检索结果-内蒙古大学图书馆

全国人畜共患病学术研讨会

作者：才学鹏袁改玲郑亚东景志忠骆学农贾万忠李辉丁军涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室

本研究选用近年来发展最快和最具潜能的真核表达系统-毕赤酵母,构建了重组表达载体pPIC9K-TSO18,并用G418抗性梯度筛选法,获得多拷贝重组菌株。对重组菌株利用甲醇进行诱导分泌表达,SDS-PAGE和Western-blot分析结果表明,诱导表达的培养... 详细信息

本研究选用近年来发展最快和最具潜能的真核表达系统-毕赤酵母,构建了重组表达载体pPIC9K-TSO18,并用G418抗性梯度筛选法,获得多拷贝重组菌株。对重组菌株利用甲醇进行诱导分泌表达,SDS-PAGE和Western-blot分析结果表明,诱导表达的培养上清中表达出大小为12ku和16ku具有反应活性的重组蛋白。用糖苷内切酶H(Endo-H)对TSO18蛋白分析后表明,目的蛋白进行了适度的糖基化修饰,与理论分析一致。通过对发酵条件如pH、温度和溶氧水平等的调整,重组毕赤酵母在5L发酵罐高细胞密度发酵中表达量高达2.54g/L,用薄层扫描分析,目的蛋白约占培养上清蛋白总量的80%以上。表达的重组蛋白TSO18用SephadexG-100纯化。为提高重组疫苗对本动物的免疫效果,本实验还构建了包含有IFN-γ和IL-4基因的真核表达质粒pcDNA3.1/IFN-γ和pcDNA3.1/IL-4,作为免疫增强剂。为证实重组抗原对本动物的免疫保护效果,将重组抗原与206佐剂结合,制成猪囊虫基因工程疫苗,对猪作了两批免疫试验。试验一在206作为佐剂的基础上,分别加上细胞因子(IL-4和γ-IFN)和CpG DNA作为免疫增强剂,免疫仔猪并攻虫感染。结果显示,实验各组在免疫后均产生了很高的抗体水平,从免疫保护效果来看,用pcDNA3.1/IFN-γ重组质粒作为猪囊虫重组抗原免疫增强剂,抗体检测结果没有明显升高,但是却明显增强了疫苗的保护效果,该组免疫猪减虫率最高达91%。而用pcDNA3.1/IL-4和pUC18/CpG作为免疫增强剂,虽然明显增强了疫苗的抗体水平,但对免疫保护作用没有明显的增强作用,两组减虫率分别为68.7%和67%,这可能与其诱发的免疫机制有关;在实验二中,对免疫剂量和攻虫时间进行了适当的调整,结果从实验猪剖检出的囊虫数分析,免疫组与非免疫组间有显著差异,以非免疫组作对照,免疫猪减虫率由70%上升到94%。结果说明,用毕赤酵母高效表达了猪带绦虫六钩蚴TSO18重组抗原,且减虫率最高达到94%,说明本疫苗具有广阔的应用前景,有望成为预防猪囊虫病的一种新型生物制剂。

关键词：猪囊虫病疫苗侯选基因TSO18 免疫效果

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猪带绦虫/囊虫病的流行现状及防治策略

猪带绦虫/囊虫病的流行现状及防治策略

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全国人畜共患病学术研讨会

作者：骆学农郑亚东才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室

人神经囊尾蚴病(NCC)是一种最严重的囊虫病,是由于食入猪带绦虫病患者排出的绦虫虫卵而导致的粪源性感染。猪带绦虫作为一种主要的人兽共患寄生虫病,人是其唯一的终末宿主,此时人是绦虫病患者,而猪和人都可作为其中间宿主,感染其幼虫而... 详细信息

人神经囊尾蚴病(NCC)是一种最严重的囊虫病,是由于食入猪带绦虫病患者排出的绦虫虫卵而导致的粪源性感染。猪带绦虫作为一种主要的人兽共患寄生虫病,人是其唯一的终末宿主,此时人是绦虫病患者,而猪和人都可作为其中间宿主,感染其幼虫而成为囊虫病患者。理论上讲,考虑到其传播的生物学特性和储存宿主,全球性根除猪带绦虫引起的绦虫病和囊尾蚴病都是可行的。近年来,尽管在绦虫病和猪囊

