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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2006年第2期24卷 150-152页

作者：景志忠蒙学莲王佩雅窦永喜李辉骆学农郑亚东才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃省动物寄生虫病重点实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室兰州730046

用CpG基序寡核苷酸的重组质粒(CpGDNA)与猪囊尾蚴抗原制备疫苗免疫小鼠,检测小鼠抗囊尾蚴总抗体和IgG2a抗体亚类以及体外诱导免疫脾细胞分泌白介素-4(IL-4)和干扰素-γ(IFN-γ)的含量,观察其免疫佐剂效应。发现CpGDNA重组质粒中无论插入... 详细信息

用CpG基序寡核苷酸的重组质粒(CpGDNA)与猪囊尾蚴抗原制备疫苗免疫小鼠,检测小鼠抗囊尾蚴总抗体和IgG2a抗体亚类以及体外诱导免疫脾细胞分泌白介素-4(IL-4)和干扰素-γ(IFN-γ)的含量,观察其免疫佐剂效应。发现CpGDNA重组质粒中无论插入CpG基序多或少都能增强小鼠抗囊尾蚴总抗体和IgG2a抗体亚类含量,都具有免疫佐剂效应,但其免疫强度有差别,其中CpG2的佐剂效应最强;此外,CpGDNA重组质粒能与铝胶、206佐剂配伍发挥免疫增强协同作用。

关键词： CpG DNA 佐剂效应 Th1型协同作用

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猪带绦虫TSO45W-4BX与猪CD58分子在大肠埃希菌中的联合表达

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2006年第4期24卷 285-289页

作者：骆学农郑亚东窦永喜侯俊琳景志忠才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046

目的以猪CD58为分子佐剂,将CD58基因与猪带绦虫疫苗候选抗原基因TSO45W-4BX联合表达,寻找新型抗猪囊尾蚴疫苗。方法分别以重组质粒pGEM-4B和pGEM-CD58为模板,PCR扩增猪带绦虫TSO45W-4BX基因和猪CD58基因,将TSO45W-4BX与酶切处理的pGEX-4... 详细信息

目的以猪CD58为分子佐剂,将CD58基因与猪带绦虫疫苗候选抗原基因TSO45W-4BX联合表达,寻找新型抗猪囊尾蚴疫苗。方法分别以重组质粒pGEM-4B和pGEM-CD58为模板,PCR扩增猪带绦虫TSO45W-4BX基因和猪CD58基因,将TSO45W-4BX与酶切处理的pGEX-4T-1定向连接,转化大肠埃希菌JM109,重组质粒经鉴定正确后,在其下游酶切插入CD58基因,PCR扩增和测序证明阅读框正确后,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE))和蛋白质印迹法(Westernblotting)分析表达产物的免疫活性。结果pGEX-4BX和pGEX-4BX/CD58分别表达Mr41000和Mr69000的融合蛋白,pGEX-4BX表达产物主要以可溶性形式存在,而pGEX-4BX/CD58却以包涵体形式存在,但两者都能被囊尾蚴病患者血清识别。结论TSO45W-4BX与CD58基因联合表达,TSO45W-4BX仍具有免疫活性。

关键词：猪带绦虫 TS045W-4BX CD58 联合表达

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丝状噬菌体展示技术在寄生虫学中的应用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2006年第4期24卷 304-308页

作者：郭爱疆才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046

本文介绍丝状噬菌体展示技术及其在寄生虫病预防、诊断和治疗中的应用。包括:①噬菌体展示技术概况,丝状噬菌体及其载体的优势;②构建寄生虫噬菌体抗体库、确定抗原决定簇、模拟抗原决定簇用于研制诊断试剂和疫苗等。

关键词：丝状噬菌体噬菌体展示抗原决定簇诊断疫苗

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猪白介素家族重要基因的克隆、表达及其结构与功能预测分析

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中国农业科学 2006年第3期39卷 612-619页

作者：景志忠窦永喜罗启慧陈国华蒙学莲郑亚东骆学农才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046

【目的】克隆、表达和预测分析猪白介素家族重要成员的结构与功能。【方法】以猪白介素基因家族为对象,通过对猪PBMC刺激诱导,提取RNA,采用RT-PCR技术克隆IL-4、IL-6、IL-18等重要功能基因,并进行原核表达和结构与功能分析。【结果】成... 详细信息

