检索结果-内蒙古大学图书馆

甘肃农业大学学报 2008年第1期43卷 7-13页

作者：孙晓林景志忠王佩雅才学鹏甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

将纯化的猪带绦虫六钩蚴45W-4BX重组抗原,采用弗氏完全、不完全佐剂乳化和不加佐剂的方式,3次免疫BALB/C小鼠,检测抗体效价呈阳性后,再经尾静脉加强免疫,取其脾细胞和SP2/0细胞融合,经六钩蚴45W-4BX抗原和GST抗原双系统间接ELISA筛选,... 详细信息

将纯化的猪带绦虫六钩蚴45W-4BX重组抗原,采用弗氏完全、不完全佐剂乳化和不加佐剂的方式,3次免疫BALB/C小鼠,检测抗体效价呈阳性后,再经尾静脉加强免疫,取其脾细胞和SP2/0细胞融合,经六钩蚴45W-4BX抗原和GST抗原双系统间接ELISA筛选,获得了18株六钩蚴45W-4BX杂交瘤细胞,按有限稀释法对其中的4株进行了5次亚克隆,最终获取了4株分泌稳定的单克隆细胞株,接种小鼠获取相应的腹水,金标试纸条法鉴定其抗体亚类均属于IgG1类,轻链为κ型;对腹水进行了稳定性试验和单抗初步提纯,并对杂交瘤细胞进行了染色体组型的分析,证明所获单抗能满足常规试验的要求.

关键词：猪带绦虫六钩蚴 45W-4BX 单克隆抗体

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猪囊尾蚴TS-CC18蛋白的原核表达及其血清学检测效果评价

猪囊尾蚴TS-CC18蛋白的原核表达及其血清学检测效果评价

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第二届全国人畜共患病学术研讨会

作者：张少华才学鹏贾万忠骆学农郑亚东景志忠刘红霞赵松波中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验甘肃省动物寄生虫病重点实验室

目的制备猪带绦虫囊尾蚴TS-CC18重组抗原并对其生物学活性进行鉴定,为建立猪囊尾蚴检测技术提供诊断抗原。方法PCR扩增获得TS-CC18编码基因,构建pET30a-TS-CC18重组表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导筛选高表达量菌株。表达蛋白... 详细信息

目的制备猪带绦虫囊尾蚴TS-CC18重组抗原并对其生物学活性进行鉴定,为建立猪囊尾蚴检测技术提供诊断抗原。方法PCR扩增获得TS-CC18编码基因,构建pET30a-TS-CC18重组表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导筛选高表达量菌株。表达蛋白采用Ni-FF亲和层析方法纯化。通过Western-blotting及间接ELISA检测重组蛋白的反应活性。结果Tricine-SDS-PAGE表明,0.5 mmol/L IPTG诱导6 h。可稳定表达可溶性TS-CC18重组蛋白;薄层扫描分析其表达量约占菌体总蛋白的20%以上。Western-blotting检测诱导的蛋白能与猪囊尾蚴阳性血清发生特异性反应;间接ELISA检测血清抗体结果表明:纯化的TS-CC18重组蛋白与全囊抗原的相对特异性达到100%,相对敏感性达84%,总符合率为94.3%。表明TS-CC18重组蛋白具有较高的特异性和敏感性。结论成功制备了猪囊尾蚴TS—CC18重组抗原,特异性、敏感性及稳定性良好,对诊断猪囊尾蚴病及开发诊断制剂具有潜在应用价值。

关键词：猪囊尾蚴 TS-CC18重组抗原 ELISA检测效果评价

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猪囊尾蚴DNA疫苗pVAX1/TSOL18的安全性评估

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中国兽医寄生虫病 2008年第5期16卷 5-9页

作者：刘斌才学鹏郭爱疆骆学农陈晓宇丁军涛刘英中国农业科学院兰州兽医研究所／家畜疫病病原生物学国家重点实验室／甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

目的探讨pVAX1/TSOL18重组表达质粒作为DNA疫苗在小鼠体内的组织分布和生物安全性。方法将pVAX1/TSOL18重组质粒经肌肉注射免疫昆明系小鼠,免疫后在不同时间剖杀小鼠,分别采集心、肝、脾等组织样品,抽提gDNA,利用PCR技术分析pVAX1/TSOL1... 详细信息

目的探讨pVAX1/TSOL18重组表达质粒作为DNA疫苗在小鼠体内的组织分布和生物安全性。方法将pVAX1/TSOL18重组质粒经肌肉注射免疫昆明系小鼠,免疫后在不同时间剖杀小鼠,分别采集心、肝、脾等组织样品,抽提gDNA,利用PCR技术分析pVAX1/TSOL18在组织内的分布及残留时间。同时,以PCR技术检测免疫动物粪便,分析pVAX1/TSOL18重组表达质粒在外界环境中的释放情况。结果免疫pVAX1/TSOL18重组表达质粒后1 d和5 d,在小鼠组织gDNA均扩增出目的片段,不同个体小鼠,扩增出目的片段的组织也不完全相同,但在血液中均扩增出了目的片段,d5较d1扩增出的目的片段明显变暗。免疫后15 d,仅在一只小鼠的血液中检测到TSOL18基因;免疫后30 d在所有动物组织中均未检测到重组表达质粒。同时,免疫1 d、5 d小鼠的粪便中均未检测到TSOL18基因。结论pVAX1/TSOL18重组表达质粒作为疫苗对动物和环境是安全的。

