检索结果-内蒙古大学图书馆

中国农学通报 2011年第29期27卷 27-32页

作者：厍大亮李冬中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/国家口蹄疫参考实验室兰州730046

防治口蹄疫的关键是做出及时、准确的诊断。酶联免疫吸附试验(ELISA)有诸多优点,因此不论在实验室还是在田间,都是常用的口蹄疫诊断方法。介绍了传统ELISA和新型ELISA方法的原理、特点及最新研究进展。传统ELISA包括液相阻断ELISA、间接... 详细信息

防治口蹄疫的关键是做出及时、准确的诊断。酶联免疫吸附试验(ELISA)有诸多优点,因此不论在实验室还是在田间,都是常用的口蹄疫诊断方法。介绍了传统ELISA和新型ELISA方法的原理、特点及最新研究进展。传统ELISA包括液相阻断ELISA、间接ELISA、固相竞争ELISA、间接夹心ELISA。新型ELISA包括单克隆抗体ELISA、PCR-ELISA、生物素-亲和素ELISA及Dot-ELISA。ELISA的发展方向应当是既灵敏稳定,又操作方便、易于实现自动化。随着技术的进步,ELISA在临床诊断和流行病学调查中将会有更加广泛的应用。

关键词：口蹄疫诊断方法酶联免疫吸附试验

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核糖体展示口蹄疫单链抗体库的构建

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中国生物工程杂志 2011年第7期31卷 98-103页

作者：杨双马军武周广青林密冯霞刘涛代鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

目的:构建库容量大、多样性好的核糖体展示口蹄疫单链抗体(scFv)库。方法:分离口蹄疫病毒免疫的兔脾细胞,提取总RNA,用RT-PCR扩增兔抗体的重链可变区(VH)基因和轻链可变区(VL)基因,同时扩增作为间隔区的兔抗体Ck基因;采用重叠延伸PCR(简... 详细信息

目的:构建库容量大、多样性好的核糖体展示口蹄疫单链抗体(scFv)库。方法:分离口蹄疫病毒免疫的兔脾细胞,提取总RNA,用RT-PCR扩增兔抗体的重链可变区(VH)基因和轻链可变区(VL)基因,同时扩增作为间隔区的兔抗体Ck基因;采用重叠延伸PCR(简称SOE-PCR)技术连接VH-VL基因,同时引入T7启动子和核糖体结合位点序列,体外构建核糖体展示scFv库模板,连接pMD18-T载体转化*** DH5α大肠杆菌,挑取阳性克隆测序以鉴定scFv组装。结果:成功构建了库容量达8.21×1013的兔源口蹄疫核糖体展示scFv库。结论:构建的大容量兔源性口蹄疫核糖体展示抗体库可以成为进一步筛选特异性口蹄疫单链抗体的实验平台,为开发诊断性口蹄疫单链抗体奠定了很好的实验基础。

关键词：核糖体展示技术重叠延伸PCR 单链抗体库口蹄疫病毒

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山羊痘病毒RPO30基因绿色荧光蛋白质粒的构建及融合表达

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中国兽医科学 2011年第1期41卷 48-52页

作者：赵志荀吴国华颜新敏崔力凡李健朱海霞张强中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

为了研究针对山羊痘病毒RPO30的siRNAs的干扰效果,构建了RPO30基因与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的融合表达质粒,并在BHK-21细胞中表达。通过对RPO30基因进行PCR扩增,克隆入表达载体pEGFP-N1,并进行双酶切及测序鉴定;将阳性重组质粒转... 详细信息

为了研究针对山羊痘病毒RPO30的siRNAs的干扰效果,构建了RPO30基因与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的融合表达质粒,并在BHK-21细胞中表达。通过对RPO30基因进行PCR扩增,克隆入表达载体pEGFP-N1,并进行双酶切及测序鉴定;将阳性重组质粒转染BHK-21细胞,检测绿色荧光蛋白的表达和RPO30基因的转录水平。结果显示,获得的目的基因片段大小与预期结果相符,该基因与Gen-Bank数据库中RPO30基因序列的同源性为97%。荧光显微镜和流式细胞仪均检测到细胞内绿色荧光蛋白的表达,转染后第48小时,阳性细胞率达到80.1%;经RT-PCR检测,细胞内有RPO30基因的转录。证实,已成功构建了RPO30基因与EGFP基因的融合表达质粒,并在BHK-21细胞中获得了表达。

关键词：山羊痘病毒 RPO30基因增强型绿色荧光蛋白融合表达

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山羊支原体山羊肺炎亚种湖北株的鉴定及其外膜蛋白的免疫原性研究