【目的】克隆、表达和预测分析猪白介素家族重要成员的结构与功能。【方法】以猪白介素基因家族为对象,通过对猪PBMC刺激诱导,提取RNA,采用RT-PCR技术克隆IL-4、IL-6、IL-18等重要功能基因,并进行原核表达和结构与功能分析。【结果】成功地克隆和表达了IL-4、IL-6和IL-18基因,序列分析发现,克隆的基因与NCBI/GenBank上登载的参考序列的同源性分别为99.25%、99.21%和100%,与其它各物种的基因及其编码蛋白间具有较大的种属差异性;在大肠杆菌中表达的IL-4和IL-6重组蛋白具有较高的生物活性;结构预测表明,这些蛋白分子均含有较多的磷酸化修饰、糖基化修饰(除IL-6)、蛋白激酶以及信号传导结合位点,其中IL-4、IL-6蛋白分子的螺旋化程度较高,均在60%左右,水溶性较低,但这3种蛋白的立体空间结构均为致密的球状,说明该结构特征是其多种生物学功能发挥的基础。【结论】本研究成功地克隆、表达和分析了猪白介素家族的IL-4、IL-6和IL-18等重要分子的结构与功能,为其进一步的生物学功能研究及其应用奠定了基础。

关键词：猪白介素基因家族同源性分析结构预测

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腔阔盘吸虫18S rRNA及亲缘关系分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2006年第5期24卷 345-348页

作者：郑亚东骆学农施程洪宗瑞谦景志忠才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

目的利用分子生物学技术,研究腔阔盘吸虫的分类。方法提取腔阔盘吸虫基因组DNA,利用保守引物,PCR扩增18SrRNA片段并测序。应用DNAStar和MEGA3软件,分析腔阔盘吸虫与其他双腔吸虫18SrRNA的同源性,在此基础上绘制出系统进化树,确定它们的... 详细信息

目的利用分子生物学技术,研究腔阔盘吸虫的分类。方法提取腔阔盘吸虫基因组DNA,利用保守引物,PCR扩增18SrRNA片段并测序。应用DNAStar和MEGA3软件,分析腔阔盘吸虫与其他双腔吸虫18SrRNA的同源性,在此基础上绘制出系统进化树,确定它们的进化关系。结果腔阔盘吸虫和其他双腔吸虫18SrRNA的同源性很高,其中腔阔盘吸虫和支双腔吸虫(***)的差异最大,为2.42%,而与愁体吸虫(***)的差异较小,为1.75%;***和分叶短腺吸虫(***)的进化关系相对较近,差异为1.09%。结论双腔科吸虫的18SrRNA序列非常保守,腔阔盘吸虫和***的亲缘关系最近,而与***和***在进化上关系相对较远。

关键词：腔阔盘吸虫双腔科 18S rRNA 分子分类

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鸡球虫疫苗1号的免疫效果研究

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中国兽医科学 2006年第4期36卷 292-295页

作者：闫鸿斌田广孚贾万忠林青李辉侯俊玲郭爱疆程晓红宋玉霞才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

用鸡球虫1号苗(LCV-1)以1头份/只和5头份/只剂量分别免疫10日龄伊莎褐公雏,并设攻虫对照组和空白对照组。2个免疫组在整个试验过程中没有死亡,其相对增重率分别达96.27%和95.17%,而攻虫对照组的相对增重率为91.21%,与免疫组相比差异显... 详细信息

用鸡球虫1号苗(LCV-1)以1头份/只和5头份/只剂量分别免疫10日龄伊莎褐公雏,并设攻虫对照组和空白对照组。2个免疫组在整个试验过程中没有死亡,其相对增重率分别达96.27%和95.17%,而攻虫对照组的相对增重率为91.21%,与免疫组相比差异显著;2个免疫组攻虫期间平均OPG值分别为1.001×105和1.63×105,而攻虫对照组为2.118×105,2个免疫组与攻虫对照组相比差异极显著;2个免疫组间比较,免疫1组比免疫2组的平均增重高1.1%,差异不显著;免疫期间平均OPG值免疫1组比免疫2组小53.08%,差异极显著,攻虫期间前者比后者小38.59%,差异显著。从总体看,免疫1组的剂量比免疫2组的安全可靠,免疫保护作用更强。

关键词：鸡球虫病 LCV-1疫苗免疫效果

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猪生殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白nsp4基因的表达及其产物的纯化

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中国兽医科学 2006年第9期36卷 687-691页

作者：胡涛才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

根据GenBank中已登录的猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)全基因组序列,设计合成了1对特异性引物,对PRRSV非结构蛋白nsp4基因进行了RT-PCR扩增,将回收的目的基因片段克隆到大肠埃希氏菌表达载体pET28a中,构建了重组质粒pET-nsp4,测序结果... 详细信息