关键词：猪囊尾蚴 DNA疫苗安全性

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猪TOLL样受体2基因在CHO-K1细胞中的表达

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甘肃农业大学学报 2008年第1期43卷 14-17页

作者：房永祥景志忠陈国华段凤云蒙学莲窦永喜甘肃农业大学甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃省动物寄生虫病重点实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046

将含猪TLR2(猪Toll样受体2,pTLR2)基因的真核表达载体PcDNA3.1/CT-GFP-pTLR2,采用脂质体法转染到CHO-K1细胞,用G418持续筛选获得了阳性细胞克隆.阳性细胞克隆系经PCR和RT-PCR检测表明:pTLR2基因得到稳定整合并能成功地转录.荧光显微镜观... 详细信息

将含猪TLR2(猪Toll样受体2,pTLR2)基因的真核表达载体PcDNA3.1/CT-GFP-pTLR2,采用脂质体法转染到CHO-K1细胞,用G418持续筛选获得了阳性细胞克隆.阳性细胞克隆系经PCR和RT-PCR检测表明:pTLR2基因得到稳定整合并能成功地转录.荧光显微镜观察,转染细胞可见绿色荧光,表明获得了表达pTLR2的克隆细胞系.

关键词：猪Toll样受体2 CHO-K1细胞转染

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牦牛IL-4基因的克隆及其遗传演化关系分析

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动物医学进展 2008年第8期29卷 24-28页

作者：何延华房永祥陈国华段风云王生富李小庆景志忠甘肃农业大学甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

克隆牦牛白细胞介素-4（IL～4）基因，并对其进行遗传演化分析。从刀豆素（ConA）和脂多糖（LPS）联合刺激培养的牦牛外周血淋巴细胞提取总RNA．利用RT—PCR方法扩增牦牛IL-4全长cDNA，将其克隆到pMD18～T载体上，测序后进行序列分析。... 详细信息

克隆牦牛白细胞介素-4（IL～4）基因，并对其进行遗传演化分析。从刀豆素（ConA）和脂多糖（LPS）联合刺激培养的牦牛外周血淋巴细胞提取总RNA．利用RT—PCR方法扩增牦牛IL-4全长cDNA，将其克隆到pMD18～T载体上，测序后进行序列分析。成功克隆到牦牛IL-4基因全序列，序列分析表明，克隆的牦牛IL-4基因序列与GenBank所登录的牛IL-4核苷酸序列及推导的氨基酸序列的同源性分别这99．8％和100％，与人、猕猴、猪、山羊、马等物种的核苷酸及其推导氨基酸序列的同源性分别在44．4％～96．3％和27．4％～91．1％之间。在国内首次成功地从牦牛外周血淋巴细胞中克隆到IL-4的基因，其ORF为408bp，推导编码135个氨基酸。

关键词：白介素4 克隆序列分析牦牛

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弓形虫棒状蛋白2研究进展

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甘肃农业大学学报 2008年第3期43卷 67-71页

作者：祁光宇张德林孙晓林付宝权王艳华苟惠天中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

棒状蛋白2(ROP2)为弓形虫生活史各期均能分泌的抗原,具有高度的保守性和免疫反应性.综述了近年来关于ROP2分子生物学特征、免疫特性、疫苗的研究进展.

关键词：弓形虫棒状蛋白2 分子生物学特征免疫特性疫苗

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刚地弓形虫GJS株微线体蛋白基因MIC3的克隆与原核表达

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甘肃农业大学学报 2008年第5期43卷 1-5页

作者：苟惠天王艳华李文卉李航付宝权张德林甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州700070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

根据Genbank中编码MIC3的已知基因序列设计并合成一对引物,应用PCR技术对刚地弓形虫GJS株微线体蛋白基因MIC3进行克隆、表达及鉴定.结果表明:克隆的MIC3基因的开放阅读框与Genbank收录的MIC3基因在核菌酸和氨基酸水平上高度一致,说明弓... 详细信息

根据Genbank中编码MIC3的已知基因序列设计并合成一对引物,应用PCR技术对刚地弓形虫GJS株微线体蛋白基因MIC3进行克隆、表达及鉴定.结果表明:克隆的MIC3基因的开放阅读框与Genbank收录的MIC3基因在核菌酸和氨基酸水平上高度一致,说明弓形虫MIC3蛋白的高度保守性;构建的原核细胞表达质粒PET-MIC3表达产物分子量为46 ku,且经Western-blot显示可被猪抗弓形虫免疫血清识别.