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畜牧兽医学报 2011年第4期42卷 593-599页

作者：赵萍郭晗贺英高鹏程张念章逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

从湖北某地山羊肺脏中分离支原体,经多次克隆纯化后进行生化试验、显微镜观察、PCR及酶切分析、基因特征鉴定以及用动物致病性试验对该菌株进行了鉴定,命名为GH2,进一步通过免疫印迹对GH2株外膜蛋白及GH2株全菌蛋白免疫原性进行分析,并... 详细信息

从湖北某地山羊肺脏中分离支原体,经多次克隆纯化后进行生化试验、显微镜观察、PCR及酶切分析、基因特征鉴定以及用动物致病性试验对该菌株进行了鉴定,命名为GH2,进一步通过免疫印迹对GH2株外膜蛋白及GH2株全菌蛋白免疫原性进行分析,并用抗Y98血清和抗PG3血清进行比较,筛选GH2株特异性的外膜蛋白,结果表明GH2株为山羊支原体山羊肺炎亚种,存在于GH2外膜蛋白中的相对分子质量大约为60和49.7ku的蛋白可能是其主要的免疫原性蛋白,也是GH2株区别于丝状支原体山羊亚种标准株PG3和绵羊肺炎支原体标准株的主要特异性抗原。这一结果为山羊支原体山羊肺炎亚种的诊断和疫苗研制提供了良好的理论基础。

关键词：山羊支原体山羊肺炎亚种鉴定外膜蛋白免疫原性

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Asia1型口蹄疫病毒含RSD受体识别位点感染性克隆的构建与病毒拯救

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畜牧兽医学报 2011年第2期42卷 210-216页

作者：李平花白兴文孙普卢曾军曹伟军谢宝霞吴润殷宏刘在新甘肃农业大学动物医学院兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV)具有高的突变率和很强的适应性,在环境条件变化时会迅速从准种种群中选择变异株来适应新的环境,这些变异株包括在RGD受体结合基序内部或附近氨基酸的替换。FMDV Asia1/JS/China/05株经不... 详细信息

口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV)具有高的突变率和很强的适应性,在环境条件变化时会迅速从准种种群中选择变异株来适应新的环境,这些变异株包括在RGD受体结合基序内部或附近氨基酸的替换。FMDV Asia1/JS/China/05株经不同宿主传代后产生含RSD和RDD受体识别基序的变异株,为了研究含RDD受体识别基序的FMDV在受体结合位点内1个氨基酸的变化是否影响感染性病毒子的产生,作者利用已构建的含RDD受体结合位点的FMDV Asia1/JS/China/05株的全长感染性cDNA克隆为骨架,采用融合PCR方法,构建了该毒株含RSD受体位点的全长cDNA克隆pFMDV-RSD。线性化的pFMDV-RSD重组质粒和表达T7RNA聚合酶的真核质粒pcDNAT7P共转染BHK-21细胞,56 h后可观察到典型的FMDV致细胞病变效应。对收获的病毒分别进行序列测定、间接免疫荧光试验、电子显微镜观察和乳鼠致病性分析,结果证实该毒株细胞受体位点1个氨基酸的替换不影响活病毒的拯救。该试验为进一步研究含RSD受体结合位点FMDV的生物学特性奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒 RSD受体结合位点感染性cDNA克隆病毒拯救

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蛋白质组学在动物医学中的应用研究进展

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动物医学进展 2011年第6期32卷 139-141页

作者：刘永杰张克山卢国栋尚佑军刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

利用蛋白质组学技术研究动物疾病,能发现与疾病发生,发展和转归过程密切相关的蛋白质及其变化特征,为相关疫苗和新型药物的开发提供新的途径。论文从蛋白质组在动物病毒性疾病、细菌性疾病、寄生虫病及其他营养代谢病方面的研究进展进... 详细信息

利用蛋白质组学技术研究动物疾病,能发现与疾病发生,发展和转归过程密切相关的蛋白质及其变化特征,为相关疫苗和新型药物的开发提供新的途径。论文从蛋白质组在动物病毒性疾病、细菌性疾病、寄生虫病及其他营养代谢病方面的研究进展进行综述。

关键词：蛋白质组学动物医学应用

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实时荧光定量PCR筛选牛源整联蛋白αv基因的siRNA片段