根据GenBank中已登录的猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)全基因组序列,设计合成了1对特异性引物,对PRRSV非结构蛋白nsp4基因进行了RT-PCR扩增,将回收的目的基因片段克隆到大肠埃希氏菌表达载体pET28a中,构建了重组质粒pET-nsp4,测序结果证实了重组质粒pET-nsp4的可靠性。将pET-nsp4转化至大肠埃希氏菌表达菌株BL21(DE3),用IPTG诱导表达,SDS-PAGE结果表明,重组菌可表达分子质量约23 ku的蛋白。经镍离子亲和层析柱(Ni-NTA)纯化,获得了高纯度的重组蛋白,Western-blot分析结果表明,nsp4重组蛋白在大肠埃希氏菌系统中获得了正确表达。

关键词：猪生殖与呼吸综合征病毒 nsp4基因表达纯化

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宿主对绦虫蚴感染免疫应答的研究进展

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中国兽医科学 2006年第2期36卷 166-170页

作者：骆学农郑亚东才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

从绦虫蚴病的细胞免疫及细胞因子、体液免疫、补体介导的免疫应答、绦虫蚴分泌物对宿主反应的抑制几方面阐述了宿主对绦虫蚴感染免疫应答的研究进展。旨在探讨绦虫蚴感染宿主后不同发育阶段细胞免疫和体液免疫的特点、绦虫蚴产生的活性... 详细信息

从绦虫蚴病的细胞免疫及细胞因子、体液免疫、补体介导的免疫应答、绦虫蚴分泌物对宿主反应的抑制几方面阐述了宿主对绦虫蚴感染免疫应答的研究进展。旨在探讨绦虫蚴感染宿主后不同发育阶段细胞免疫和体液免疫的特点、绦虫蚴产生的活性分子MF对宿主免疫应答的调节以及宿主产生的NO和补体对感染绦虫蚴的抑制和杀灭作用。

关键词：绦虫蚴细胞免疫体液免疫

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四川省汶川县两种牛梨形虫的分离鉴定

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中国兽医科学 2006年第12期36卷 972-975页

作者：刘爱红罗建勋殷宏关贵全马米玲党志胜刘志杰高金亮任巧云李有全刘军龙史耀旭樊瑞泉王凡白启中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

自四川省汶川县黄牛体表采集长角血蜱的饥饿或半饱血成虫,带回实验室感染除脾牛。血液涂片检查发现,感染后第10 d,病牛血液中出现一种大型巴贝虫,感染后第24 d,出现一种小杆形的泰勒虫。形态学观察和18 S rRNA基因测序和进化关系分析证... 详细信息

自四川省汶川县黄牛体表采集长角血蜱的饥饿或半饱血成虫,带回实验室感染除脾牛。血液涂片检查发现,感染后第10 d,病牛血液中出现一种大型巴贝虫,感染后第24 d,出现一种小杆形的泰勒虫。形态学观察和18 S rRNA基因测序和进化关系分析证明,它们分别为卵形巴贝虫与瑟氏泰勒虫。

关键词：牛巴贝虫泰勒虫形态学 18 S rRNA基因

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猪细胞因子cDNA表达文库的构建及其基因的克隆鉴定

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畜牧兽医学报 2006年第4期37卷 352-355页

作者：夏小慧景志忠王勤窦永喜中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046 兰州大学生命科学学院兰州730000

为克隆和研究猪细胞因子及相关基因，应用建库试剂盒成功构建了猪细胞因子cDNA表达文库。采取健康猪外周血及淋巴结，分离单个核细胞，经LPS＋PHA联合刺激不同时间后，提取总RNA。将各组样品混合，分离纯化mRNA。反转录合成cDNA第一链... 详细信息

为克隆和研究猪细胞因子及相关基因，应用建库试剂盒成功构建了猪细胞因子cDNA表达文库。采取健康猪外周血及淋巴结，分离单个核细胞，经LPS＋PHA联合刺激不同时间后，提取总RNA。将各组样品混合，分离纯化mRNA。反转录合成cDNA第一链和第二链，与EcoRⅠ和HindⅢ接头连接。酶切和过柱分级分离后，与λSereen载体连接，经体外包装转染*** ER1647宿主菌，进行文库容量测定和扩增。以扩增文库的DNA为模板，利用已知基因引物克隆猪IL-2和IL-4的cDNA并进行测序。结果表明，成功构建了猪细胞因子cDNA文库，文库原始库容量为8×10^5，插入片段在300～2000bp，扩增得到特定的IL-2和IL-4基因，说明文库质量高、代表性强，为进一步从文库中筛选未知细胞因子及相关基因提供了有效的工具。

关键词：细胞因子 cDNA文库基因克隆

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