关键词：刚地弓形虫微线体克隆表达

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猪带绦虫TSOL18-SP蛋白的原核表达及其多抗的制备

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甘肃农业大学学报 2008年第6期43卷 14-18页

作者：陈晓宇丁军涛骆学农王颖刘斌张少华郑亚东景志忠才学鹏甘肃农业大学动物医学院．甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

对TSOL18基因中4个碱基进行定点突变，并截去N端16个氨基酸的信号肽，构建pGEX—TSOL18-SP原核表达载体，IPTG诱导表达后进行产物的SDS-PAGE及Western blot分析；用改造的纯化蛋白免疫家兔后采集血清，经琼脂双扩散试验检测血清抗体效... 详细信息

对TSOL18基因中4个碱基进行定点突变，并截去N端16个氨基酸的信号肽，构建pGEX—TSOL18-SP原核表达载体，IPTG诱导表达后进行产物的SDS-PAGE及Western blot分析；用改造的纯化蛋白免疫家兔后采集血清，经琼脂双扩散试验检测血清抗体效价．结果表明：TSOL18基因改造后长度为345 bp，共有7个碱基发生突变，但氨基酸序列没有改变，与GenBank收录的TSOL18基因核苷酸序列相似性为97％，氨基酸序列相似性为100％．SDS-PAGE及Western blot分析表明：改造的重组菌诱导后可高效表达可溶性目的蛋白，且TSOL18-SP分子量约为38．7kD，与猪带绦虫六钩蚴阳性血清反应性强；琼脂双扩散法测定免疫兔血清抗体效价为1：32～64，说明表达的TSOL18-SP蛋白具有较好的免疫原性．

关键词：猪带绦虫六钩蚴 TSOL18 基因改造原核表达高免血清

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兔斯氏艾美耳球虫口服DNA疫苗的安全性、稳定性与免疫原性

兔斯氏艾美耳球虫口服DNA疫苗的安全性、稳定性与免疫原性

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：孟庆玲才学鹏乔军骆学农闫鸿斌贾万忠景志忠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室石河子大学动物科技学院

对携带兔斯氏艾美耳球虫MIC-5基因的真核表达质粒asd-pBMIC-5-IL-15的减毒鼠伤寒沙门菌X4550(X4550/asd-pBMIC-5-IL-15)进行了安全性、稳定性与免疫原性试验。结果表明,重组菌在109cfu剂量以下对家兔是安全的;连续培养30代重组菌,质粒... 详细信息

对携带兔斯氏艾美耳球虫MIC-5基因的真核表达质粒asd-pBMIC-5-IL-15的减毒鼠伤寒沙门菌X4550(X4550/asd-pBMIC-5-IL-15)进行了安全性、稳定性与免疫原性试验。结果表明,重组菌在109cfu剂量以下对家兔是安全的;连续培养30代重组菌,质粒可稳定存在于X4550内,具有良好的遗传稳定性;用重组菌2次免疫动物后,既能诱导机体产生抗兔斯氏艾美耳球虫抗体,也能显著增强淋巴细胞增殖水平,抗球虫指数为164.4。试验结果显示,减毒沙门氏菌介导的兔球虫调节型DNA疫苗具有良好的安全性、稳定性和兔疫原性。

关键词：斯氏艾美耳球虫微线蛋白-5基因减毒鼠伤寒沙门氏菌免疫原性

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微卫星标记对高原小型蕨麻猪遗传变异的研究

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甘肃农业大学学报 2008年第2期43卷 22-27页

作者：李军成景志忠路彩霞余四九甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046 广西农业职业技术学院广西南宁530000

用9个微卫星DNA标记对蕨麻猪的等位基因变异、多态信息含量(PIC)、群体杂合度(H)进行了分析.在5个群体中共检测出148个等位基因,蕨麻猪的等位基因数最少,为55个,平均观察杂合度(Ho)为0.836 6,平均期望杂合度(HE)为0.861 5,PIC平均值为0.... 详细信息

用9个微卫星DNA标记对蕨麻猪的等位基因变异、多态信息含量(PIC)、群体杂合度(H)进行了分析.在5个群体中共检测出148个等位基因,蕨麻猪的等位基因数最少,为55个,平均观察杂合度(Ho)为0.836 6,平均期望杂合度(HE)为0.861 5,PIC平均值为0.824 8.结果显示:蕨麻猪群体的杂合度和多态信息含量与兰州、临洮、青海和武威4种猪相比低,但Ho>0.7,HE>0.8,PIC>0.7,仍然比较高,受野猪血缘影响的可能性很大.表明蕨麻猪的杂合程度比较高,遗传变异大,遗传多态性丰富,适应高寒恶劣环境的能力较强,比其它地方猪品种具有更丰富的基因资源.

关键词：蕨麻猪微卫星DNA 杂合度多态信息含量遗传多态性

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