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动物医学进展 2011年第3期32卷 56-60页

作者：张国峰独军政常惠芸薛霜骆继怀中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

设计并合成三条针对牛口蹄疫病毒(FMDV)整联蛋白受体αv亚基基因的特异性干扰小RNA(SiRNA)片段,将其转染至本身表达整联蛋白受体αv亚基基因的MDBK细胞。分别在转染后36 h和48 h收集细胞,提取细胞总RNA并反转录为cDNA。应用SYBR Green... 详细信息

设计并合成三条针对牛口蹄疫病毒(FMDV)整联蛋白受体αv亚基基因的特异性干扰小RNA(SiRNA)片段,将其转染至本身表达整联蛋白受体αv亚基基因的MDBK细胞。分别在转染后36 h和48 h收集细胞,提取细胞总RNA并反转录为cDNA。应用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR的方法检测3个siRNA片段的干扰效果,筛选出对整联蛋白αv基因具有高效干扰效果的小RNA片段。为建立抗口蹄疫病毒牛新品种培育的RNA干扰转基因技术平台奠定了基础。

关键词：实时荧光定量PCR 整联蛋白 RNA干扰 SYBR GreenⅠ

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口蹄疫病毒免疫逃避机制研究进展

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畜牧与兽医 2011年第7期43卷 96-99页

作者：马延滨高闪电丛国正常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

口蹄疫(FMD)是偶蹄动物的一种剧烈的接触传染性疾病。病毒可以进化出不同的方法逃避机体免疫系统的清除,处于一种潜在感染状态,这种现象叫做免疫逃避。免疫逃避可以阻断机体的先天性免疫应答以及获得性免疫应答,这主要是通过诱导免疫细... 详细信息

口蹄疫(FMD)是偶蹄动物的一种剧烈的接触传染性疾病。病毒可以进化出不同的方法逃避机体免疫系统的清除,处于一种潜在感染状态,这种现象叫做免疫逃避。免疫逃避可以阻断机体的先天性免疫应答以及获得性免疫应答,这主要是通过诱导免疫细胞凋亡、抑制免疫效应分子功能、抑制抗原呈递实现的。全面深入地研究口蹄疫发病及免疫机制将有助于高保护力疫苗的研制,同时为口蹄疫的生物疗法提供可能。

关键词： FMDV 免疫抑制细胞凋亡免疫逃避

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山羊支原体山羊肺炎亚种甘肃株的分离及鉴定

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中国兽医学报 2011年第3期31卷 352-356页

作者：郭晗储岳峰赵萍高鹏程贺英樊祜卿冯小明逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

2007年甘肃某地羊场山羊发生以呼吸困难、咳嗽和胸膜肺炎为特征的呼吸道传染病,经临床诊断为羊支原体性肺炎。用改良的Thiaucourt's培养基对病山羊的肺组织进行病原分离,成功分离到1株支原体M1601,经菌落形态观察、生化试验、PCR鉴... 详细信息

2007年甘肃某地羊场山羊发生以呼吸困难、咳嗽和胸膜肺炎为特征的呼吸道传染病,经临床诊断为羊支原体性肺炎。用改良的Thiaucourt's培养基对病山羊的肺组织进行病原分离,成功分离到1株支原体M1601,经菌落形态观察、生化试验、PCR鉴定、以16S rRNA基因序列构建的分子进化树分析和动物致病性试验,证明该分离株属于山羊支原体山羊肺炎亚种。

关键词：山羊支原体山羊肺炎亚种山羊传染性胸膜肺炎 PCR鉴定 16S rRNA

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筛选细菌毒力基因方法的研究进展

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中国兽医学报 2011年第2期31卷 288-291页

作者：张念章储岳峰贺英逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

细菌的致病过程涉及多个毒力基因表达产物的相互作用。然而,随着越来越多的微生物基因组测序工作的相继或即将完成,对其毒力基因的研究却相对滞后。这不但影响了致病机理等基础研究的进展,还成为制约抗菌药物和疫苗研发的瓶颈。本文从... 详细信息

细菌的致病过程涉及多个毒力基因表达产物的相互作用。然而,随着越来越多的微生物基因组测序工作的相继或即将完成,对其毒力基因的研究却相对滞后。这不但影响了致病机理等基础研究的进展,还成为制约抗菌药物和疫苗研发的瓶颈。本文从生物信息学、筛选差异表达基因等4个方面介绍了筛选细菌毒力基因的方法及其应用,并综合了研究致病菌与宿主间相互作用关系的方法。为发现和研究致病菌新的毒力因子,理顺病原与宿主关系开拓了思路。

关键词：细菌毒力基因筛选方法应用

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