELIS... 详细信息

为鉴定多头带绦虫蛋白激酶A催化亚基(Tm PKA-C)基因作为诊断抗原的潜能,本试验以多头带绦虫成虫RNA为模板,利用RT-PCR扩增Tm PKA-C基因。将Tm PKA-C基因片段连接至p ET-30a原核表达载体进行原核表达,然后利用Western blotting和间接ELISA分析该蛋白的反应原性。结果表明,Tm PKA-C基因开放阅读框的长度为1 032 bp,可编码343个氨基酸。Tm PKA-C基因的表达产物主要以包涵体的形式存在,重组蛋白的分子质量大小约42 ku。Western blotting结果表明,该重组蛋白既能与自然感染脑多头蚴的绵羊血清发生特异性反应,又能与人工感染脑多头蚴不同时间段的绵羊血清发生特异性反应,表明该重组蛋白具有良好的反应原性。间接ELISA分析结果表明,脑多头蚴绵羊血清能与重组蛋白发生特异性反应,进一步证明该重组蛋白的反应原性良好。本研究为筛选脑多头蚴病诊断新抗原奠定了基础。

关键词：多头带绦虫 TmPKA-C 原核表达反应原性

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