关键词：囊虫病猪带绦虫绦虫病流行现状防治策略

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规模化猪场支原体肺炎药物防治效果比较研究

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畜禽业（南方养猪） 2006年第6期 37-38页

作者：林青景志忠韩红星中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046 西北农林科技大学动物科技学院

通过对天津、北京、河北猪支原体肺炎的防治调查研究,了解到目前我国养猪场在基础设施方面差,规模比较小且在预防猪支原体肺炎方面做的比较少的特点。提出了主要以预防为主,兼顾治疗的原则,以自繁自养、控制净化为预防措施。治疗时可用... 详细信息

通过对天津、北京、河北猪支原体肺炎的防治调查研究,了解到目前我国养猪场在基础设施方面差,规模比较小且在预防猪支原体肺炎方面做的比较少的特点。提出了主要以预防为主,兼顾治疗的原则,以自繁自养、控制净化为预防措施。治疗时可用支原净、二氟沙星及卡那霉素加土霉素的治疗方案等,同时加强环境和猪场基础设施的建设在防制支原体肺炎方面尤为重要。

关键词：支原体肺炎控制净化自繁自养支原净二氟沙星

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猪带绦虫六钩蚴45W-4B重组蛋白的免疫原性研究

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中国兽医寄生虫病 2006年第3期14卷 1-5页

作者：王福梅骆学农景志忠岳城才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046 新疆农业大学动物医学院乌鲁木齐830052

目的观察猪带绦虫六钩蚴45 W-4B抗原对仔猪的免疫保护作用。方法用IPTG诱导表达融合蛋白GST-45W-4B,用GST柱进行纯化,以Montan ide ISA 206为佐剂制成疫苗免疫仔猪。间接ELISA检测仔猪血清抗45W-4B IgG抗体水平,MTT法进行外周血淋巴细... 详细信息

目的观察猪带绦虫六钩蚴45 W-4B抗原对仔猪的免疫保护作用。方法用IPTG诱导表达融合蛋白GST-45W-4B,用GST柱进行纯化,以Montan ide ISA 206为佐剂制成疫苗免疫仔猪。间接ELISA检测仔猪血清抗45W-4B IgG抗体水平,MTT法进行外周血淋巴细胞殖试验。免疫1个月后全部实验组经口攻击感染25000枚/头猪带绦虫虫卵,攻虫3个月后剖检,计算减虫率及保护率。结果免疫组注射疫苗的第2周起,抗体为阳性,45W-4B组持续升高至第8周,淋巴细胞增殖明显高于未免疫感染组。用该抗原制备的疫苗获得了95%的减虫率和33%的保护率。结论该抗原对猪囊尾蚴病具有很好的免疫保护作用。

关键词：猪带绦虫六钩蚴 45W-4B重组蛋白免疫原性

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鸡γ-干扰素基因的克隆及原核表达

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中国兽药杂志 2006年第7期40卷 12-16页

作者：史耀旭关贵全高金亮党志胜刘志杰刘爱红马米玲任巧云罗建勋殷宏曾巧英甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

参照Digby发表的鸡γ-干扰素的核苷酸序列,设计一对引物,应用RT-PCR技术,从ConA诱导过的鸡脾淋巴细胞中特异性地扩增出大小约为500bp的基因片段。将该扩增基因进行克隆测序,结果表明其序列与Digby报道的CHIFN-γ基因序列的同源性达100%... 详细信息

参照Digby发表的鸡γ-干扰素的核苷酸序列,设计一对引物,应用RT-PCR技术,从ConA诱导过的鸡脾淋巴细胞中特异性地扩增出大小约为500bp的基因片段。将该扩增基因进行克隆测序,结果表明其序列与Digby报道的CHIFN-γ基因序列的同源性达100%。将该基因插入原核表达载体pGEX-4T-1中构建成重组表达载体pGEX-CHIFN-γ,并将其导入大肠杆菌BL21中,诱导表达的重组蛋白经SDS-PAGE分析,分子量约为43ku,表明所克隆的CHIFN-γ基因在原核细胞中得到了表达。

关键词： γ-干扰素鸡克隆表达

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猪囊尾蚴T24基因的克隆、表达及免疫原性分析

猪囊尾蚴T24基因的克隆、表达及免疫原性分析

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全国人畜共患病学术研讨会

作者：李海龙景志忠姜悦平才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室石河子大学动物科技学院

用RT-PCR技术扩增猪囊尾蚴T24免疫原基因,将扩增产物与pGEM-T Easy载体连接,重组质粒经PCR、酶切鉴定后进行测序;构建该基因的pPGEX-4T-1原核表达载体,用IPTG诱导表达,经SDS-PAGE电泳、Western-blotting分析,验证该基因是否表达及目的... 详细信息

用RT-PCR技术扩增猪囊尾蚴T24免疫原基因,将扩增产物与pGEM-T Easy载体连接,重组质粒经PCR、酶切鉴定后进行测序;构建该基因的pPGEX-4T-1原核表达载体,用IPTG诱导表达,经SDS-PAGE电泳、Western-blotting分析,验证该基因是否表达及目的蛋白的反应原性;将所表达的蛋白免疫小鼠,经ELISA测抗,初步验证其免疫原性。结果表明,所克隆的基因片段长度为716 bp,含有1个开放性阅读框架678 bp,编码226个氨基酸,与已报道的猪囊虫T24基因核苷酸序列同源性为100%;表达的融合蛋白大小为40 ku,并能被猪囊虫阳性血清所识别;被免疫小鼠在一周后即检测到血清抗体,30 d即达到较高水平(OD值为1.88),说明该融合蛋白具有较好的免疫原性。

关键词：猪囊尾蚴 T24基因克隆表达免疫原性

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单核细胞增生性李斯特菌PCR诊断方法的建立

单核细胞增生性李斯特菌PCR诊断方法的建立

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全国人畜共患病学术研讨会

作者：张杰骆学农郑亚东伏小平朱小玲中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃农业大学动物医学院

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是李斯特菌属的重要成员,作为一种重要的人畜共患和食源性疾病的病原菌在公共卫生学上有重要意义,如何找到一种快速、敏感特异、合理的检测方法 ,是各国卫生部门目前亟待解决的问题... 详细信息

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是李斯特菌属的重要成员,作为一种重要的人畜共患和食源性疾病的病原菌在公共卫生学上有重要意义,如何找到一种快速、敏感特异、合理的检测方法 ,是各国卫生部门目前亟待解决的问题之一。目前传统单核细胞增生性李斯特菌国标检测法(FDA方法、USDA法、IDF法)具有良好的科学性、重复性,适合我国基层实验室使用能满足食品卫生监督检验的需要,但全过程需时至少6～7d,才能得出明确的诊断结果。因此,在需要及时、快速评价食品中微生物安全性时,通常不被采用。本研究利用分子生物学手段,检测产单核细胞李氏杆菌核酸无须进行分离、生化反应、动物试验,可将检测时间从原来的一周缩短到1d。溶血素O基因(hlyA基因)是单核细胞增生性李斯特菌最重要的毒力基因,它存在于所有的致病性单核细胞增生性李斯特菌中。鉴于此本研究根据GENBANK上发表的单核细胞增生性李斯特菌的hly基因序列进行分析比较,设计特异性引物,扩增hly基因的高度保守的部分片断,预计扩增片断的长度为722bp,建立PCR检测方法①按下列组分配制PCR反应液:模板DNA,1μl;10×PCR Buffer,3μl;2.5mMdNTP Mixture,2μl;上、下游引物(50pmol/μl)各1μl;Taq酶,0.5μl;灭菌无离子水,补至总体积25μl。混匀后置于PCR仪中②按下列条件进行PCR反应:95℃预变性5min后,进行如下循环:94℃,1min;51℃,1min;72℃,1min,35个循环,最后72℃再延伸5min。扩增完成之后,取PCR产物5μl用1.0%的琼脂糖凝胶(含0.5μg/ml EB)电泳,确认PCR扩增产物。如样品检测出722bp的目的片断,可判定为阳性结果;如未检测出722bp目的片断,可判定为阴性。在PCR方法建立的同时进行了敏感性试验、特异性试验、干扰性试验及稳定性试验,试验结果表明该方法的敏感性为10～4cfu/ml,具有较好的敏感性。本试验用金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌、链球菌检测该方法的特异性,结果表明只有单核细胞增生性李斯特菌能扩增出目的片断;同时用上述菌进行干扰试验,敏感性仍能达到10～4fu/ml,结果表明该方法不受其它菌的干扰。此方法经过多次验证,效果非常稳定,具有很好的使用价值。

关键词：产单核细胞李斯特菌聚合酶链式反应

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牛带绦虫病和牛囊尾蚴病防治的研究进展

牛带绦虫病和牛囊尾蚴病防治的研究进展

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全国人畜共患病学术研讨会

作者：林青才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室西北农林科技大学动物科技学院

牛带绦虫病是由牛带绦虫(Taeniarhynchus saginatus)(又名无钩绦虫、肥胖带吻绦虫、牛带吻绦虫)寄生于人的小肠内引起的一种重要的人兽共患绦虫病。分布于世界各地,在东非、中东、近东、中亚诸国和东南亚及拉美诸国流行严重。在我国西... 详细信息

牛带绦虫病是由牛带绦虫(Taeniarhynchus saginatus)(又名无钩绦虫、肥胖带吻绦虫、牛带吻绦虫)寄生于人的小肠内引起的一种重要的人兽共患绦虫病。分布于世界各地,在东非、中东、近东、中亚诸国和东南亚及拉美诸国流行严重。在我国西南的广西、云南、贵州的藏族、苗族及侗族居住区和四川的藏族居住区,西北的新疆、青海、宁夏、甘肃及内蒙古的各少数民族居住区,还有台湾的雅美族、泰雅族等,多是地方性流行。其中绦期幼虫--牛囊尾蚴(Cysticercusbovis)又称牛囊虫,寄生于牛的肌肉内。牛带绦虫为乳白色,背腹扁平如带状,全长有5～10m。牛囊尾蚴呈灰白色,有一个头节。中间宿主主要是牛科动物,人是本虫种的唯一终末宿主。成虫寄生于人的小肠(空肠)中,孕节或虫卵随人的粪便排出体外,污染牧地、饲料、饲草或饮水。当牛吞食虫卵后,六钩蚴从卵内逸出,钻入肠壁,随血流散布于全身横纹肌,发育为成熟囊尾蚴。人吃了生的或半生的含有牛囊尾蚴的牛肉即得到感染。

关键词：牛带绦虫病牛囊尾蚴病居住区

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柔嫩艾美耳球虫杨凌株3-1E基因的克隆、表达与蛋白结构预测

柔嫩艾美耳球虫杨凌株3-1E基因的克隆、表达与蛋白结构预测

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会

作者：翟军军才学鹏林青于三科窦永喜景志忠闫鸿斌田广孚中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室西北农林科技大学动物科技学院中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室西北农林科技大学动物科技学院西北农林科技大学动物科技学院西北农林科技大学动物科技学院西北农林科技大学动物科技学院

应用聚合酶链反应(PCR)技术,从柔嫩艾芙耳球虫(Eimeria tenella)子孢子cDNA表达文库中扩增得到鸡***杨凌株(YL)子孢子表面抗原3-IE基因。序列分析表明,*** YL 3-1E基因的开放阅读框(ORF)为513个碱基,共编码170个氨基酸,与报道的***甘肃... 详细信息

应用聚合酶链反应(PCR)技术,从柔嫩艾芙耳球虫(Eimeria tenella)子孢子cDNA表达文库中扩增得到鸡***杨凌株(YL)子孢子表面抗原3-IE基因。序列分析表明,*** YL 3-1E基因的开放阅读框(ORF)为513个碱基,共编码170个氨基酸,与报道的***甘肃株(GS)3-1E基因相似性为99． 8％,两者推导的氨基酸序列相似性为99．4％;而与文献报道的堆型艾美耳球虫(***)美国株(US) 3-IE基因序列的相似性为98．8％,推导的氨基酸序列相似性为98．8％。利用生物信息学和分子生物学软件对3-1E基因编码的蛋白进行结构预测,结果表明,该蛋白为一结构松散的球状蛋白。将3--1E基因亚克隆到表达载体pGEX-4T-1,构建pGEX-3-1E重组质粒并在大肠杆菌BL21中进行表达,表达产物经SDS-PAGE 分析,表明成功的表达出了分子量为44．7 ku的融合蛋白。该研究为竦虫基因工程疫苗的研制奠定了基础。

关键词： 3-1E基因柔嫩艾美耳球虫克隆表达蛋白结构预测

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